【摘要】：通過動物實驗及離體心肌細胞實驗,研究β1-腎上腺素受體激動劑加重布比卡因引起心肌損傷的原因及機制。一、觀察異丙腎上腺素及艾司洛爾對布比卡因中毒小鼠心肌細胞線粒體形態(tài)的影響。將12只小鼠采用隨機數字方法分為4組:對照組、布比卡因+鹽水組、布比卡因+異丙腎上腺素組、布比卡因+艾司洛爾組。分別腹腔注射0.1μg/g異丙腎上腺素、2.0μg/g艾司洛爾和鹽水5 min后,給予腹腔注射46.7μg/g布比卡因,3 min后將小鼠處死,取左心室心肌組織制備電鏡切片。依照Joshi et al.標準評價心肌線粒體損傷程度。二、觀察異丙腎上腺素及艾司洛爾對布比卡因中毒的離體心肌細胞線粒體形態(tài)的影響。酶解法獲SD大鼠心肌細胞后先選擇細胞模型,心肌細胞分為四組:DMEM靜置組、電刺激DMEM組、布比卡因靜置組、電刺激布比卡因組。其中DMEM即細胞培養(yǎng)液;布比卡因濃度為13.3μmol/ml,處理10 min。觀察靜置組與電刺激組心肌細胞線粒體電鏡切片的損傷程度,并依照Joshi et al.標準給予評分。選好電刺激心肌細胞模型后,將心肌細胞分為4組:對照組、布比卡因組、布比卡因+異丙腎上腺素組、布比卡因+異丙腎上腺素+艾司洛爾組。其中對照組細胞中加DMEM,其他組中布比卡因濃度為13.3μmol/,異丙腎上腺素濃度為5 nmol/L,艾司洛爾濃度為50 nmol/L。電刺激后離心,細胞固定后制作電鏡切片。依照Joshi et al.標準評價線粒體損傷程度。三、觀察異丙腎上腺素及艾司洛爾對布比卡因中毒的離體心肌細胞內活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)生成量的影響。酶解法獲得SD大鼠心肌細胞后先選擇細胞模型:利用連續(xù)波長多功能微孔板檢測儀檢測電刺激組與靜置組心肌細胞內ROS生成量(分組同上)。選好電刺激心肌細胞模型后,將心肌細胞分為10組:對照組、布比卡因組、布比卡因+異丙腎上腺素組、布比卡因+異丙腎上腺素+艾司洛爾組。對照組中同樣為DMEM,布比卡因濃度分別為8.9μmol/L、13.3μmol/L、20μmol/L。心肌細胞熒光染色并且加藥處理后,通過連續(xù)波長多功能微孔板檢測儀測ROS。以上心肌細胞實驗均重復三次。結果:1動物體內實驗顯示,布比卡因+鹽水組線粒體損傷程度評分明顯高于對照組(P0.01)。布比卡因+異丙腎上腺素組線粒體損傷程度明顯高于布比卡因+鹽水組(P0.05)。布比卡因+艾司洛爾組線粒體損傷程度明顯低于布比卡因+鹽水組(P0.01)。2新鮮分離心肌細胞模型工作狀態(tài)良好,電場刺激下心肌細胞呈節(jié)律性收縮;電刺激DMEM組并未引起線粒體腫脹及ROS產量增加(P0.05);而布比卡因組接受電刺激后線粒體腫脹程度顯著大于靜息細胞且ROS產量顯著增加(P0.05)。3心肌細胞線粒體損傷實驗中,布比卡因組線粒體損傷程度評分明顯高于對照組(P0.01)。布比卡因+異丙腎上腺素組線粒體損傷程度明顯高于布比卡因組(P0.05)。布比卡因+異丙腎上腺素+艾司洛爾組線粒體損傷程度明顯低于布比卡因+異丙腎上腺素組(P0.05)。4心肌細胞ROS生成量實驗中,布比卡因組心肌細胞內ROS值明顯高于對照組(P0.05);布比卡因(8.9μmol/L、13.3μmol/L)+異丙腎上腺素組心肌細胞內ROS值明顯高于同濃度布比卡因組(P0.05)。布比卡因(8.9μmol/L、13.3μmol/L)+異丙腎上腺素+艾司洛爾組ROS值較同濃度布比卡因+異丙腎上腺素組降低(P0.05)。但是當布比卡因為20.0μmol/L時,后面兩組的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。綜上所述,新鮮分離心肌細胞模型工作狀態(tài)良好,電刺激下心肌細胞呈節(jié)律性收縮,能更好地模擬臨床布比卡因中毒時心肌線粒體損傷;異丙腎上腺素可通過加重布比卡因導致的心肌細胞線粒體水腫程度,干擾線粒體代謝功能,并通過增加心肌細胞內ROS量,從而加重布比卡因的心臟毒性;艾司洛爾可通過減輕線粒體水腫程度,減少ROS生成量,從而降低該心肌細胞毒性。
【學位授予單位】：河北北方學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R614

【參考文獻】

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本文編號：2699622