【摘要】：目的:研究在豬靜脈橋早期再狹窄模型中,中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白(Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin,NGAL)信號通路的表達及其作用機制,從而探求在冠狀動脈搭橋術后靜脈橋血管早期再狹窄發(fā)生中NGAL信號通路的可能作用及相關機制。方法:收集豬靜脈橋再狹窄模型術后7天、14天、30天共三個時間點的靜脈橋標本來進行檢測,并與未移植的大隱靜脈進行對比,采用HE染色(hematoxylin-eosin staining),Masson染色,免疫組織化學染色等方法,觀察靜脈橋血管內(nèi)膜增生、血管重塑和平滑肌細胞遷移的情況,然后對NGAL、MMP9(matrix metalloprotenase-9)、MMP2(matrix metalloprotenase-2)、TIMP1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1)等因子在不同橋血管中的表達變化情況進行檢測。結果:通過HE與Masson染色發(fā)現(xiàn),隨著建模時間的推移,橋血管膠原基質(zhì)逐漸降解,肌纖維增厚并向內(nèi)膜遷移,血管重塑,導致橋血管的狹窄。通過免疫組化可以看出,動物模型中NGAL、MMP9、MMP2因子在正常靜脈橋血管中極少表達甚至不表達。動物模型建立后第14天,NGAL開始表達在橋血管中膜層,NGAL在建模后30天在血管中膜層表達到高峰,并且在橋血管內(nèi)膜層出現(xiàn)表達。MMP9、MMP2在建模后7天開始出現(xiàn)表達,表達高峰出現(xiàn)在建模第14天,30天后表達趨于正常水平。TIMP1在正常的靜脈血管壁表達甚少,在橋血管再狹窄建立后第14天的TIMP1表達出現(xiàn)峰值。結論:NGAL、MMP9、MMP2、TIMP1等因子可能參與了橋血管早期再狹窄的形成,NGAL作為起始因子,致使MMP9與MMP2的表達增多,參與了平滑肌細胞向內(nèi)膜的遷移以及基質(zhì)的降解。TIMP1作為負性因子,對維持自身平衡可能起到了重要的負性調(diào)節(jié)作用。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R654.2
【圖文】：

（圖 1）建模后血管壁結構變化圖注：將標本切片進行 HE 染色，100 倍高倍鏡下觀察，細胞核呈藍色，膠原纖維呈淡粉紅色，肌纖維呈亮粉紅色。NC：術前對照組靜脈。馬松染色時膠原纖維呈藍綠色，胞質(zhì)、肌纖維和紅細胞呈紅色，胞核呈藍褐色。NC：術前對照組靜脈。2. 組織學和免疫組化染色2.1 NGAL 在橋血管中的表達通過對 NAGL 進行免疫組化檢測結果發(fā)現(xiàn)，在正常大隱靜脈中，NAGL 在血管內(nèi)膜、中膜和外膜三層中表達均呈陰性或弱陽性；建模 7d 與正常靜脈相似，無明顯表達；建模后 14d 與正常靜脈相比，中膜層明顯出現(xiàn) NGAL 表達（P＜0.05），內(nèi)膜、外膜層未見明顯表達，建模后 30d 與正常靜脈相比，中膜層 NGAL的表達量增加（P＜0.05），并且有向內(nèi)膜層遷移的趨勢，而與建模后 14d 相比，表達量增加不明顯。由此可以看出，NGAL 參與到血管再狹窄的過程中，最初

（圖 2）NGAL 在橋血管中的表達圖注：運用免疫組化，NGAL 在術前與術后 7d、14d、30d 不同時間段的表達變化，棕褐色顆粒為陽性表達。*：建模后 14d 中膜層與正常靜脈 NGAL 比較表達量增加，P<0.05。**：建模后 30d 中膜層與正常靜脈 NGAL 比較表達量增加，P<0.05。2.2 MMP-9、MMP-2 在橋血管中的表達通過對MMP-9、MMP-2進行免疫組化檢測結果發(fā)現(xiàn)正常大隱靜脈中MMP9幾乎不表達，建模后 7d 中膜層 MMP9 開始出現(xiàn)陽性表達（P＜0.05），與正常大隱靜脈比較，建模后 14d 中膜層陽性表達顯著（P＜0.05），并且內(nèi)膜層也出現(xiàn)陽性趨勢，建模后 30 d 中膜 MMP9 表達明顯減少。MMP2 也出現(xiàn)類似 MMP9的表達趨勢，。由此可以看出，MMP9 和 MMP2 在建模后 7d 中膜層出現(xiàn)明顯表達，在 14d 后出現(xiàn)表達高峰，內(nèi)膜層也出現(xiàn)表達，此后逐漸減少，30d 時 MMP9

【參考文獻】

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本文編號：2736508