【摘要】：研究背景和目的創(chuàng)面愈合是一個非常復雜的過程,是現(xiàn)代醫(yī)學的重大挑戰(zhàn)。造成創(chuàng)面不愈合的因素很多,其中細胞因子的分泌的減少及血管形成受限是重要原因。由于具有多向分化潛能,免疫調(diào)節(jié)功能以及旁分泌作用,以間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)為核心的細胞療法逐漸成為治療創(chuàng)面的新選擇。其中,脂肪來源干細胞(Adipose-Derived Stem Cells,ASCs)可輕易并大量地從脂肪組織中獲取,是細胞療法中重要的干細胞來源。然而,目前分離及培養(yǎng)ASCs需要膠原酶及血清的使用,增加了生物污染的風險。此外,在體外擴增出一定量的ASCs需要特定的實驗條件且可能耗費數(shù)天到數(shù)周的時間。另外,許多研究表明,單純將ASCs懸液注入創(chuàng)面后,ASCs常因局部缺血而死亡且部分存留的ASCs易被宿主免疫系統(tǒng)消除。所有這些因素都會對削弱以ASCs為基礎的細胞療法的療效以及應用。最近我們實驗團隊制作并命名了一種新的脂肪組織來源的,可注射的脂肪干細胞膠(Extracellular Matrix/Stromal Vascular Fraction Gel,ECM/SVF-Gel)。通過物理剪切力的作用,ECM/SVF-Gel消除了脂肪中大部分脂類和其他不需要的成分,留下的主要是細胞外基質(zhì)(ECM)和SVF細胞,從而大大提高ASCs細胞的密度。因為ECM/SVF-Gel中含有豐富的ASCs,我們推測,ECM/SVF-Gel可以發(fā)揮細胞療法的作用,促進創(chuàng)面愈合。為了檢驗這一假設,我們開展體內(nèi)外實驗進行ECM/SVF-Gel對于創(chuàng)面修復治療的評估。方法與實驗結果首先,我們在體外評估了 ECM/SVF-Gel提取物中血管生成因子的表達及其促進血管生成的作用(成管能力鑒定)。接下來,我們在小鼠體內(nèi)評估了 ECM/SVF-Gel促進創(chuàng)面愈合的能力。體內(nèi)將ECM/SVF-Gel應用于裸鼠創(chuàng)面,對照組使用SVF細胞懸液和磷酸鹽緩沖生理鹽水注射液。在不同時間點對體內(nèi)血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)進行分析并測定了皮膚血管密度。結果表明,與對照組相比,ECM/SVF-Gel提取物含有高濃度的VEGF和bFGF并可以在體外誘導血管生成。體內(nèi)表明ECM/SVF-Gel相較于對照組能夠有效促進創(chuàng)面愈合,炎癥趨化因子MCP-1在創(chuàng)面愈合早期階段呈高表達,而在后期急劇降低。結論1、ECM/SVF-gel能促進創(chuàng)面愈合,其效果優(yōu)于SVF細胞懸液,在創(chuàng)面干細胞治療領域有較好的應用前景。2、ECM/SVF-gel能夠通過分泌成血管因子促進創(chuàng)面血管化。3、ECM/SVF-gel成血管因子的分泌可能與早期強烈的炎癥反應有關。4、ECM/SVF-Gel中高度濃縮的ECM成分可能是促進其更好地發(fā)揮細胞療法的重要因素。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R64
【圖文】：

圖１：邋ＥＣＭ／ＳＶＦ－ｇｅｌ的制備示意圖。吸脂術后獲取的脂肪組織１２００ｇ離心３分逡逑鐘，制成Ｃｏｌｅｍａｎ脂肪；然后在兩個聯(lián)通的注射器內(nèi)以１０ｍｌ／ｓｅｃ速度推注一分逡逑鐘使脂肪組織乳糜化；２０００ｇ離心３分鐘，中間層組織即為ＥＣＭ／ＳＶＦ－ｇｅｌ。逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ：邋Ｔｈｅ邋ｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＥＣＭ／ＳＶＦ－ｇｅｌ．邋Ａｄｉｐｏｓｅ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｏｂｔａｉｎｅｄ邋ａｆｔｅｒ邋ｌｉｐｏｓｕｃｔｉｏｎ逡逑ｗａｓ邋ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅｄ邋ａｔ邋１２００邋ｇ邋ｆｏｒ邋３邋ｍｉｎｕｔｅｓ邋ｔｏ邋ｍａｋｅ邋Ｃｏｌｅｍａｎ邋ｆａｔ；邋ｔｈｅｎ邋ｉｎ邋ａ邋ｔｗｏ－ｐａｓｓ邋ｓｙｒｉｎｇｅ逡逑ｔｈｅ邋ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ邋ｗａｓ邋ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ邋ａｔ邋ａ邋ｒａｔｅ邋ｏｆ邋１０邋ｍｌ／ｓｅｃ邋ｆｏｒ邋１邋ｍｉｎｕｔｅ邋ｔｏ邋ｍａｋｅ邋ｔｈｅ邋ａｄｉｐｏｓｅ逡逑ｔｉｓｓｕｅ邋ｍｉｌｋｙ；邋ｔｈｅ邋２０００邋ｇ邋ｗａｓ邋ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅｄ邋ｆｏｒ邋３邋ｍｉｎｕｔｅｓ邋ａｎｄ邋ｔｈｅ邋ｍｉｄｄｌｅ邋ｌａｙｅｒ逡逑ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ邋ｗａｓ邋Ｆｏｒ邋ＥＣＭ／ＳＶＦ－ｇｅｌ．逡逑２．邋ＥＣＭ／ＳＶＦ－ｇｅｌ電子顯微鏡掃描觀察逡逑Ａ．取材：將制備的ＥＣＭ／ＳＶＦ－ｇｅｌ組織由２７Ｇ針頭的注射器注射至濾紙表面，逡逑組織體積不超過８ｍｍ邋ｘ８ｍｍ邋ｘ５ｍｍ，充分暴露待觀察組織表面。逡逑Ｂ．清洗：ＰＢＳ液反復噴洗，去除組織表面血液或組織液，清晰暴露組織游逡逑

圖２：邋ＥＣＭ邋／邋ＳＶＦ－ｇｅｌ和新鮮脂肪組織的結構特征。通過ＳＥＭ評估ＥＣＭ邋／逡逑ＳＶＦ－ｇｅｌ和新鮮脂肪組織。對照脂肪組織具有相對良好的完整的ＥＣＭ結構（圖逡逑２（ａ））。機械加工后ＥＣＭ／ＳＶＦ－ｇｅｌ中的ＥＣＭ完整性略有下降（圖２（ｂ））。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２：邋Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ邋Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ邋ｏｆ邋ＥＣＭ／ＳＶＦ－ｇｅｌ邋ａｎｄ邋Ｆｒｅｓｈ邋Ａｄｉｐｏｓｅ邋Ｔｉｓｓｕｅｓ．逡逑ＥＣＭ／ＳＶＦ－ｇｅｌ邋ａｎｄ邋ｆｒｅｓｈ邋ａｄｉｐｏｓｅ邋ｔｉｓｓｕｅｓ邋ｗｅｒｅ邋ｅｖａｌｕａｔｅｄ邋ｂｙ邋ＳＥＭ．邋Ｔｈｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ａｄｉｐｏｓｅ逡逑１８逡逑

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 David C Dorn;August Dorn;;Stem cell autotomy and niche interaction in different systems[J];World Journal of Stem Cells;2015年06期

本文編號：2721383