【摘要】：[目的]通過體外細(xì)胞培養(yǎng),應(yīng)用TGF-β 1誘導(dǎo)正常皮膚角質(zhì)細(xì)胞和瘢痕疙瘩角質(zhì)細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,探究其對(duì)生理性和病理性角質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作用及差異性變化,以及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用對(duì)傷口愈合和病理性瘢痕產(chǎn)生的可能影響作用。[方法]采集重瞼成形術(shù)切下上瞼皮及眼袋切除術(shù)后下瞼皮、大腿刃厚皮片、耳部及腹部瘢痕疙瘩標(biāo)本培養(yǎng)角質(zhì)細(xì)胞,分別取第4～6代細(xì)胞,以終濃度為2ng/ml TGF-β1的KM(角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基)培養(yǎng)角質(zhì)細(xì)胞72h的作為實(shí)驗(yàn)組,未添加者作為陰性對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)分為4個(gè)小組,兩個(gè)大組:A組,正常皮膚角質(zhì)細(xì)胞不加TGF-β 1的為NK組,正常皮膚角質(zhì)細(xì)胞添加TGF-β 1的為NKT組;B組,瘢痕疙瘩角質(zhì)細(xì)胞不加TGF-β 1的為KK組,瘢痕疙瘩角質(zhì)細(xì)胞添加TGF-β 1的為KKT組;每組樣本均為3例。采用細(xì)胞免疫熒光、Western-blot和Real-time PCR檢測上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用的相關(guān)蛋白(Occludin、N-cadherin、MMP3)和標(biāo)志性基因(snail1、slug)的表達(dá)情況。應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,兩樣本間均數(shù)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn),P0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。[結(jié)果]A組上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白Occludin表達(dá)減弱,由誘導(dǎo)前的1.42±0.18降低至誘導(dǎo)后的1.33±0.21(P0.05),間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白N-cadherin表達(dá)增強(qiáng),由誘導(dǎo)前的0.57±0.08升高至誘導(dǎo)后的0.71±0.06(P0.05),MMP-3的mRNA表達(dá),由誘導(dǎo)前的1.01±0.14升高至誘導(dǎo)后的1.15±0.13(P0.05),其標(biāo)志性基因snail1、slug的mRNA水平表達(dá)增強(qiáng),分別由誘導(dǎo)前的1.01±0.16、1.00±0.07升高至誘導(dǎo)后的 1.68±0.14、2.37±0.04;B 組,Occludin、N-cadherin,分別由誘導(dǎo)前的 0.97 ±0.01、1.16 ±0.08 變化至誘導(dǎo)后的 0.73 ±0.06、1.39 ±0.06(P0.05),MMP-3的mRNA水平表達(dá),分別由誘導(dǎo)前的3.59±0.44升高至誘導(dǎo)后的9.28±1.89(P0.05),其標(biāo)志性基因snail1、slug的mRNA水平表達(dá)情況為,分別由誘導(dǎo)前的4.91 ± 1.06、10.92±2.43升高為誘導(dǎo)后的15.3±0.06、17.35±4.38(P0.01)。免疫熒光染色和Western blot均證實(shí)了細(xì)胞Occludin蛋白表達(dá)減少,N-cadherin表達(dá)增加,符合上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。A組與B組比較,其上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)蛋白和基因表達(dá)量具有顯著性差異(P0.01)。[結(jié)論]TGF-β1誘導(dǎo)的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用在瘢痕疙瘩角質(zhì)細(xì)胞中效果顯著,而對(duì)正常皮膚角質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)效力弱,說明TGF-β信號(hào)通路在同一細(xì)胞不同病理生理階段發(fā)揮的主要作用效力不同或者正常皮膚角質(zhì)細(xì)胞對(duì)于外界刺激具有一定的穩(wěn)定性和自主調(diào)節(jié)作用;另一方面,TGF-β1誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用導(dǎo)致MMP-3表達(dá)增高,尤其是在KK組(P0.05),可能是病理性瘢痕表現(xiàn)出“良性腫瘤”特性的成因之一。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R622
【圖文】：

圖４．分離表皮－真皮左皿右上部分為皮膚全邋圖５．分離表皮－真皮左皿邊為剝脫了表皮的逡逑層含表皮－真皮，右皿為剝脫下來的表皮邐真皮及其皮下組織，右皿為表皮逡逑２６逡逑

正常皮膚角質(zhì)細(xì)胞10倍，第三代lOx

癱痕疙瘩角質(zhì)細(xì)胞io倍，第三代ioX

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本文編號(hào)：2759393