【摘要】：乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤,而轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致腫瘤高死亡率的元兇。非編碼RNA在調(diào)控細(xì)胞各種生理過程以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。近年來的研究表明非編碼RNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要功能。本研究旨在尋找與乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的非編碼RNA,并對(duì)其功能與機(jī)制進(jìn)行深入研究,探索乳腺癌轉(zhuǎn)移的病理機(jī)制。在第一部分中,我們利用RNA高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)三陰型乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231細(xì)胞及其肺部高度轉(zhuǎn)移的亞型MDA-MB-231-LM2細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行了檢測(cè)。在第一種篩選方法中,以非轉(zhuǎn)移的MCF-7細(xì)胞被作為測(cè)序的對(duì)照,鑒定出14個(gè)在LM2細(xì)胞中上調(diào)的LncRNA。利用第二種篩選方法,我們鑒定出7個(gè)在LM2細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)的LncRNA與8個(gè)表達(dá)上調(diào)的LncRNA以備進(jìn)行下一步的生物學(xué)功能驗(yàn)證。以細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)作為主要篩選手段來檢測(cè)上述15個(gè)LncRNA對(duì)于細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力的影響。結(jié)果顯示在LM2細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)的LncRNA,ARHGAP5-AS1(NR_027263)可以負(fù)向調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的遷移,因此,我們對(duì)其抑制細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力的分子機(jī)制進(jìn)行深入研究。在第二部分中,我們對(duì)Lnc-ARHGAP5-AS1的功能進(jìn)行了擴(kuò)展研究,發(fā)現(xiàn)Lnc-ARHGAP5-AS1抑制乳腺癌細(xì)胞遷移,且抑制乳腺癌細(xì)胞中應(yīng)力纖維的形成,但對(duì)于細(xì)胞的增殖能力以及克隆形成能力沒有顯著影響。此后,利用蛋白相互作用芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)了與Lnc-ARHGAP5-AS1相互作用的蛋白分子——SMAD7。通過RNA pull down實(shí)驗(yàn)與RNA免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)了Lnc-ARHGAP5-AS1與SMAD7的相互作用。接下來,我們檢測(cè)了Lnc-ARHGAP5-AS1對(duì)SMAD7的表達(dá)的影響。結(jié)果表明,Lnc-ARHGAP5-AS1對(duì)于SMAD7的mRNA沒有影響,但使SMAD7的蛋白水平下調(diào),提示Lnc-ARHGAP5-AS1可能影響SMAD7的降解。利用新生蛋白合成抑制劑CHX與蛋白酶體降解抑制劑MG132處理細(xì)胞證明Lnc-ARHGAP5-AS1可能通過蛋白酶體途徑抑制SMAD7的降解。再者,過表達(dá)Lnc-ARHGAP5-AS1可以抑制SMAD7的泛素化水平,初步證明了Lnc-ARHGAP5-AS1可以通過蛋白酶體途徑穩(wěn)定SMAD7。然而,不管是敲減還是過表達(dá)Lnc-ARHGAP5-AS1對(duì)于SMAD7在細(xì)胞中的分布趨勢(shì)都沒有影響,但是Lnc-ARHGAP5-AS1可以影響TGF-β信號(hào)通路的活化。敲減SMAD7可以模擬敲減Lnc-ARHGAP5-AS1的生物學(xué)功能,即抑制細(xì)胞遷移和應(yīng)力纖維的形成,提示了Lnc-ARHGAP5-AS1可能通過影響SMAD7來發(fā)揮其生物學(xué)功能。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.9
【圖文】：

梭狀間質(zhì)樣細(xì)胞的表型，侵襲、遷移運(yùn)動(dòng)能力大幅增加但分裂能力減弱[10]。這些細(xì)胞以破壞細(xì)胞外基質(zhì)（Extra-cellular Matrix, ECM）的方式在 ECM 中朝向血管或淋巴管移動(dòng)[7]。這些脫離了原位腫瘤的細(xì)胞第一個(gè)需要跨越的障礙是緊密排列的血管內(nèi)皮細(xì)胞。有報(bào)道指出，血液中的白細(xì)胞與血小板可以通過 L-選擇素或 P-選擇素與腫瘤細(xì)胞形成復(fù)合體，幫助腫瘤細(xì)胞內(nèi)滲進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)[71]。循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulating Tumor Cells, CTCs）外滲出血管的機(jī)制是通過上調(diào)負(fù)責(zé)血管結(jié)構(gòu)的一些基因的表達(dá)來使血管結(jié)構(gòu)重排并增加滲透性，例如 ANGPTL4基因[8]。到達(dá)遠(yuǎn)端器官的腫瘤細(xì)胞如何在于原位器官大不相同的環(huán)境中定植生長(zhǎng)并發(fā)展成為腫瘤轉(zhuǎn)移灶呢？目前的解釋是 種子和土壤‖假說，當(dāng)微環(huán)境適宜的時(shí)候，腫瘤細(xì)胞（種子）在遠(yuǎn)端器官（土壤）定植生長(zhǎng)。那么這種適宜的微環(huán)境的形成是由原位腫瘤所誘導(dǎo)形成的，為經(jīng)過循環(huán)系統(tǒng)到達(dá)遠(yuǎn)端器官的腫瘤細(xì)胞提供生長(zhǎng)支持的微環(huán)境，稱之為 預(yù)轉(zhuǎn)移灶‖（Pre-metastatic niche）[11]。

博士學(xué)位論文 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 王辰龍無法通過 RISC 復(fù)合物與靶基因結(jié)合，從而使其靶基因的表達(dá)上調(diào)來發(fā)揮生物學(xué)效 應(yīng) （ 圖 2C ）。 例 如 ， 在 腎 癌 細(xì) 胞 耐 藥 株 中 被 發(fā) 現(xiàn) 的 長(zhǎng) 鏈 非 編 碼RNA——LncARSR，通過吸附 miR-34a 與 miR-449 來促進(jìn)酪氨酸激酶受體 AXL與 c-MET 的表達(dá)，從而促進(jìn)腎癌細(xì)胞對(duì)舒尼替尼的耐藥性[24]。另一個(gè)例子是PTEN 假基因 PTENP1 的轉(zhuǎn)錄，雖然 PTENP1 被翻譯成蛋白，但其可以結(jié)合靶向PTEN mRNA 且負(fù)向調(diào)控 PTEN 表達(dá)的一些 microRNA，最終結(jié)果可以使 PTEN的蛋白表達(dá)上調(diào)[25]。

SMAD7的結(jié)構(gòu)

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10 胡蘊(yùn)慧;李雙靜;Ernesto Yag

本文編號(hào)：2790828