【摘要】：目的:探討細胞外基質(zhì)透明質(zhì)酸(hyaluronan,HA)對腫瘤免疫調(diào)節(jié)的作用:1、研究乳腺癌患者外周血中M2樣單核細胞的表達水平;2、探討乳腺癌患者外周血M2樣單核細胞與血漿HA之間的相互關系;3、探討中分子量HA(INT-HA)如何通過miRNA調(diào)控M2樣腫瘤相關巨噬細胞(tumor-associated macrophages,TAMs)形成的機制。方法:1、應用流式細胞術檢測乳腺癌患者、良性疾病患者和健康體檢者外周血中CD14~+CD163~+/CD14~+CD204~+/CD14~+CD163~+CD204~+M2樣單核細胞的表達水平,分析其與臨床病理資料的相關性;2、通過免疫組化方法觀察乳腺癌和乳腺良性疾病組織中CD204~+M2樣TAMs與HA的表達情況;3、通過化學發(fā)光方法檢測乳腺癌患者、良性疾病患者和健康體檢者血漿中HA、CEA、CA15-3的表達水平,并分析外周血M2樣單核細胞與HA之間的相關性;4、磁珠分選外周血單核細胞,采用不同分子量及不同濃度的HA處理單核細胞72 h;5、應用RT-qPCR及ELISA檢測HA處理后的單核細胞中與M2樣TAMs相關的標記分子的表達水平(Arg1、IL-10、CCL18、CCL22及CCR2等);6、使用miRNA芯片技術分析HA處理后的單核細胞中miRNAs的表達變化;7、通過miRNA在線軟件(TargetScan,miRDB和miRWalk)分析miRNA潛在的靶基因;8、根據(jù)HA處理前后miRNA的變化,在THP-1來源的巨噬細胞中轉染相應的miRNA mimics或inhibitors,分析miRNA對于M2樣TAMs的調(diào)節(jié)機制;9、通過RT-qPCR及Western blot驗證miRNA的靶基因;10、收集實體瘤患者外周血單核細胞及相應血漿,使用RT-qPCR檢測單核細胞中的IL-10、CCL18、miRNA及其相應靶基因的表達水平,應用化學發(fā)光法檢測血漿中HA水平,分析這些指標之間的相互關系。結果:1、相對于良性疾病患者和健康體檢者,乳腺癌患者外周血中CD14~+CD204~+M2樣單核細胞明顯升高;2、外周血CD14~+CD204~+M2樣單核細胞水平對于乳腺癌診斷的敏感度和特異性優(yōu)于CEA和CA15-3;3、CD204~+M2樣TAMs與HA在乳腺癌組織中的表達明顯高于乳腺良性疾病組織;4、CD14~+CD204~+M2樣單核細胞與HA聯(lián)合可提高乳腺癌的診斷敏感性和特異性;5、CD14~+CD204~+M2樣單核細胞與TNM腫瘤分級、淋巴結轉移、組織學分化之間存在明顯相關性;6、相對于LMW-HA與HMW-HA,INT-HA刺激單核細胞發(fā)生M2樣極化的效果最為顯著;7、INT-HA主要通過TLR4引起巨噬細胞發(fā)生M2樣極化;8、通過miRNA microarray分析INT-HA刺激與未刺激兩組之間miRNA表達譜的變化,證實miR-935的表達降低最為明顯;9、miR-935表達降低是通過INT-HA作用于巨噬細胞上TLR4引起的;10、miR-935在INT-HA引起的M2樣巨噬細胞極化中發(fā)揮重要的調(diào)控作用;11、MiR-935可能通過作用靶基因C/EBPβ發(fā)揮調(diào)控M2樣巨噬細胞極化的作用。結論:1、乳腺癌患者外周血中CD14~+CD204~+M2樣單核細胞與血漿HA存在明顯正相關,可聯(lián)合輔助診斷乳腺癌。2、INT-HA能夠引起巨噬細胞發(fā)生M2樣極化;3、INT-HA引起巨噬細胞發(fā)生M2樣極化可能通過TLR4-miR-935-C/EBPβ途徑發(fā)揮作用,該途徑可能成為一個新藥物的治療靶點。
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9
【圖文】：

經(jīng)統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)分別顯著高于健康對照組(37.66 2.22,6.53 2.48 和 2.45 1.05) 和良性疾病組 (38.54 2.44, 7.49 2.63 和 2.90 1.23) (圖2B-D)。 然而，健康對照組與良性對照組外周血中 M2 樣單核細胞之間并無統(tǒng)計學差異。因此，外周血循環(huán)中 CD14+CD163+/CD14+CD204+/CD14+CD163+CD204+M2 樣 單核細胞在乳腺癌患者中特異性升高，提示其具有潛在的臨床輔助診斷

上海交通大學 2015 級博士研究生學位論文對照組、乳腺良性患者組、乳腺癌組外周血 CD14+CD204+M2 樣單核細胞特征 Characterization of circulating CD14+CD204+M2-like monocytes in healthy cobenign patients, and breast cancer patients.示的中間細胞群以單核細胞細胞為主，以中間細胞群設門得到 CD14+的以 CD14+的單核細胞設門得到 CD204+M2 樣單核細胞，并計算出 CD14+細胞所占百分比。

上海交通大學 2015 級博士研究生學位論文 樣單核細胞與血漿 HA 在乳腺癌患者中表達水平此，我們使用 Spearman 相關分析來分析對照組性(Table3)。結果發(fā)現(xiàn)外周血 CD14+CD204+M2組中存在相關性 (Spearmanr=0.404,p<0.05)(圖與 CEA/CA15-3 之間，CD14+CD204+M2 樣單核細-3 與 CEA 之間在本部分研究中均不存在相關性。

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本文編號：2779441