【摘要】：目的:基于預(yù)血管化干細胞膜片,構(gòu)建預(yù)血管化的神經(jīng)導(dǎo)管,技術(shù)進行脊神經(jīng)損傷修復(fù)的研究,為神經(jīng)損傷提供更好的解決方法。方法:1)預(yù)血管化干細胞膜片基神經(jīng)導(dǎo)管的構(gòu)建:全骨髓貼壁法分離兔骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs);運用MTT法測定細胞生長曲線;檢測MSCs的多項分化潛能,包括成骨誘導(dǎo)分化,成脂誘導(dǎo)分化及成神經(jīng)樣細胞誘導(dǎo)分化;MSCs高密度連續(xù)培養(yǎng)5d后接種人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)然后再連續(xù)培養(yǎng)5d形成預(yù)血管化干細胞膜片;將預(yù)血管化干細胞膜片復(fù)合于管狀支架上,培養(yǎng)l0d后將其取下,獲得新型預(yù)血管化干細胞膜片導(dǎo)管;用HE染色、掃描電鏡(SEM)及CD31、Collagen I和Fibronectin免疫熒光對預(yù)血管化干細胞膜片導(dǎo)管進行檢測。2)新型預(yù)血管化干細胞膜片導(dǎo)管進行大鼠脊神經(jīng)損傷的修復(fù):大鼠脊髓損傷(SCI)模型的構(gòu)建;將預(yù)血管化干細胞膜片導(dǎo)管植入大鼠脊髓損傷部位,單純干細胞膜片組及空白組作為對照組;植入后每周進行BBB評分;于植入后第2、第8周處死動物,對標本進行耶染色、CD31、Tuj-1、GFAP免疫熒光染色。結(jié)果與結(jié)論:1)成功構(gòu)建出新型預(yù)血管化干細胞膜片導(dǎo)管。分離出的干細胞具有成骨、成脂及成神經(jīng)元樣細胞分化的能力,其細胞預(yù)血管化的細胞膜片富含CD31,Collagen I以及Fibronectin。其表面粗糙,其上有微血管結(jié)構(gòu)形成;2)將新型預(yù)血管化干細胞膜片導(dǎo)管修復(fù)大鼠脊神經(jīng)損傷,可以得到較好的功能和組織修復(fù)效果。植入2W起預(yù)血管化干細胞膜片導(dǎo)管組的BBB份數(shù)明顯高于空白組(P0.05),第4W起預(yù)血管化干細胞膜片導(dǎo)管組的BBB分數(shù)高于單純干細胞膜片導(dǎo)管組(P0.05)。免疫熒光結(jié)果顯示第2W,預(yù)血管化細胞膜片導(dǎo)管組Tuj-1的表達量略高于其余兩組。第8W,預(yù)血管化細胞膜片導(dǎo)管組Tuj—1的表達量明顯高于其余兩組,空白組的GFAP的表達量高于其余兩組。所以預(yù)血管化干細胞膜片導(dǎo)管對于脊髓損傷大鼠功能和組織學的修復(fù)有促進作用。
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R651.2
【圖文】：

竺＃丨、丨大學碩士研究生學位論文邐新型預(yù)血管化的神緩導(dǎo)管修復(fù)脊神經(jīng)損傷的研究逡逑心臟：由于心肌細胞在出生不久之后便喪失了增殖能力，心肌細胞的再生便逡逑成為了一個很．重要的問題［４５］。用于心臟組織的細胞膜片都是多層細胞膜片，總體逡逑厚度較厚，此時細胞間的連接便顯得十分重要［４１］。細胞膜片用于心臟細胞是很有逡逑用的，因為細胞膜片可議直接一層疊一層的粘附于宿主組織上ｒ每層組織之間還逡逑可以產(chǎn)生縫隙連接，這些在使用傳統(tǒng)的支架時是不可能產(chǎn)生的［４４］。逡逑角膜；將細胞膜片應(yīng)用于角膜的修復(fù)蟲要有兩個方面的優(yōu)點，第一，細胞膜逡逑片具有一定的粘性，可直接粘附于角膜上，免于縫合第二，細胞膜片由于保逡逑存了細胞間連接以及ＥＣＭ，其脆性較小，可以直接進行操作，免子載體基板的逡逑v溆媒牛義鮮徹埽海茫櫻諾氖褂每梢苑樂桂つは慮諧質(zhì)鹺蟮氖徹芟琳�，讣{蘋頰叩納鑠義現(xiàn)柿俊Ｒ浦蠶赴箍梢醞ü置諳赴蜃蛹把仔砸蜃永創(chuàng)俳絲詰撓�，减轻\逡逑者的炎癥反應(yīng)［４７］。逡逑邐邋Ｃｏｒｎｅａｌ逡逑

ｌ＿ｊｖｅｒ邐Ｐａｎｃｒｅａｓ逡逑圖１邋－２細胞膜片的應(yīng)用１＜１］逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ邋－２邋Ｔｈｅ邋ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ｃｅｌｌ邋ｓｈｅｅｔｓ？逡逑細胞膜片的血管化有著＿常重要的作用，沒有組織的血管化植入物就無法在逡逑體內(nèi)存活、生長。研宄表明植入體內(nèi)的種子細胞只有在血管周圍１５０？２００拜范逡逑Ｓ內(nèi)才能通過營養(yǎng)物質(zhì)的彌散得以成活［４１＇４８］。對于薄層的細胞膜片，植入后它可逡逑６逡逑

２．２．３兔骨髓間充質(zhì)于細胞的多向分化特征鑒定逡逑成骨誘導(dǎo)分化：成骨誘導(dǎo)２１ｄ后進行茜素紅染色：可見細胞復(fù)層生長，有大逡逑片深紅染色區(qū)域，為茜素紅陽性區(qū)域色（圖２－３邋ａｋ逡逑成脂誘導(dǎo)分化：成脂誘導(dǎo)２７（１后部分細胞胞漿內(nèi)出＾｜圓形脂滴，有的為一大逡逑脂滴，有的為成串珠狀排列的小脂滴。油紅“０”染色呈陽性：細胞胞漿內(nèi)可見逡逑許多大小不一的X/紅色圓形脂滴（圖２－３邋ｂ）。逡逑成神經(jīng)樣細胞誘導(dǎo)分化：誘導(dǎo)５ｈ后，有一半平細胞的胞體收縮成晝角形，逡逑細胞可伸出較多的長突起，細胞形狀類似神經(jīng)元樣細胞，多個細胞的突起可相互逡逑延伸、連接。ＭＳＣｓ誘導(dǎo)５ｈ后，尼氏染色呈，陽性：細胞胞質(zhì)中存在著深藍色的逡逑顆粒狀尼氏小體（圖２－３邋ｃ）。逡逑ｉｗ：／灄，逡逑圖２－３邋ＭＳＣｓ多向誘導(dǎo)分化ａ：成骨分化后茜素紅染色；ｂ：成脂分化后油紅０染色；ｃ：逡逑成神經(jīng)樣細胞分化后尼氏染色（Ｓｃａｎ邋ｂａｒ邋ｓｉｚｅ邋２００邋｜ｘｍ）逡逑１５逡逑

【參考文獻】

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本文編號：2746604