【摘要】：目的1.探索IL-1β誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng)的適宜濃度并觀察IL-1β對軟骨細(xì)胞自噬的影響;2.觀察機(jī)械應(yīng)力對炎性軟骨細(xì)胞表型及自噬的影響;3.觀察機(jī)械應(yīng)力對炎性軟骨細(xì)胞中Lnc RNA-MEG3表達(dá)的影響,初探機(jī)械應(yīng)力調(diào)控炎性軟骨細(xì)胞自噬的機(jī)制。方法1.分離并體外培養(yǎng)新生大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,分別用0 ng/m L、1 ng/m L、2.5ng/m L、5 ng/m L、10 ng/m L、15 ng/m L IL-1β干預(yù)軟骨細(xì)胞,Real-time PCR和Western Blot檢測II型膠原(Col-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP13)、自噬相關(guān)蛋白LC3和Beclin-1的表達(dá);2.用四點(diǎn)彎曲細(xì)胞力學(xué)加載儀對IL-1β處理的軟骨細(xì)胞加載1Hz不同強(qiáng)度的力學(xué)刺激2小時(shí),Real-time PCR和Western Blot檢測II型膠原(Col-2)、自噬相關(guān)蛋白p-m TOR、LC3、Beclin-1;自噬雙標(biāo)腺病毒轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞,力學(xué)干預(yù)后熒光顯微鏡下檢測自噬小體的形成。3.用四點(diǎn)彎曲細(xì)胞力學(xué)加載儀對IL-1β處理的軟骨細(xì)胞加載1 Hz不同強(qiáng)度的力學(xué)刺激2小時(shí),Real-time PCR檢測MEG3的表達(dá)的變化;si-RNA沉默MEG3,Real-time PCR檢測LC3、Beclin-1的表達(dá)。結(jié)果1.梯度濃度IL-1β處理大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,Col-2表達(dá)量與IL-1β濃度呈負(fù)相關(guān),MMP13表達(dá)量與IL-1β濃度在一定范圍內(nèi)呈正相關(guān);LC3及Beclin-1的表達(dá)量在一定范圍內(nèi)高于對照組,p-m TOR在IL-1β干預(yù)組的表達(dá)量均高于對照組。2.機(jī)械應(yīng)力干預(yù)5 ng/m L IL-1β處理的軟骨細(xì)胞后,2000μstrain組Col-2及LC3基因表達(dá)量較無應(yīng)力組及5000μstrain組上調(diào),差異具有顯著性(P0.05);2000μstrain組自噬標(biāo)記蛋白LC3II/I及Beclin-1相對表達(dá)量較5000μstrain組增高,2000μstrain組p-m TOR的表達(dá)較5000μstrain組減少,差異均具有顯著性(P0.05);自噬雙標(biāo)腺病毒轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞,力學(xué)干預(yù)后熒光顯微鏡下觀察到2000μstrain組自噬小體形成較對照組及5000μstrain組增加,差異具有顯著性(P0.05)。3.應(yīng)力干預(yù)5 ng/m L IL-1β處理的軟骨細(xì)胞后,2000μstrain組MEG3的表達(dá)量較對照組及5000μstrain減少;si-RNA沉默Lnc RNA-MEG3后,LC3及Beclin-1表達(dá)量明顯增加,差異具有顯著性(P0.05)。結(jié)論1.IL-1β刺激軟骨細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng),5 ng/m L IL-1β可用于構(gòu)建炎性軟骨細(xì)胞模型;低濃度IL-1β促進(jìn)軟骨細(xì)胞自噬。2.低強(qiáng)度周期性機(jī)械應(yīng)力促進(jìn)炎癥環(huán)境下的軟骨細(xì)胞的表型維持,促進(jìn)軟骨細(xì)胞自噬。3.機(jī)械應(yīng)力可以影響Lnc RNA-MEG3的表達(dá),調(diào)控炎癥環(huán)境中軟骨細(xì)胞的自噬水平。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R684.3

【參考文獻(xiàn)】

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1 徐飛岳;陳揚(yáng)超;;長鏈非編碼RNA在癌癥診斷中的應(yīng)用[J];轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)雜志;2014年05期

2 楊開祥;吳穎星;杜宇;劉芳娜;郭風(fēng)勁;;周期性單軸牽張力對前軟骨干細(xì)胞增殖影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];骨科;2012年02期

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