【摘要】：目的:乳腺癌是常見的女性惡性腫瘤之一,其發(fā)病率呈逐年增加的趨勢,并且趨于年輕化方向發(fā)展,乳腺癌嚴(yán)重的威脅著女性身體健康。三陰性乳腺癌(Triplenegative breast cancer,TNBC)是一類雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人表皮生長因子受體(Her-2)均是陰性的一類特殊類型的乳腺癌。據(jù)報(bào)道,全世界每年約有100萬新發(fā)乳腺癌病例,其中有接近170,000(12-20%)例患者屬于TNBC表型。與其他類型的乳腺癌相比較,TNBC最常見于年輕女性,臨床上其侵襲程度更高,預(yù)后療效更差。雖然TNBC對(duì)化療較為敏感,但易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移,且對(duì)于內(nèi)分泌和Her-2靶向治療無效。由于疾病本身具有異質(zhì)性以及TNBC分子表達(dá)特征的復(fù)雜性,使得TNBC缺乏相應(yīng)的靶向治療。乳腺癌BT549細(xì)胞屬于三陰性乳腺癌細(xì)胞系,采用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)敲減乳腺癌BT549細(xì)胞系中RRS1基因的表達(dá)量,并觀察核糖體合成調(diào)控因子1(Regulator of ribosome synthesis 1,RRS1)基因表達(dá)量的降低對(duì)BT549細(xì)胞的功能影響及分子機(jī)制的研究。方法:(1)體外培養(yǎng)人乳腺癌BT549細(xì)胞和正常乳腺細(xì)胞HMEC,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q PCR)及Western Blotting(WB)法檢測乳腺癌BT549細(xì)胞及正常乳腺細(xì)胞HMEC中RRS1在m RNA及蛋白水平的表達(dá)量。(2)采用慢病毒感染BT549細(xì)胞,敲減RRS1基因的表達(dá)量,并使用q PCR和WB法檢測RRS1基因的敲減效率。(3)采用MTT法檢測細(xì)胞的增殖活力;DAPI染色、Caspase3,7、FCM法檢測BT549細(xì)胞RRS1基因敲減后凋亡水平的變化;Transwell和侵襲法檢測RRS1基因敲減后BT549細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力,并采用WB法檢測RRS1基因敲減后對(duì)BT549細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的影響。結(jié)果:(1)乳腺癌BT549細(xì)胞中RRS1基因m RNA及蛋白的表達(dá)水平均高于正常乳腺HMEC細(xì)胞(P0.01)。(2)RRS1-sh RNA轉(zhuǎn)入BT549細(xì)胞后,RRS1基因m RNA和蛋白的表達(dá)水平明顯低于陰性對(duì)照組(P0.01)。(3)RRS1基因被敲減后經(jīng)MTT檢測其細(xì)胞活力明顯下降(P0.01);細(xì)胞周期被阻滯在G2期(P0.01),細(xì)胞凋亡小體明顯增加(P0.01),Caspase3發(fā)光強(qiáng)度明顯提高(P0.01),細(xì)胞早期凋亡明顯增多(P0.05);侵襲轉(zhuǎn)移能力降低(P0.05);與凋亡相關(guān)的蛋白p53明顯升高(P0.01),MDM2表達(dá)明顯降低(P0.05),凋亡蛋白bax表達(dá)量明顯提高(P0.01),且致癌蛋白bcl-2表達(dá)量明顯降低(P0.05)。結(jié)論:RRS1基因在BT549乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá),采用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)沉默RRS1基因后,乳腺癌細(xì)胞BT549的增殖、遷移及侵襲能力明顯降低,凋亡水平明顯升高。RRS1作為一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的乳腺癌相關(guān)基因,與乳腺癌的增殖、凋亡、遷移侵襲功能相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2794056