【摘要】：乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤,而轉(zhuǎn)移是導致腫瘤高死亡率的元兇。非編碼RNA在調(diào)控細胞各種生理過程以及信號轉(zhuǎn)導中發(fā)揮重要作用。近年來的研究表明非編碼RNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要功能。本研究旨在尋找與乳腺癌轉(zhuǎn)移相關的非編碼RNA,并對其功能與機制進行深入研究,探索乳腺癌轉(zhuǎn)移的病理機制。在第一部分中,我們利用RNA高通量測序技術對三陰型乳腺癌細胞系MDA-MB-231細胞及其肺部高度轉(zhuǎn)移的亞型MDA-MB-231-LM2細胞的轉(zhuǎn)錄組進行了檢測。在第一種篩選方法中,以非轉(zhuǎn)移的MCF-7細胞被作為測序的對照,鑒定出14個在LM2細胞中上調(diào)的LncRNA。利用第二種篩選方法,我們鑒定出7個在LM2細胞中表達下調(diào)的LncRNA與8個表達上調(diào)的LncRNA以備進行下一步的生物學功能驗證。以細胞遷移實驗作為主要篩選手段來檢測上述15個LncRNA對于細胞遷移運動能力的影響。結(jié)果顯示在LM2細胞中表達下調(diào)的LncRNA,ARHGAP5-AS1(NR_027263)可以負向調(diào)控乳腺癌細胞的遷移,因此,我們對其抑制細胞遷移運動能力的分子機制進行深入研究。在第二部分中,我們對Lnc-ARHGAP5-AS1的功能進行了擴展研究,發(fā)現(xiàn)Lnc-ARHGAP5-AS1抑制乳腺癌細胞遷移,且抑制乳腺癌細胞中應力纖維的形成,但對于細胞的增殖能力以及克隆形成能力沒有顯著影響。此后,利用蛋白相互作用芯片技術發(fā)現(xiàn)了與Lnc-ARHGAP5-AS1相互作用的蛋白分子——SMAD7。通過RNA pull down實驗與RNA免疫共沉淀實驗證實了Lnc-ARHGAP5-AS1與SMAD7的相互作用。接下來,我們檢測了Lnc-ARHGAP5-AS1對SMAD7的表達的影響。結(jié)果表明,Lnc-ARHGAP5-AS1對于SMAD7的mRNA沒有影響,但使SMAD7的蛋白水平下調(diào),提示Lnc-ARHGAP5-AS1可能影響SMAD7的降解。利用新生蛋白合成抑制劑CHX與蛋白酶體降解抑制劑MG132處理細胞證明Lnc-ARHGAP5-AS1可能通過蛋白酶體途徑抑制SMAD7的降解。再者,過表達Lnc-ARHGAP5-AS1可以抑制SMAD7的泛素化水平,初步證明了Lnc-ARHGAP5-AS1可以通過蛋白酶體途徑穩(wěn)定SMAD7。然而,不管是敲減還是過表達Lnc-ARHGAP5-AS1對于SMAD7在細胞中的分布趨勢都沒有影響,但是Lnc-ARHGAP5-AS1可以影響TGF-β信號通路的活化。敲減SMAD7可以模擬敲減Lnc-ARHGAP5-AS1的生物學功能,即抑制細胞遷移和應力纖維的形成,提示了Lnc-ARHGAP5-AS1可能通過影響SMAD7來發(fā)揮其生物學功能。
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9
【圖文】：

梭狀間質(zhì)樣細胞的表型，侵襲、遷移運動能力大幅增加但分裂能力減弱[10]。這些細胞以破壞細胞外基質(zhì)（Extra-cellular Matrix, ECM）的方式在 ECM 中朝向血管或淋巴管移動[7]。這些脫離了原位腫瘤的細胞第一個需要跨越的障礙是緊密排列的血管內(nèi)皮細胞。有報道指出，血液中的白細胞與血小板可以通過 L-選擇素或 P-選擇素與腫瘤細胞形成復合體，幫助腫瘤細胞內(nèi)滲進入血液循環(huán)系統(tǒng)[71]。循環(huán)腫瘤細胞（Circulating Tumor Cells, CTCs）外滲出血管的機制是通過上調(diào)負責血管結(jié)構(gòu)的一些基因的表達來使血管結(jié)構(gòu)重排并增加滲透性，例如 ANGPTL4基因[8]。到達遠端器官的腫瘤細胞如何在于原位器官大不相同的環(huán)境中定植生長并發(fā)展成為腫瘤轉(zhuǎn)移灶呢？目前的解釋是 種子和土壤‖假說，當微環(huán)境適宜的時候，腫瘤細胞（種子）在遠端器官（土壤）定植生長。那么這種適宜的微環(huán)境的形成是由原位腫瘤所誘導形成的，為經(jīng)過循環(huán)系統(tǒng)到達遠端器官的腫瘤細胞提供生長支持的微環(huán)境，稱之為 預轉(zhuǎn)移灶‖（Pre-metastatic niche）[11]。

博士學位論文 上海交通大學醫(yī)學院 王辰龍無法通過 RISC 復合物與靶基因結(jié)合，從而使其靶基因的表達上調(diào)來發(fā)揮生物學效 應 （ 圖 2C ）。 例 如 ， 在 腎 癌 細 胞 耐 藥 株 中 被 發(fā) 現(xiàn) 的 長 鏈 非 編 碼RNA——LncARSR，通過吸附 miR-34a 與 miR-449 來促進酪氨酸激酶受體 AXL與 c-MET 的表達，從而促進腎癌細胞對舒尼替尼的耐藥性[24]。另一個例子是PTEN 假基因 PTENP1 的轉(zhuǎn)錄，雖然 PTENP1 被翻譯成蛋白，但其可以結(jié)合靶向PTEN mRNA 且負向調(diào)控 PTEN 表達的一些 microRNA，最終結(jié)果可以使 PTEN的蛋白表達上調(diào)[25]。

SMAD7的結(jié)構(gòu)

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10 胡蘊慧;李雙靜;Ernesto Yag

本文編號：2790828