【摘要】：研究背景:目前,受損的透明軟骨是數(shù)百萬年輕人和老年人經(jīng)歷的膝關節(jié)疼痛的罪魁禍首。由于急性創(chuàng)傷、日常磨損、衰老或疾病導致的軟骨損傷可引起間歇性或慢性疼痛,并可伴有腫脹、關節(jié)交鎖、周圍肌肉減弱或運動范圍減小等。玻璃酸(Hyaluronic acid,HA)是糖胺聚糖的一種,其由(1-β-4)D-葡糖醛酸和(1-β-3)N-乙�；�-D-葡糖胺的重復二糖單元組成。HA是皮膚、玻璃體、滑液和軟骨等組織中細胞外基質(zhì)的重要組成部分,具有獨特的物理化學特性和生物學功能。HA作為軟骨細胞生長的底物是軟骨基質(zhì)的重要組成部分,它可以促進軟骨細胞的代謝,刺激軟骨基質(zhì)的形成,維持軟骨細胞的表型。在構建軟骨細胞支架時,它被認為是最合適的材料之一。具有吸濕性和高水溶性的天然HA是具有長直鏈的聚合物。它們易于通過身體組織中的固有酶或自由基分布和消化。當應用于身體的局部組織時,其天然形式的可注射HA僅持續(xù)1-2天。非交聯(lián)HA的機械強度不能滿足組織工程支架的要求。通過交聯(lián)能夠形成穩(wěn)定的HA聚合物網(wǎng)絡�？赏ㄟ^控制交聯(lián)度和工藝參數(shù)修飾玻璃酸鈉來制備可生物降解和多孔的材料,這將是軟骨組織工程的潛在支架。使用交聯(lián) HA(Cross-linked sodium hyaluronate,CHA)與 1,4-丁二醇二縮水甘油醚(1,4-Butanedioldiglycidylether,BDDE)作為交聯(lián)劑的可注射凝膠來治療骨關節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)、軟組織缺損和填充真皮組織。這些產(chǎn)品的有效性和安全性己在臨床試驗中得到證實。然而,CHA在組織工程中的價值至今尚未闡明。最近的報道表明,人類干細胞,特別是間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs),在關節(jié)軟骨疾病的治療中產(chǎn)生了積極的結果。人類MSCs可以從多種成人組織中獲得,易于擴增,隨后分化為可產(chǎn)生基質(zhì)的軟骨細胞,最終促進透明關節(jié)軟骨的形成。MSCs易于分離,其表型得以維持,因為它們與衰老無關。此外,它們具有優(yōu)于其他軟骨細胞的優(yōu)異的初始增殖能力。由于多能干細胞(例如,誘導的多能干細胞或胚胎干細胞)具有潛在的畸胎瘤形成風險,與軟骨組織工程中的MSC相比,它們并不適合用于軟骨修復。然而,組織工程軟骨尚未完全具有天然關節(jié)軟骨的結構和功能特性,限制了其廣泛應用于臨床。因此,迄今為止,關節(jié)軟骨修復尚無可靠的長期治療策略。常規(guī)療法(例如:微骨折、鑲嵌成形術和軟骨擴增移植術)或傳統(tǒng)療法(例如:關節(jié)外科手術)具有若干缺點。在關節(jié)外科手術中,進行假體裝置的植入以替換軟骨生物組織,其可以挽救部分關節(jié)功能,但僅僅可維持10-15年。該手術無法避免手術后并發(fā)癥的風險,包括感染和炎癥。因此,迫切需要有效治療以成功修復或再生關節(jié)軟骨組織。橙皮苷在許多疾病模型中表現(xiàn)出抗炎特性。例如,橙皮苷已經(jīng)在嚙齒動物模型中顯示出通過抑制細胞因子產(chǎn)生,降低NF-κB活性和減輕氧化應激反應來減少炎癥以及炎癥疼痛。在應用橙皮苷的動物模型中,滲出物LPO減少,但SOD和GSH增加。這些影響表明橙皮苷具有抗過氧化作用。然而,在組織內(nèi)的環(huán)境下,給予橙皮苷導致LPO、SOD、CAT和GSH降低,進一步表明其可抑制氧化應激反應的增加。有趣的是,在血清中它只能降低CAT和GSH,而對LPO和SOD沒有任何顯著影響。這些觀察結果表明,橙皮苷可能不會在體內(nèi)降低總體氧化應激,但只是逆轉(zhuǎn)炎癥變化,從而降低組織和滲出液中的LPO。然而,橙皮苷給藥后降低了組織和血清中的亞硝酸鹽濃度,表明橙皮苷通過·NO自由基發(fā)揮清除作用,抑制炎癥通路,從而發(fā)揮抗炎作用。這些影響也與先前關于橙皮苷的報道一致。其余參數(shù)包括總白細胞、中性粒細胞和淋巴細胞計數(shù)以及滲出物中TNF-α的濃度以及組織學特點沒有發(fā)生明顯變化。然而,目前關于橙皮苷對MSC的軟骨形成過程中免疫應答的影響尚無研究報道。目的:在本研究中,通過兩次冷凍干燥過程以BDDE作為交聯(lián)劑的方法制備CHA支架,并測定了支架的物理化學性質(zhì),通過建立微骨折手術的全層軟骨缺損小型豬模型,評估支架對促進軟骨修復的影響;進一步通過分離出人類MSCs,研究橙皮苷對MSCs軟骨組織修復過程中軟骨形成的影響,探討軟骨修復過程中的可能機制。該研究將為CHA支架在軟骨工程領域的應用奠定基礎。方法:該研究包括三個連續(xù)的部分,實驗過程如下:第一部分修飾玻璃酸鈉制備組織工程軟骨支架材料及其理化性質(zhì)的實驗研究1.1CHA支架的制備分別稱量分子量(Mw)為1850kDa和350kDa的兩種SH,并以1:1的比例混合。然后加入含有交聯(lián)劑1,4-丁二醇二縮水甘油醚(BDDE)的0.2%NaOH溶液并攪拌該溶液。將均勻的凝膠倒入具有光滑且不透水表面的模具中,加入量為0.2ml/cm2。將模具放入冷凍干燥機并冷凍干燥。將冷凍干燥的樣品轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中,加熱4小時,然后浸入溫度為70±2℃的蒸餾水中以促進腫脹。將溶脹的樣品再次凍干,將最終的凍干樣品在室溫下保存在干燥器中進一步測試。1.2 CHA支架物理化學性質(zhì)的檢測在最佳條件下制備CHA支架樣品進行形態(tài)學研究,使用SEM在5kV加速電壓和10mm工作距離處表征CHA支架的表面和橫截面形態(tài)。為了獲得膨脹的樣品,將CHA支架切成5mm×5mm的小片,在蒸餾水中浸泡24小時達到平衡,在-35℃下速凍并凍干。然后將樣品噴涂并用金涂覆20秒,并裝載在鋁短棒上進行SEM成像。然后使用配備有彩色照像機的光學顯微鏡來研究溶脹樣品的形態(tài)。將溶脹的支架的干燥樣品置于清潔的載玻片上,分別在透射光和反射光下測量光學圖像。檢測CHA支架的其他物理化學性質(zhì):包括CHA支架的修飾程度;干燥樣品和濕樣品的抗壓強度;吸水率;擴張率;和孔隙率。第二部分修飾玻璃酸鈉組織工程軟骨支架在豬軟骨缺損動物模型的應用研究2.1建立全層軟骨缺損的動物模型本研究使用的動物為12只普通小型豬,體重20±2 kg,年齡4～5個月,由上海南匯老港華興特種動物飼養(yǎng)中心提供。將實驗動物成功麻醉后,固定并常規(guī)消毒/鋪無菌巾單。在左右肢膝蓋上切開2至3厘米(cm)的皮膚切口以露出關節(jié)。在股骨髁上制作5.0mm直徑的圓柱形軟骨缺損�？字g的距離約為2～3 mm,深度約為3～4 mm。在手術過程中,仔細清理軟骨下骨,以避免出血,并確保每個缺損的大小基本相同。手術后,用CHA支架植入右膝,然后恢復關節(jié)的正常結構并閉合傷口。同時左膝關節(jié)充當對照,只通過外科手術恢復結構并閉合傷口。2.2 CHA支架植入覆蓋動物的右膝關節(jié)處軟骨缺損,在缺損底部和缺損軟骨邊緣周圍涂上薄層纖維蛋白膠(參見產(chǎn)品使用說明)。然后將CHA支架植入缺損部位,用鹽水滴潤濕,同時用手術刀柄輕輕按壓,完成粘合劑的固定。用軟組織覆蓋缺損部位,復位髕骨,屈曲膝關節(jié)將進一步壓實植入物。然后打開軟組織,脫位髕骨,檢查種植體和缺損粘連的邊緣,最后進行關節(jié)修復和縫合。允許動物自由活動后,使用標準動物飼料和清潔飲用水,室溫保持在15-26℃,每日紫外線消毒和術后肌肉注射青霉素,每天早上和下午5萬單位,以防止術后感染。2.3術后觀察手術后7天內(nèi)每天進行一次籠外觀察,每周一次,詳細記錄體征、行為活動、流涎、呼吸狀況、排尿和切口的局部反應情況。2.4血液學檢查在手術后6個月和12個月從動物的靜脈采集血樣。以3500r/min離心15min,然后使用Hitachi 7180自動生化分析儀進行血清生化檢測。2.5病理檢查肉眼觀察:術后6個月、12個月時,分別取3只動物經(jīng)1%戊巴比妥鈉溶液麻醉后,頸總動脈切開放血處死后取下整個后腿,露出膝關節(jié),大體觀察缺損修復情況,包括缺損修復程度,表面平整度,顏色改變;與周圍正常軟骨的整合情況,邊界是否清楚,有無裂隙。關節(jié)滑膜是否增生。組織切片:切取以缺損為中心的1.5 cm的修復的軟骨表面組織及軟骨下骨,采用10%中性福爾馬林固24 h以上,10%EDTA脫鈣液脫鈣30 d,隔日更換脫鈣液,乙醇梯度脫水,二甲苯透明,浸蠟,縱向石蠟包埋。5 um切片,按傳統(tǒng)方法分別進行染色和番紅-O染色,并根據(jù)文獻進行O' Driscoll關節(jié)軟骨組織學評分。2.6生物力學測試將-80℃冷凍保存的缺損修復軟骨及正常軟骨樣品取出,在常溫下解凍后進行壓痕測試,測量軟骨組織的楊氏模量(MPa),應力松弛時間(s)和蠕變時間(s)。2.7Ⅱ型膠原蛋白檢測用直徑6 mm的環(huán)鉆將做完力學測試的軟骨修復組織完全切下,同時切下等量的健康軟骨組織,切取小部分組織用于Ⅱ型膠原定量測定,剩余部分用于糖氨多糖(GAG)含量的測定。將軟骨樣品稱重,凍干后再確定干重,以確定每毫克組織濕重及干組織中膠原蛋白含量。然后,通過胃蛋白酶消化所獲得的沉淀物,直到幾乎所有組織碎片都溶解。之后,根據(jù)豬膠原蛋白Ⅱ(ColⅡ)Elisa試劑盒的程序,通過ELISA試驗檢測膠原蛋白含量。2.8糖氨多糖(GAG)含量測定取新鮮的軟骨樣品稱濕重,樣品凍干后,稱取干重。然后將凍干組織切成小塊,于95%酒精中浸泡2-3 h,再移入丙酮液中浸泡2 h,用濾紙包好,在索氏抽脂器中脫脂16 h。將脫脂的樣品置80℃干燥4h,粉碎至細粉末狀。經(jīng)酶解沉淀冷凍干燥,即為GAG粗制品。根據(jù)豬GAG檢測試劑盒Porcineglycosaminoglycan(GAG)Elisa Kit說明書描述的測定方法,測定樣品GAG的含量。第三部分促進組織工程軟骨支架進行軟骨修復的方法和機制研究3.1人類MSC的分離和培養(yǎng)經(jīng)山東大學第二醫(yī)院委員會批準人體細胞使用方案,獲得所有患者的書面同意書,從山東大學第二醫(yī)院患者的術后廢棄骨組織中采集骨髓細胞。3.2菌落形成試驗將總共100個MSC接種到10cm培養(yǎng)皿中并連續(xù)培養(yǎng)長達21天。使用結晶紫(0.5%,SIGMA,MO,USA)將形成的菌落染色15分鐘,然后在光學顯微鏡下計數(shù)。計數(shù)直徑大于2mm的菌落。3.3增殖試驗通過商業(yè)CCK-8試劑盒評估細胞增殖。簡而言之,將MSC接種到6孔板中,然后進行各種處理。向每個孔中加入10μlCCK-8溶液,顯色反應在37℃下進行15分鐘。使用酶標儀記錄450nm處的吸收并計算相對細胞存活率。3.4軟骨形成測定將MSC在軟骨誘導培養(yǎng)基(DMEM,0.2mM抗壞血酸2-磷酸,20%FBS和10mM甘油2-磷酸)中培養(yǎng)14天,每2天更換新鮮培養(yǎng)基。使用Alcian Blue(Millipore,Billerica,MA,USA)染色評估軟骨形成。3.5 mRNA提取和實時PCR使用Trizol提取總mRNA,并按照制造商的說明書用SuperscriptII逆轉(zhuǎn)錄成互補cDNA,通過real-time PCR在以下條件下進行重復三次的PCR反應:95℃下15秒,60℃下1分鐘40次。使用GAPDH作為內(nèi)參計算相對表達水平。3.6 Western Blot蛋白質(zhì)印跡在含有 150mMNaCl,50mMTris-HCl,1OmMHEPES,0.1%NP-40 替代物,0.5mMNaF,0.25%Na-脫氧膽酸鹽,1mMNa3VO4,pH7.4(蛋白酶抑制劑混合物)的裂解緩沖液中制備細胞再懸浮液。使用BCA蛋白質(zhì)測定法定量細胞裂解物,然后在SDS-PAGE上運行30μg總蛋白質(zhì),然后轉(zhuǎn)移至PVDF膜。隨后用1%BSA(牛血清白蛋白)封閉膜,并與一抗4℃孵育過夜。利用HRP綴合的二抗來顯現(xiàn)基于ECL成像系統(tǒng)中的條帶。3.7酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)通過離心完全除去MSC,收集透明培養(yǎng)基用于ELISA分析。使用市售ELISA試劑盒,按照制造商的說明書測量IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的水平。4統(tǒng)計分析使用SPSS22.0系統(tǒng)(IBM,Armonk,NY,USA)分析所有數(shù)據(jù),并以平均值土標準偏差(SD)表示。組間差異由學生T檢驗和單因素方差分析(ANOVA)確定。P值小于0.05被認為具有統(tǒng)計學差異。結果1 CHA支架的物理化學性質(zhì)物理化學性質(zhì)的檢測表明,CHA支架是一種多孔的海綿狀外觀,在SEM下孔徑為80-150 μm(圖1,圖2)。如表2所示,CHA支架的修飾程度為(3.10±0.27)%。干燥樣品的壓縮強度為(14.80±4.06)kPas,濕樣品的壓縮強度為(0.5762±0.11)kPas(圖 3);吸水率為(58.6±3.5)%,膨脹率為(100.7±4.8)%,孔隙率為(96.5±2.6)%。2.1常規(guī)術后觀察結果手術后3-5小時,動物基本上從麻醉中恢復。24小時后,動物可以站立,左后肢跛行,食物攝入量和飲用水基本正常。術后15天內(nèi),手術部位幾乎完全恢復,皮毛發(fā)亮。同時,眼睛、鼻子和耳朵周圍沒有明顯分泌物,亦并未發(fā)現(xiàn)其他身體部位的創(chuàng)傷和炎癥。此外,他們的行為和步態(tài)幾乎正常,未發(fā)現(xiàn)明顯的臨床不良反應。2.2術后血液學檢查術后6個月和12個月評估血液學指標,以明確手術和CHA支架植入對動物機體的整體影響。結果發(fā)現(xiàn),如表3所示,除了個別生化離子和脂質(zhì)因子外,CHA支架植入組與對照組相比,常規(guī)血液檢查、肝腎功能檢查和生化離子檢測以及凝血指標等的大部分結果兩組間并無顯著差異。更重要的是,在所有研究動物中測得的這些常規(guī)血液學因素均在正常的生理波動范圍內(nèi)。2.3病理特征動物膝關節(jié)的缺損軟骨于術后6個月開始修復,在肉眼觀察下可發(fā)現(xiàn),修復逐漸從中央到周圍展開。如圖1所示,我們發(fā)現(xiàn)6個月后CHA支架植入組基本修復了軟骨缺損,缺損區(qū)與修復區(qū)的交界處清晰而緊密,沒有裂縫,但修復區(qū)域與正常軟骨相比略顯蒼白。然而,對照組缺損區(qū)的修復表面是斷斷續(xù)續(xù)不規(guī)則狀,缺損區(qū)與修復區(qū)域的連接處亦不清楚。于術后12個月時進一步觀察發(fā)現(xiàn),CHA支架植入組膝關節(jié)修復區(qū)軟骨表面光滑,顏色與正常軟骨相似。修復區(qū)域的邊緣基本上與正常軟骨合并。正常區(qū)域和修復區(qū)域之間沒有明顯的界限,與6個月相比,修復程度明顯提高。而對照組手術后12個月的軟骨表面和邊緣與6個月時的觀察結果沒有顯著改善。此外,對手術后6個月和12個月獲得的組織進行HE染色,顯微鏡下進一步觀察,結果顯示在CHA植入組的動物的軟骨表面上可見一些軟骨細胞。同時,HE染色顯示軟骨周圍有深藍色細胞核和紅色基質(zhì),提示修復了不同程度的纖維組織(圖2)。通過番紅O染色,我們發(fā)現(xiàn)植入組的修復軟骨組織的淺層甚至深層在6個月后呈現(xiàn)出輕度、不均勻染色,而對照組的染色則更淺,更加不均勻。此外,植入組修復區(qū)域的基質(zhì)在術后12個月時染色更深,但在對照組中,只有淺層軟骨甚至中間層有輕微染色,而且染色呈現(xiàn)不均勻。(圖2)根據(jù)O'Driscoll關節(jié)軟骨組織學評分標準,進一步評估了軟骨修復后的主要的組織學類型、結構特征、細胞變性和相鄰軟骨的退行性變化。左右膝關節(jié)軟骨修復綜合評分結果如表4所示,植入組細胞變性和鄰近軟骨退變均高于對照組,術后6個月和12個月結果一致,提示CHA支架可以減少損傷引起的軟骨退變,并可能促進軟骨缺損的修復能力。2.4修復軟骨的生物力學特性通過楊氏模量、應力松弛時間和蠕變時間評估生物力學性能,其測試在手術后6個月和12個月進行。如表5所示,術后6個月和12個月的楊氏模量、應力松弛時間和蠕變時間所反映的生物力學性能組間存在顯著差異。植入支架修復區(qū)域的測量值高于對照組修復區(qū)域(圖3),更接近正常區(qū)域軟骨的測量值,表明CHA支架軟骨的植入在修復軟骨的生物力學性能方面優(yōu)于手術組。用CHA支架基質(zhì)植入有利于促進軟骨修復并提高其壓縮能力。2.5 Ⅱ型膠原蛋白表達如表6所示,組間修復的軟骨中Ⅱ型膠原蛋白的表達存在差異。CHA支架植入組Ⅱ型膠原蛋白水平在6個月和12個月時均高于對照組,但兩組在6個月時均顯著低于正常軟骨,而手術后12個月各組之間并未取得顯著的統(tǒng)計學差異。我們的結果表明CHA有利于軟骨組織中Ⅱ型膠原的積累。然而,軟骨的修復在短時間內(nèi)仍然與正常軟骨不同。2.6糖胺聚糖表達為了明確修復的軟骨水平,我們進一步評估了糖胺聚糖的表達情況。我們發(fā)現(xiàn)在術后6個月和12個月評估的GAG表達組間存在顯著差異,GAG在修復的軟骨中的表達低于正常軟骨。此外,我們發(fā)現(xiàn)對照組軟骨中GAG含量顯著低于實驗組(p0.05)。此外,在手術后6個月和12個月評估CHA支架植入組的GAG表達與正常組間沒有顯著差異。換句話說,植入CHA支架后修復的軟骨中GAG的含量幾乎達到正常水平(表7)。這表明CHA有利于刺激修復部位GAG的積累,并且GAG的積累隨時間增加。3.1橙皮苷可改善MSCs的自我更新能力橙皮苷的化學結構如圖1A所示。在實驗中用不同劑量的橙皮苷(0,1,5和10 μM)作用于MSC細胞,并通過集落形成和增殖測定方法評估細胞自我更新能力。經(jīng)橙皮苷處理后,集落的相對數(shù)量和平均大小均顯著增加至5μM(圖1B,C)。類似地,使用CCK-8測定的細胞活性的方法清楚地證明橙皮苷顯著刺激細胞增殖(圖1D)。然而,高劑量的橙皮苷(在我們的系統(tǒng)中為10 μM)產(chǎn)生了對集落形成和細胞增殖的輕微抑制(圖1B,C,D)。因此,選擇5μM的橙皮苷作為本研究中后續(xù)實驗的最佳劑量,并且據(jù)我們所知,這些發(fā)現(xiàn)提供了橙皮苷改善患者來源的MSC的干細胞特性,即高增殖、低分化和自我更新能力的第一證據(jù)。3.2橙皮苷增強MSC的軟骨形成能力接下來,我們試圖評估橙皮苷對MSCs軟骨形成能力的可能影響。在橙皮苷處理后,在MSC中誘導軟骨形成14天。如圖2A所示,AlcianBlμe染色顯示橙皮苷處理的MSC中的軟骨形成顯著增加。通過測量特異性軟骨形成標記物Sox9在分子水平上進一步證實了這些表型觀察,其中橙皮苷處理誘導了 Sox-9的明顯上調(diào)(圖2B)。我們的研究結果清楚地表明,除了自我更新能力,橙皮苷還能增強MSCs的軟骨形成能力。3.3橙皮苷抑制促炎細胞因子的分泌促炎細胞因子是先天和后天免疫反應的重要參與者。因此,我們在不使用或使用5μM橙皮苷的情況下分別對MSC進行處理,然后使用ELISA測量培養(yǎng)基中促炎細胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的水平。結果清楚地表明,與對照相比,橙皮苷處理抑制了所有上述細胞因子的分泌(圖3)。3.4橙皮苷抑制核因子κB(NF-κB)亞基p65的表達為了確定炎癥的程度,我們檢查了炎癥反應中生物標志物的表達,例如NF-κB亞基p65。我們在不使用或使用5μM橙皮苷的情況下分別處理MSC,然后檢查對p65表達的影響。我們發(fā)現(xiàn)橙皮苷處理顯著降低了p65的mRNA和蛋白水平(圖4A和4B),表明橙皮苷能夠抑制NF-κB亞基p65的表達。3.5 p65是橙皮苷抑制細胞因子分泌和增強軟骨形成所必需的然后我們進一步探討橙皮苷對p65的抑制作用是否與先前觀察到橙皮苷對細胞因子分泌的抑制作用相關。為此,我們在MSC中過表達p65,并證實p65的mRNA和蛋白質(zhì)水平都大大提高(圖5A和5B)。過表達p65能夠逆轉(zhuǎn)橙皮苷抑制促炎細胞因子IFN-y,IL-2,IL-4和IL-10的分泌(圖6),表明p65確實是抑制橙皮苷對MSC細胞因子分泌的必要條件。用針對NF-κB亞基p65的siRNA或空白對照轉(zhuǎn)導MSC,然后評估m(xù)RNA和p65的蛋白質(zhì)表達,基質(zhì)中IFN-y、IL-2、IL-4和IL-10的水平。將轉(zhuǎn)染p65siRNA或空白對照的MSC進行14天的分化誘導,然后評估軟骨形成標記物Sox9的mRNA表達,和軟骨形成程度。結果證實p65敲除可抑制IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的分泌,并增強MSC的軟骨形成(圖8)。接下來,我們進一步研究了p65對橙皮苷增強軟骨形成的作用。在不存在(對照)或存在5 μM橙皮苷的情況下,在軟骨形成誘導后第14天,用空載體對照或p65質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MSC。p65的過表達能夠逆轉(zhuǎn)橙皮苷在阿爾新藍染色(圖7A)和Sox9表達(圖7B)方面的增強作用,表明p65也是增強橙皮苷對MSC軟骨形成所必需的。結論總而言之,CHA支架對軟骨修復的影響表明它可能有助于促進缺損軟骨的修復,CHA支架植入物可以促進軟骨修復的關節(jié)修復。CHA支架的植入可以在一定程度上提高修復軟骨的抗壓縮能力。本研究初步證明了CHA支架在微骨折中的植入有利于軟骨的修復和減少損傷引起的軟骨退行性變化,但更多的動物仍需要進一步檢測以驗證其軟骨修復效果。當應用于微骨折手術時,CHA支架可以促進軟骨修復,并且有望用于軟骨組織工程領域。我們目前的研究表明,橙皮苷可作為治療劑,通過抑制炎癥促進軟骨組織修復,有效增強人MSCs的軟骨形成。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R68;R318.08
【圖文】：

CHA支架的SEM形態(tài)

光學顯微鏡檢查CHA的形態(tài)

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 劉少英;陳建英;陳倩倩;劉飛;劉霞;朱希強;凌沛學;;以交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉為支架體外構建組織工程軟骨[J];中國組織工程研究;2014年08期

本文編號：2741883