【摘要】：[目的]分析膽囊切除術(shù)后綜合征患者與健康人群及膽囊切除術(shù)后無癥狀患者腸道微生物主要菌落信息是否存在差異,探討可能導(dǎo)致膽囊切除術(shù)后綜合征的發(fā)病機(jī)制。[方法]1、采用 CTAB(HexadecyltrimethylammoniumBromide,十六烷基三甲基溴化銨)方法對8例膽囊切除術(shù)后綜合征患者、8例健康人群及8例膽囊切除術(shù)后無癥狀患者新鮮糞便微生物的基因組DNA進(jìn)行提取。2、選取細(xì)胞核糖體小亞基上的16SrRNA基因的高變異區(qū)域,使用帶Barcode(條帶技術(shù))的特異引物,使用混合GC緩沖的高保真PCR(HFPCR,High-Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer)和高保真酶和高效酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增處理。3、對PCR擴(kuò)增的回收產(chǎn)物使用建庫試劑盒(TruSeq(?)DNA PCR-Free Sample Preparation Kit)進(jìn)行基因文庫構(gòu)建,并使用高通量DNA測序技術(shù)(HiSeq2500,High-through Sequencing)進(jìn)行上機(jī)測序。4、對測序所取得的基因數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行OTU(Operational Taxonomic Units)聚類和微生物物種注釋統(tǒng)計(jì),依據(jù)OTU聚類和物種注釋的結(jié)果進(jìn)一步行樣品復(fù)雜度分析和多樣品比較分析。[結(jié)果]1、對24例糞便樣品目標(biāo)基因組DNA區(qū)域PCR擴(kuò)增后的OUT數(shù)據(jù)聚類和物種注釋結(jié)果進(jìn)行綜合統(tǒng)計(jì),能用于構(gòu)建OTUs并且獲得注釋信息的Tags數(shù)目均超過97%。2、腸道糞便微生物菌群中,相對豐富度處于前10位的菌群依次是:厚壁菌、擬桿菌、變形菌、疣微菌、放線菌、藍(lán)藻菌、軟壁菌、浮霉菌、酸桿菌、芽單胞菌。3、膽囊切除術(shù)后綜合征患者組、健康人群組及膽囊切除術(shù)后無癥狀患者組中各組的不同樣本間群落結(jié)構(gòu)相似度較高。4、與健康人群組相比,膽囊切除術(shù)后綜合征患者組的腸道微生物主要菌落疣微菌(Verrucomicrobia)、擬桿菌(Bacteroidetes)和厚壁桿菌(Firmicutes)的菌群豐度值差異性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而變形菌(Proteobacteria)菌落信息差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0100)。5、與膽囊切除術(shù)后無癥狀患者組相比,膽囊切除術(shù)后綜合征患者組的腸道微生物主要菌落疣微菌(Verrucomicrobia)、擬桿菌(Bacteroidetes)、厚壁桿菌(Firmicutes)和變形菌(Proteobacteria)的菌群豐度值差異性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。[結(jié)論]1、與膽囊切除術(shù)后無癥狀患者組相比,膽囊切除術(shù)后綜合征患者組的腸道微生物主要菌落豐度值差異性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、與健康人群相比,膽囊切除術(shù)后綜合征患者腸道微生物變形菌(Proteobacteria)的含量較高。3、膽囊切除術(shù)后綜合征患者糞便中變形菌豐度升高可能是導(dǎo)致膽囊切除術(shù)后綜合征患者慢性腹瀉、腹痛的致病因素。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R657.4
【圖文】：

根據(jù)２４例研宄對象糞便中細(xì)菌微生物物種注釋結(jié)果，選�。玻磦�樣品在門逡逑水平（Ｐｈｙｌｕｍ）上最大豐度排名的前１０物種注釋數(shù)據(jù)，生成物種相對豐度柱形逡逑累加圖。以２４例糞便樣品的門水平物種相對豐度柱形圖為例展示（圖２），可直逡逑觀查看２４例糞便樣品基因序列在門水平上，明顯對比出相對豐度較高的物種。逡逑在２４例樣品糞便微生物菌群中，相對豐度值處于前１０位的菌群依次是：厚壁菌、逡逑擬桿菌、變形菌、疣微菌、放線菌、藍(lán)藻菌、軟壁菌、浮霉菌、酸桿菌、芽單逡逑胞菌。逡逑１５逡逑

在ＲＳ１組中含量較ＲＳ２、ＲＳ３組高（圖３）。逡逑ｔｅｍａｒｙＰ＇0ｔ邐Ｆｉｒ．ｉｃｕ．ｅｓ逡逑拳邋Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ逡逑＃邋Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ逡逑／邋＼邐？邋Ｖｅｒｍｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ逡逑／邐＼邐？邋Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ逡逑／邐＼邋＾邐馨邋Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ逡逑■邋Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ逡逑／邐＼邐Ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｔｅｓ逡逑／邐＼邋？0邐？邋Ａｃｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ逡逑參：：７b0八逡逑ＲＳ１邐眾邐分邐４邐ｃ，．邐ＲＳ２逡逑0邋0邋0邋0逡逑圖３邐三組樣本中以糞便微生物菌群門水平的三元相圖逡逑注：ＲＳ１：膽囊切除術(shù)后綜合征患者組；ＲＳ２：膽囊切除術(shù)后無癥狀患者組；逡逑ＲＳ３：健康人群組。Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ：厚壁菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ：擬桿菌、Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ：逡逑變形菌、Ｖｅｒｍｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ：撫微菌、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ：放線菌、Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ：逡逑藍(lán)藻菌、Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ：軟壁菌、Ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｔｅｓ：浮霉菌、Ａｃｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ：酸逡逑桿菌、Ｇｅｍｍａｔｉｍｏｎａｄｅｔｅｓ：芽單胞菌。逡逑圖中三個頂點(diǎn)分別代表三個分組樣本，一個圓餅代表一個物種門類，圓餅大逡逑小代表物種相對豐度，圓餅與各頂點(diǎn)的距離表示此物種在這個分組中的含量逡逑比例。逡逑５邋２４例研宄對象糞便微生物基因ＤＮＡ樣品的ＰＣｏＡ分析逡逑主坐標(biāo)分析（ＰＣｏＡ，Ｐｒｉｎｃｉｐａｌ邋Ｃｏ－ｏｒｄｉｎａｔｅｓ邋Ａｎａｌｙｓｉｓ）是通過一系列的特征逡逑１７逡逑

結(jié)果展示如圖４，逡逑從圖中可以看到：同一組間的各樣本基本傾向于聚集在一起，而不同組間的樣本逡逑相距較遠(yuǎn)。逡逑邐邐邋ＰＣｏＡ邋？邋ＰＣＩ邋ｖｓ邋ＰＣ２邐邐逡逑０邋３邋＇邐ＲＳ１－７逡逑■逡逑。．２邋．邐ＲＳ１，逡逑■逡逑ＲＳ１．８逡逑■逡逑Ｏ．１邋．邐ＲＳ，６逡逑ＲＳ１．１邐＊逡逑■逡逑？邐５邋Ｒｒ邋：ＥＲｒ邋Ｒｒ逡逑！。，－野８邐■邐－ＲＳ１逡逑－邐Ｒ？６邐？Ｓ２．５邐ＲＳ．２８邐ＡｒＩＩ逡逑ｓ邐？逡逑＂邐Ｒ＾４邐ＰＳ２．３逡逑－０．１－邋▲逡逑－０．２逡逑ＲＳ３．７逡逑？０．３邋？邐▲逡逑０１邐ＰＣ１°邋１９．５８％）邐０１邐0＇２逡逑圖４基于Ｗｅｉｇｈｔｅｄ邋Ｕｎｉｆｒａｃ距離ＰＣｏＡ分析圖逡逑注：ＲＳＩ：膽囊切除術(shù)后綜合征患者組；ＲＳ２：膽囊切除術(shù)后無癥狀患者組；逡逑ＲＳ３：健康人群組逡逑６邋２４例研究對象糞便微生物基因ＤＮＡ樣品的ＵＰＧＭＡ聚類樹逡逑ＵＰＧＭＡ是一種較為常用的聚類分析方法。為了研究不同樣品間的相似性，逡逑可以通過對樣品進(jìn)行聚類分析，構(gòu)建樣品的聚類樹。對２４例研宄對象糞便微生逡逑物基因ＤＮＡ樣品的聚類結(jié)果與各樣品在門水平上的物種相對豐度整合展示（見圖逡逑５）。從圖５直觀看出，與健康人群組相比，膽囊切除術(shù)后綜合征患者組的腸道微逡逑生物菌落信息存在差異：變形菌（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）和撫微菌（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）逡逑豐富度升氋

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2795452