【摘要】：目的探究SD大鼠骨髓來源的內(nèi)皮祖細胞(EPCs)條件培養(yǎng)基(EPC-CM)對脂肪間充質(zhì)干細胞(ADSCs)增殖和成骨分化能力的影響。方法體外分離、培養(yǎng)、擴增并鑒定SD大鼠ADSCs與EPCs。實驗設(shè)置3個不同濃度的EPC-CM培養(yǎng)ADSCs,分別為對照組(不含EPC-CM)、50%EPC-CM組和100%EPC-CM組。采用CCK-8檢測各組ADSCs的增殖活性;采用茜素紅及堿性磷酸酶(ALP)染色及茜素紅染色定性檢測各組ADSCs的成骨分化能力;使用ALP及鈣離子定量檢測比較各組ADSCs成骨分化能力。結(jié)果免疫熒光檢測提示ADSCs高表達表面特異性蛋白CD90,且經(jīng)誘導可向成骨、成軟骨和成脂方向分化。第2代EPCs高表達CD133和血管內(nèi)皮生長因子受體-2(VEGFR-2);在鋪有基質(zhì)膠的96孔培養(yǎng)板中可形成管腔樣結(jié)構(gòu),能夠特異性地攝取乙�；兔芏戎鞍缀虵ITC-UEA-1。與對照組相比,50%EPCCM組和100%EPC-CM組ADSCs增殖活性均明顯增加,且與EPC-CM濃度相關(guān)(P0.05)。ALP定量檢測培養(yǎng)14 d及21 d后50%EPC-CM組和100%EPC-CM組ADSCs的ALP活性均高于對照組(P0.05)。培養(yǎng)14 d和21 d后,50%EPC-CM組和100%EPC-CM組鈣離子含量均高于對照組(P0.05)。結(jié)論 EPC-CM能夠促進ADSCs的增殖與成骨分化能力,為闡明血管化細胞影響骨形成的機制提供了一定依據(jù)。
【圖文】：

?-1(圖2D)，表明目的細胞為EPCs。2．2ADSCs的培養(yǎng)和鑒定ADSCs于48h貼壁，原代細胞形態(tài)不均一，，呈成纖維細胞樣的長梭形(圖3A)。培養(yǎng)48h后可見集落形成;培養(yǎng)約7d時細胞鋪滿，經(jīng)傳代培養(yǎng)后形態(tài)逐漸均一呈“旋渦”(圖3B)。CCK-8檢測ADSCs增殖曲線與文獻［6］報道的ADSCs生長趨勢一致。第二代ADSCs免疫熒光鑒定顯示:CD90陽性(圖3C、3D)。經(jīng)誘導分化培養(yǎng)后能向成骨、成脂及成軟骨方向分化(圖4)。表明目的細胞為ADSCs。圖1EPCs形態(tài)學鑒定×100A:EPCs原代培養(yǎng)7d;B:DAPI細胞核染陽性;C:FITC標記的VEGFＲ-2染色陽性;D:TＲITC標記的CD133染色陽性圖2EPCs的功能鑒定A:EPCs具有成血管能力×100;B:DAPI細胞核染陽性×200;C:攝取乙�；兔芏戎鞍啄芰�(陽性)×200;D:結(jié)合FITC-UEA-1能力(陽性)×2002．3ADSCs的增殖活性CCK-8法檢測ADSCs增殖能力:生長培養(yǎng)基培養(yǎng)ADSCs可見ADSCs增殖曲線與文獻報道一致(圖5A)。隨著EPCs條件培養(yǎng)安徽醫(yī)科大學學報ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2018May;53(5)·927·

杉鉯狩湫緯?培養(yǎng)約7d時細胞鋪滿，經(jīng)傳代培養(yǎng)后形態(tài)逐漸均一呈“旋渦”(圖3B)。CCK-8檢測ADSCs增殖曲線與文獻［6］報道的ADSCs生長趨勢一致。第二代ADSCs免疫熒光鑒定顯示:CD90陽性(圖3C、3D)。經(jīng)誘導分化培養(yǎng)后能向成骨、成脂及成軟骨方向分化(圖4)。表明目的細胞為ADSCs。圖1EPCs形態(tài)學鑒定×100A:EPCs原代培養(yǎng)7d;B:DAPI細胞核染陽性;C:FITC標記的VEGFＲ-2染色陽性;D:TＲITC標記的CD133染色陽性圖2EPCs的功能鑒定A:EPCs具有成血管能力×100;B:DAPI細胞核染陽性×200;C:攝取乙�；兔芏戎鞍啄芰�(陽性)×200;D:結(jié)合FITC-UEA-1能力(陽性)×2002．3ADSCs的增殖活性CCK-8法檢測ADSCs增殖能力:生長培養(yǎng)基培養(yǎng)ADSCs可見ADSCs增殖曲線與文獻報道一致(圖5A)。隨著EPCs條件培養(yǎng)安徽醫(yī)科大學學報ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2018May;53(5)·927·

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