【摘要】：研究背景骨肉瘤是一種好發(fā)于兒童和青少年的原發(fā)性惡性骨腫瘤,其發(fā)病率居于原發(fā)性骨腫瘤之首,它們大多發(fā)生于四肢的長管狀骨,尤其是股骨遠端和脛骨近端,由于腫瘤組織生長迅速、侵襲能力強、早期轉(zhuǎn)移等特點,周圍正常的骨組織常常被腫瘤所侵蝕,給病人的生活帶來巨大影響。近幾十年以來,由于提出了新輔助化療理念、術(shù)后放化療治療水平的提高再加上外科手術(shù)技術(shù)提升,過去傳統(tǒng)的截肢術(shù)逐漸被新輔助化療聯(lián)合保肢手術(shù)所取代,骨肉瘤患者的五年生存率顯著提高至60~70%,但由于骨肉瘤的高度侵襲性和早期轉(zhuǎn)移以及對化療藥物耐藥,加上目前暫無敏感性和特異性較高的腫瘤標(biāo)志物,骨肉瘤患者在前來就診時大多數(shù)已進入癌癥晚期階段,所以患者的腫瘤復(fù)發(fā)率和死亡率仍無明顯改善。因此,迫切需要探索涉及骨肉瘤發(fā)展的潛在分子機制,以對骨肉瘤進行早期診斷及探尋新的治療方式來改善骨肉瘤患者的預(yù)后及其生活質(zhì)量。樹突狀細胞(dendritic cell,DC)是作為一類特定的抗原呈遞細胞被大家熟知,它們在人體中分布廣泛,普遍分布于血液,組織和淋巴器官中。它們被認(rèn)為是免疫系統(tǒng)的中心,功能是橋接特異性免疫系統(tǒng)和非特異性免疫系統(tǒng),可以產(chǎn)生強大的免疫應(yīng)答。近十年以來,基于DC的癌癥免疫療法圍繞著DC的這些功能來開展,旨在通過疫苗接種開發(fā)針對癌癥的免疫治療策略。為此,必須更好地了解DC免疫生物學(xué),調(diào)節(jié)先天免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)以及腫瘤微環(huán)境,以及應(yīng)用科學(xué)的最新進展,以提高其巨大的抗腫瘤免疫治療潛力。微小RNA是一類長度約為19~25個核苷酸片段具有調(diào)節(jié)功能的非編碼RNA分子。miRNA通過與靶mRNAs的3'非翻譯區(qū)(UTR)堿基互補配對誘導(dǎo)信使RNA(mRNA)降解或通過與種子序列不完全堿基配對抑制mRNA翻譯來調(diào)節(jié)靶基因的表達。在人類癌癥中觀察到miRNA的異常表達,并且已經(jīng)顯示其參與多種關(guān)鍵的細胞過程,包括細胞分化,增殖和代謝。DC由發(fā)育和功能不同的亞群組成,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)不同DC族的發(fā)育受不同細胞因子和轉(zhuǎn)錄因子的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)。此外,DC的反應(yīng)受到嚴(yán)格調(diào)控以維持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)。在免疫系統(tǒng)中,miRNA在造血發(fā)育和細胞亞群分化過程中在檢查點起作用,它們調(diào)節(jié)效應(yīng)細胞功能,并牽涉維持動態(tài)平衡。DCs受miRNA的調(diào)控,在過去的十年中,miRNA在調(diào)節(jié)DC發(fā)育和功能中的作用已經(jīng)取得了很大進展�；诠侨饬龅闹委煬F(xiàn)狀,以樹突狀細胞為基礎(chǔ)的免疫治療可以作為一種非常有前景的治療方式來開展。目的本研究通過比較miRNA-200a在骨肉瘤組織與癌旁組織、骨肉瘤患者及健康體檢者外周血、骨肉瘤細胞系及正常成骨細胞中的表達水平差異,并分析其與臨床病例參數(shù)的關(guān)系,為以樹突狀細胞為基礎(chǔ)的骨肉瘤的免疫治療提供一定的理論基礎(chǔ)。方法選取鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科及小兒外科2015年10月至2017年10月收治行骨肉瘤切除手術(shù)、病理診斷明確的40例骨肉瘤患者,征得骨肉瘤患者及家屬同意,所有納入研究的骨肉瘤患者均需排除骨肉瘤以外其他系統(tǒng)腫瘤。收集這些患者手術(shù)當(dāng)日的外周靜脈血5ml、術(shù)中收集癌組織、癌旁組織及癌旁未被侵犯的組織,其中男20例,女20例,年齡介于10~48歲之間,新鮮手術(shù)標(biāo)本切除后用生理鹽水沖洗干凈并迅速保存于-80℃低溫冰箱中待用。另外收集患者臨床資料,如腫瘤大小、腫瘤浸潤情況、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移以及其他臟器有無轉(zhuǎn)移等,同時收集我院至門診體檢的40例健康人血液標(biāo)本5ml放置于-80℃低溫冰箱中保存待用。培養(yǎng)人U2OS骨肉瘤細胞系和人hFOB1.19成骨細胞系,通過qRT-PCR檢測miRNA-200a在標(biāo)本和細胞中的表達水平的不同,并分析它們與患者臨床資料的關(guān)系。結(jié)果1.檢測miRNA-200a在骨肉瘤患者癌組織及骨肉瘤細胞系中的表達水平運用qRT-PCR實驗方法檢測骨肉瘤患者癌組織及癌旁組織、人骨肉瘤細胞系U2OS與人成骨細胞系hFOB1.19中miRNA-200a的表達水平,結(jié)果顯示癌組織中mi RNA-200a表達量低于癌旁組織,兩組差異比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),骨肉瘤細胞中miRNA-200a表達量低于人成骨細胞,兩組差異比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),這意味著mi RNA-200a在骨肉瘤組織和骨肉瘤細胞系中低表達。另外通過對比不同性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤生長位置、病理類型、有無轉(zhuǎn)移及不同生存情況等組間骨肉瘤組織mi RNA-200a表達水平的差異,結(jié)果顯示死亡組和轉(zhuǎn)移組miRNA-200a表達水平高于存活組和非轉(zhuǎn)移組(P0.05),提示miRNA-200a可能在骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和患者生存中發(fā)揮重要的作用。2.檢測miRNA-200a在骨肉瘤患者外周血中的表達水平運用qRT-PCR實驗方法比較40例骨肉瘤患者與40例門診體檢的健康人血清當(dāng)中miRNA-200a表達水平。結(jié)果顯示相對于門診體檢的健康人,骨肉瘤患者血清中miRNA-200a表達量升高,兩組數(shù)據(jù)對比結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論miRNA-200a在骨肉瘤患者癌組織表達下調(diào),在其血清中表達上調(diào),表明它可能在骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和患者生存中發(fā)揮重要的作用,可為以樹突狀細胞為基礎(chǔ)的骨肉瘤的免疫治療提供一定的理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R738.1
【圖文】：

實驗結(jié)果實驗結(jié)果A-200a 在骨肉瘤組織及癌旁組織中的表達水平中通過運用 qRT-PCR 法檢測比較了 40 例骨肉瘤患者骨肉瘤中 miRNA-200a 表達量。觀察 miRNA-200a 在骨肉瘤組織中顯示骨肉瘤組織 miRNA-200a 的表達水平低于癌旁組織，兩組計學(xué)意義（P=0.0462 <0.05），結(jié)果如圖 1.1 所示。miRNA中的表達水平低于癌旁組織，這意味著 miRNA-200a 可能在骨發(fā)展起作用。

圖 1.2 人 U2OS 骨肉瘤細胞系與人成骨細胞系 hFOB1.19 中miRNA-200a 相對表達量-200a 在骨肉瘤患者血清與正常體檢患者血清中表達水-PCR 法檢測比較了 40 例骨肉瘤患者血清與 40 例門診健康體檢NA-200a 表達量，結(jié)果如圖 1.3 所示。觀察 miRNA-200a 在骨的表達水平，結(jié)果顯示骨肉瘤患者血清中 miRNA-200a 表達水平者血清，兩組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.0010<0.05），200a 在骨肉瘤患者血清中呈現(xiàn)高表達。

1.3 骨肉瘤患者血清與正常體檢患者血清中 miRNA-200a 相對表達量瘤組織中 miRNA-200a 表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系40 例骨肉瘤患者的臨床病例資料，并將他們按照性別、年齡、置、腫瘤組織類型、有無轉(zhuǎn)移、生存情況進行分組，根據(jù)檢0a 相對表達量采用方差檢驗的統(tǒng)計方法進行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果見

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本文編號：2765916