【摘要】：目的:骨關(guān)節(jié)炎是常見的退行性疾病,是軟骨細(xì)胞、軟骨基質(zhì)、軟骨下骨三者降解與合成偶聯(lián)失衡的結(jié)果,軟骨細(xì)胞功能變化在軟骨基質(zhì)降解過程中起著重要的作用,維持軟骨細(xì)胞功能穩(wěn)定則是重要因素。建立膝骨關(guān)節(jié)炎模型,觀察軟骨水腫與AQP1、AQP3分布與含量的關(guān)系,從水通道蛋白(AQPs)與軟骨細(xì)胞損傷的角度出發(fā),探討西樂葆對(duì)骨關(guān)節(jié)炎抗炎消腫的作用機(jī)制。方法:1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):2月齡雄性SD大鼠,隨機(jī)分3組:空白對(duì)照組、關(guān)節(jié)炎模型組、西樂葆組,每組15只,木瓜蛋白酶關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射制備OA模型,模型建立后西樂葆組給予17.85mg/(kg.d)灌胃,空白對(duì)照組、關(guān)節(jié)炎模型組給予等量生理鹽水灌胃,每日1次,共4周,取血清ELISA檢測IL-1β含量,取左側(cè)膝關(guān)節(jié)HE染色觀察軟骨病理改變、甲苯胺藍(lán)染色觀察基質(zhì)蛋白多糖變化、免疫組織化學(xué)觀察AQP1、AQP3表達(dá)變化,刮取右側(cè)膝關(guān)節(jié)軟骨Real-time PCR、Western Blot檢測AQP1、AQP3 mRNA和蛋白表達(dá)變化。2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn):培養(yǎng)SW1353人軟骨肉瘤細(xì)胞,甲苯胺藍(lán)染色、II型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)觀察細(xì)胞形態(tài),分3組:陰性對(duì)照組、IL-1β處理組、IL-llp+Celebrex處理組,CCK8檢測細(xì)胞存活率,采用IL-lβ干預(yù)細(xì)胞24h、48h,分別收集細(xì)胞,Real-time PCR、Western Blot 檢測 AQP1、AQP3、VEGF 表達(dá)變化。結(jié)果:1.SD大鼠造模后4周血清IL-1β含量增加(P0.01),軟骨面可見缺損,缺損下方部分軟骨陷窩內(nèi)未見細(xì)胞核,軟骨基質(zhì)染色不均且淡染,基質(zhì)蛋白多糖含量減少(P＜0.01),移行層、放射層軟骨細(xì)胞AQP1、AQP3表達(dá)增強(qiáng)(P0.01),AQP1、AQP3mRNA和蛋白表達(dá)均上調(diào),具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。西樂葆組血清IL-lβ含量降低(P0.05),改善軟骨損傷程度,基質(zhì)染色較均勻,減緩蛋白多糖丟失(P＜0.01),下調(diào)移行層、放射層軟骨細(xì)胞AQP3表達(dá)(P0.01),降低AQP3 mRNA和蛋白表達(dá)(P0.01),AQP1表達(dá)變化不顯著。2.體外培養(yǎng)SW1353細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色為藍(lán)紫色,細(xì)胞質(zhì)II型膠原表達(dá)陽性,采用IL-1β處理細(xì)胞,AQP1、AQP3、VEGF mRNA 和蛋白表達(dá)均上調(diào)(P0.01)(P0.01)(P0.05),IL-1β+Celebrex處理組AQP3 mRNA和蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P0.01),24hAQP1 mRNA、48hAQPl表達(dá)略下調(diào)(P0.05),VEGFmRNA和蛋白變化不顯著。結(jié)論:1.AQP1、AQP3在膝關(guān)節(jié)炎軟骨組織水腫中,特別是水的轉(zhuǎn)運(yùn)過程起重要作用。2.西樂葆可抑制炎癥因子表達(dá),下調(diào)AQP1、AQP3表達(dá)量,減緩軟骨基質(zhì)蛋白多糖丟失,穩(wěn)定軟骨細(xì)胞,改善軟骨基質(zhì)病變。3.IL-1β干預(yù)SW1353細(xì)胞異常表達(dá)AQP1、AQP3,西樂葆可下調(diào)AQP1、AQP3表達(dá)以保持細(xì)胞存活率。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R684.3
【圖文】：

細(xì)胞囊呈強(qiáng)嗜堿性，鈣化層細(xì)胞體積較小、核質(zhì)比增大；放射層與鈣化層交接逡逑處稱為潮線，鈣化層與軟骨下骨交接處稱為粘合線；ＨＥ染色顯示軟骨４層結(jié)構(gòu)逡逑清晰，基質(zhì)染色均勻，未能良好顯示潮線（圖２－１Ａ）。逡逑關(guān)節(jié)炎模型組軟骨面可見缺損，缺損達(dá)移行層、部分可至放射層，缺損下逡逑方部分軟骨陷窩內(nèi)未見細(xì)胞核，移行層、放射層細(xì)胞體積增大，數(shù)量減少，排逡逑列較規(guī)則、未見明顯紊亂，細(xì)胞囊、軟骨基質(zhì)未見明顯蘇木素著色，鈣化層細(xì)逡逑胞體積增大，基質(zhì)染色不均Ｃ圖２－１Ｂ）。與模型組相比，Ｃｅｌｅｂｒｅｘ組軟骨面較光逡逑滑，未見明顯缺損，移行層、放射層細(xì)胞數(shù)量稍多，排列較規(guī)則，鈣化層細(xì)胞逡逑體積略小，基質(zhì)染色較均勻，表明Ｃｅｌｅｂｒｅｘ對(duì)０Ａ軟骨結(jié)構(gòu)具一定保護(hù)作用（圖逡逑２－１Ｃ）。逡逑ＮＣ邐ＯＡ邐Ｃｅｌｅｂｒｅｘ逡逑圖２－１軟骨顯微結(jié)構(gòu)（ＨＥ染色、ｘ２00）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－１邋Ｔｈｅ邋ｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｃａｒｔｉｌａｇｅ邋（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ－ｅｏｓｉｎ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｘ２００）逡逑２．４．２軟骨基質(zhì)蛋白多糖表達(dá)變化逡逑甲苯胺藍(lán)屬醌亞胺染料，是常用的人工堿性染料，可與組織中的酸性物質(zhì)逡逑結(jié)合而染色

￣Ｉ丨ＨＩ丨川丨ＩＩ逡逑ｃ／逡逑圖２－３軟骨基質(zhì)蛋白多糖含量逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－３邋Ｔｈｅ邋ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｉｎ邋ｃａｒｔｉｌａｇｅ邋ｍａｔｒｉｘ逡逑注：＊為與ＮＣ相比，Ｐ＜０．０５；邋＊＊為與ＮＣ相比，Ｐ＜０．０１。逡逑＃為與0Ａ相比，尸＜０．０５；邋＃＃為與ＯＡ相比，尸＜０．０１。逡逑Ｆ＝１８９．７２９邋尸＝０．０００逡逑每個(gè)樣本隨機(jī)選取相同倍數(shù)下５個(gè)不同視野，ＨＥ染色結(jié)合甲苯胺藍(lán)染色結(jié)逡逑果作Ｍａｎｋｉｎ評(píng)分Ｗ邋（表２－１０），對(duì)病程分期：０－４分為Ｉ期，５－８分為ＩＩ期，９－１１逡逑分為ＩＩＩ期，１２－１４分為ＩＶ期。逡逑２６逡逑

邐ＯＡ邐Ｃｅｌｅｂｒｅｘ逡逑圖２－２軟骨基質(zhì)蛋白多糖（甲苯胺藍(lán)染色、ｘ２00）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｔｈｅ邋ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ邋ｉｎ邋ｃａｒｔｉｌａｇｅ邋ｍａｔｒｉｘ邋（Ｔｏｌｕｉｄｉｎｅ邋ｂｌｕｅ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｘ２００）逡逑８－逡逑＊＊逡逑６－邐Ｔ邋７逡逑Ｉ邋．邐ｒｒＺＬｒｒ，逡逑ｉ邋４＇邐＝＾＝逡逑ｓ邐—逡逑２－逡逑￣１￣逡逑0＜邋ｉ，ｉ￣ｒ－邐￣Ｉ丨ＨＩ丨川丨ＩＩ逡逑ｃ／逡逑圖２－３軟骨基質(zhì)蛋白多糖含量逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－３邋Ｔｈｅ邋ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｉｎ邋ｃａｒｔｉｌａｇｅ邋ｍａｔｒｉｘ逡逑注：＊為與ＮＣ相比，Ｐ＜０．０５；邋＊＊為與ＮＣ相比，Ｐ＜０．０１。逡逑＃為與0Ａ相比，尸＜０．０５；邋＃＃為與ＯＡ相比，尸＜０．０１。逡逑Ｆ＝１８９．７２９邋尸＝０．０００逡逑每個(gè)樣本隨機(jī)選取相同倍數(shù)下５個(gè)不同視野，ＨＥ染色結(jié)合甲苯胺藍(lán)染色結(jié)逡逑果作Ｍａｎｋｉｎ評(píng)分Ｗ邋（表２－１０），對(duì)病程分期：０－４分為Ｉ期，５－８分為ＩＩ期，９－１１逡逑分為ＩＩＩ期，１２－１４分為ＩＶ期。逡逑２６逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2787687