【摘要】：研究目的:據(jù)報(bào)道,褪黑激素(N-乙�；�-5-甲氧基色胺)可抑制某些類型腫瘤的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化和癌癥干細(xì)胞的干性。然而,褪黑激素對(duì)骨肉瘤的作用及其機(jī)制尚不清楚。本研究旨在研究褪黑激素對(duì)骨肉瘤進(jìn)展轉(zhuǎn)移及骨肉瘤干細(xì)胞的影響及其潛在機(jī)制。材料和方法:通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn),劃痕實(shí)驗(yàn),Transwell小室實(shí)驗(yàn),蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)等方法檢測(cè)褪黑激素對(duì)骨肉瘤細(xì)胞侵襲和遷移的影響以及SOX9介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路在其中的作用。通過(guò)腫瘤干細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)和流式分析實(shí)驗(yàn)等技術(shù),研究褪黑激素對(duì)骨肉瘤干細(xì)胞的抑制作用。利用小鼠皮下荷瘤及尾靜脈注射等體內(nèi)模型來(lái)評(píng)估褪黑激素對(duì)骨肉瘤干細(xì)胞的干性能力及對(duì)骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移的作用。研究結(jié)果:我們通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)首先確定褪黑激素不影響骨肉瘤增殖的藥理最高濃度,之后通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn),Transwell試驗(yàn)以研究褪黑激素對(duì)骨肉瘤遷移和侵襲的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組相比,褪黑激素可降低骨肉瘤遷移和侵襲的能力.通過(guò)CD133+標(biāo)記的流式細(xì)胞技術(shù)及腫瘤成球?qū)嶒?yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)褪黑激素可抑制骨肉瘤干細(xì)胞的干性能力。同時(shí),在褪黑激素刺激下,轉(zhuǎn)錄因子SOX9表達(dá)明顯降低。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)SOX9后,再次進(jìn)行劃痕實(shí)驗(yàn),Transwell遷移及侵襲實(shí)驗(yàn),CD133+標(biāo)記的流式細(xì)胞技術(shù)實(shí)驗(yàn),腫瘤干細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn),接通過(guò)發(fā)現(xiàn),SOX9過(guò)表達(dá)后的骨肉瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及腫瘤干細(xì)胞干性能力得到了增強(qiáng)。在siRNA敲降SOX9后,骨肉瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及干細(xì)胞干性能力被抑制。之后,對(duì)過(guò)表達(dá)SOX9的骨肉瘤細(xì)胞,予以褪黑激素刺激后,骨肉瘤的轉(zhuǎn)移能力和腫瘤干細(xì)胞的干性能力被抑制至過(guò)表達(dá)前水平。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果褪黑激素能有效的抑制骨肉瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和腫瘤干細(xì)胞的干性能力。研究結(jié)論:研究證明褪黑激素能有效的抑制骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲的能力。此外,褪黑激素顯著抑制骨肉瘤干細(xì)胞的成球效應(yīng)形成并調(diào)節(jié)骨肉瘤細(xì)胞的EMT標(biāo)記。體內(nèi)小鼠模型顯示褪黑激素顯著抑制骨肉瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。SOX9是介導(dǎo)褪黑激素作用的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。褪黑激素通過(guò)下調(diào)骨肉瘤中SOX9介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑來(lái)抑制癌癥干細(xì)胞。這些結(jié)果共同加深了對(duì)褪黑激素生物學(xué)功能以及抗骨肉瘤的理解,為骨肉瘤干細(xì)胞的干預(yù)提供了新的見(jiàn)解。
【圖文】：

褪黑激素參與骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲仍然未知。我們對(duì)ＨＯＳ和Ｕ２骨肉瘤逡逑細(xì)胞系進(jìn)行ＭＴＴ測(cè)定，所述細(xì)胞系在體外用不同劑量梯度的褪黑激素刺激４８小逡逑時(shí)。如圖１．１和圖１．２所示，當(dāng)褪黑激素的濃度是Ｏ．ＯｌｍＭ，邋０．０５ｍＭ，０．１ｍＭ，邋０．５ｍＭ，逡逑時(shí)，褪黑激素均未對(duì)ＨＯＳ骨肉瘤細(xì)胞或Ｕ２骨肉瘤細(xì)胞的增值產(chǎn)生影響，但當(dāng)褪逡逑黑激素的濃度為ＩｍＭ或更高濃度的褪黑激素可能喪失這些骨肉瘤細(xì)胞系的增殖能逡逑力。逡逑□邋ＤＭＳＯ逡逑■邋ｍｅｌａｔｏｎｉｎ逡逑１．５－，逡逑ｎ邐＊邐＊＊逡逑ｉ１０｜｜邋］｜邋ｆｌｉ邋ｉｉ邋ｎ．邋ｉ逡逑■邋１１１逡逑圖１．１不同濃度的褪黑激素對(duì)骨肉瘤ＨＯＳ細(xì)胞增殖的作用逡逑２３逡逑

褪黑激素參與骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲仍然未知。我們對(duì)ＨＯＳ和Ｕ２骨肉瘤逡逑細(xì)胞系進(jìn)行ＭＴＴ測(cè)定，所述細(xì)胞系在體外用不同劑量梯度的褪黑激素刺激４８小逡逑時(shí)。如圖１．１和圖１．２所示，當(dāng)褪黑激素的濃度是Ｏ．ＯｌｍＭ，邋０．０５ｍＭ，０．１ｍＭ，邋０．５ｍＭ，逡逑時(shí)，褪黑激素均未對(duì)ＨＯＳ骨肉瘤細(xì)胞或Ｕ２骨肉瘤細(xì)胞的增值產(chǎn)生影響，但當(dāng)褪逡逑黑激素的濃度為ＩｍＭ或更高濃度的褪黑激素可能喪失這些骨肉瘤細(xì)胞系的增殖能逡逑力。逡逑□邋ＤＭＳＯ逡逑■邋ｍｅｌａｔｏｎｉｎ逡逑１．５－，逡逑ｎ邐＊邐＊＊逡逑ｉ１０｜｜邋］｜邋ｆｌｉ邋ｉｉ邋ｎ．邋ｉ逡逑■邋１１１逡逑圖１．１不同濃度的褪黑激素對(duì)骨肉瘤ＨＯＳ細(xì)胞增殖的作用逡逑２３逡逑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R738.1

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本文編號(hào)：2707708