【摘要】：目的:比較正常及劃傷后的兔軟骨細胞中的Micro302A、Micro498和Micro520E三種基因的水平變化。方法:獲取三周齡兔膝關(guān)節(jié)軟骨細胞作原代培養(yǎng)并制備細胞損傷模型。采用實時熒光定量PCR對正常軟骨細胞以及受到損傷后第1、3、5、7天四個時間點的軟骨細胞內(nèi)三種MicroRNA表達水平進行檢測。結(jié)果:成功獲取兔雙膝關(guān)節(jié)軟骨細胞并進行原代培養(yǎng)后,制備了細胞損傷模型。利用實時熒光定量PCR檢測分析后發(fā)現(xiàn):與正常組相比,Micro302A在損傷后第1天明顯升高,第3天達最高,在第5天降至接近正常組水平后繼續(xù)下降,在第7天降至最低。與正常組相比,Micro498在損傷后第1天沒有明顯變化,然后快速上升,同樣在第3天達到頂峰后緩慢下降,到第7天時達到與正常組相似水平。相較于前兩個基因,Micro520E的水平變化在四個觀察時間點內(nèi)較穩(wěn)定,變化幅度不大。呈現(xiàn)出第1天至第3天持續(xù)上升至最高,而后再逐步降低,到第7天略低于正常組水平的趨勢。結(jié)論:在兔膝關(guān)節(jié)軟骨損傷后不同的觀察時間點內(nèi),Micro302A、Micro498和Micro520E都有明顯不同的表達水平的變化,說明這三種MicroRNA在關(guān)節(jié)軟骨損傷后的修復(fù)過程中發(fā)揮了不同的作用,為以后利用MicroRNA治療關(guān)節(jié)軟骨損傷與修復(fù)提供了一定的實驗依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R684
【圖文】：

圖 1 六孔板內(nèi)細胞劃傷示意圖Fig1. Schematic diagram of scratch-wound modes in six-well節(jié)軟骨細胞的收集備集正常以及劃傷后 1、3、5、7 天的細胞樣本。5% 酒精、100-1000ul 普通吸頭（高壓無菌）、移液器BS 液和 15%胎牛血清培養(yǎng)液（室溫）、1.5ml 無菌無酶要的儀器設(shè)備有超凈工作臺、低溫高速離心機。節(jié)軟骨細胞的收集收集細胞的六孔板放置于超凈工作臺上，75% 酒精噴抽吸掉舊的培養(yǎng)液，用含雙抗的無菌 PBS 液輕輕洗滌 胰蛋白酶，與傳代培養(yǎng)步驟相同，顯微鏡下觀察可見

圖 2 取出的兔膝關(guān)節(jié)軟骨Fig2. Removed rabbit articular cartilage胞原代培養(yǎng)培養(yǎng)瓶內(nèi)進行兔膝關(guān)節(jié)軟骨細胞的原代培養(yǎng)，一左右軟骨細胞可貼壁達 90%（如圖 3）。提前一天代細胞每次可傳代至兩個新瓶，新代大約五天左光學(xué)顯微鏡 10×）

【參考文獻】

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本文編號：2714645