【摘要】：目的:研究在豬靜脈橋早期再狹窄模型中,中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin,NGAL)信號通路的表達(dá)及其作用機(jī)制,從而探求在冠狀動脈搭橋術(shù)后靜脈橋血管早期再狹窄發(fā)生中NGAL信號通路的可能作用及相關(guān)機(jī)制。方法:收集豬靜脈橋再狹窄模型術(shù)后7天、14天、30天共三個時間點的靜脈橋標(biāo)本來進(jìn)行檢測,并與未移植的大隱靜脈進(jìn)行對比,采用HE染色(hematoxylin-eosin staining),Masson染色,免疫組織化學(xué)染色等方法,觀察靜脈橋血管內(nèi)膜增生、血管重塑和平滑肌細(xì)胞遷移的情況,然后對NGAL、MMP9(matrix metalloprotenase-9)、MMP2(matrix metalloprotenase-2)、TIMP1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1)等因子在不同橋血管中的表達(dá)變化情況進(jìn)行檢測。結(jié)果:通過HE與Masson染色發(fā)現(xiàn),隨著建模時間的推移,橋血管膠原基質(zhì)逐漸降解,肌纖維增厚并向內(nèi)膜遷移,血管重塑,導(dǎo)致橋血管的狹窄。通過免疫組化可以看出,動物模型中NGAL、MMP9、MMP2因子在正常靜脈橋血管中極少表達(dá)甚至不表達(dá)。動物模型建立后第14天,NGAL開始表達(dá)在橋血管中膜層,NGAL在建模后30天在血管中膜層表達(dá)到高峰,并且在橋血管內(nèi)膜層出現(xiàn)表達(dá)。MMP9、MMP2在建模后7天開始出現(xiàn)表達(dá),表達(dá)高峰出現(xiàn)在建模第14天,30天后表達(dá)趨于正常水平。TIMP1在正常的靜脈血管壁表達(dá)甚少,在橋血管再狹窄建立后第14天的TIMP1表達(dá)出現(xiàn)峰值。結(jié)論:NGAL、MMP9、MMP2、TIMP1等因子可能參與了橋血管早期再狹窄的形成,NGAL作為起始因子,致使MMP9與MMP2的表達(dá)增多,參與了平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜的遷移以及基質(zhì)的降解。TIMP1作為負(fù)性因子,對維持自身平衡可能起到了重要的負(fù)性調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R654.2
【圖文】：

（圖 1）建模后血管壁結(jié)構(gòu)變化圖注：將標(biāo)本切片進(jìn)行 HE 染色，100 倍高倍鏡下觀察，細(xì)胞核呈藍(lán)色，膠原纖維呈淡粉紅色，肌纖維呈亮粉紅色。NC：術(shù)前對照組靜脈。馬松染色時膠原纖維呈藍(lán)綠色，胞質(zhì)、肌纖維和紅細(xì)胞呈紅色，胞核呈藍(lán)褐色。NC：術(shù)前對照組靜脈。2. 組織學(xué)和免疫組化染色2.1 NGAL 在橋血管中的表達(dá)通過對 NAGL 進(jìn)行免疫組化檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在正常大隱靜脈中，NAGL 在血管內(nèi)膜、中膜和外膜三層中表達(dá)均呈陰性或弱陽性；建模 7d 與正常靜脈相似，無明顯表達(dá)；建模后 14d 與正常靜脈相比，中膜層明顯出現(xiàn) NGAL 表達(dá)（P＜0.05），內(nèi)膜、外膜層未見明顯表達(dá)，建模后 30d 與正常靜脈相比，中膜層 NGAL的表達(dá)量增加（P＜0.05），并且有向內(nèi)膜層遷移的趨勢，而與建模后 14d 相比，表達(dá)量增加不明顯。由此可以看出，NGAL 參與到血管再狹窄的過程中，最初

（圖 2）NGAL 在橋血管中的表達(dá)圖注：運用免疫組化，NGAL 在術(shù)前與術(shù)后 7d、14d、30d 不同時間段的表達(dá)變化，棕褐色顆粒為陽性表達(dá)。*：建模后 14d 中膜層與正常靜脈 NGAL 比較表達(dá)量增加，P<0.05。**：建模后 30d 中膜層與正常靜脈 NGAL 比較表達(dá)量增加，P<0.05。2.2 MMP-9、MMP-2 在橋血管中的表達(dá)通過對MMP-9、MMP-2進(jìn)行免疫組化檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常大隱靜脈中MMP9幾乎不表達(dá)，建模后 7d 中膜層 MMP9 開始出現(xiàn)陽性表達(dá)（P＜0.05），與正常大隱靜脈比較，建模后 14d 中膜層陽性表達(dá)顯著（P＜0.05），并且內(nèi)膜層也出現(xiàn)陽性趨勢，建模后 30 d 中膜 MMP9 表達(dá)明顯減少。MMP2 也出現(xiàn)類似 MMP9的表達(dá)趨勢，。由此可以看出，MMP9 和 MMP2 在建模后 7d 中膜層出現(xiàn)明顯表達(dá)，在 14d 后出現(xiàn)表達(dá)高峰，內(nèi)膜層也出現(xiàn)表達(dá)，此后逐漸減少，30d 時 MMP9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2736508