【摘要】:目的:探討體內(nèi)誘導(dǎo)合成低氧誘導(dǎo)因子-1ɑ(hypoxia-inducible factor-1ɑ,HIF-1ɑ)對跨區(qū)皮瓣內(nèi)VEGF(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的影響及其作用機制,為促進臨床皮瓣遠端早期血管化和提高其成活率提供新的理論思路。方法:選取健康成年雄性SD大鼠30只,體重在250-300g之間,并隨機分成3組,實驗組:激動劑處理組,抑制劑處理組;對照組:生理鹽水組。術(shù)前2小時及術(shù)后1、2、3天分別對3組進行腹腔注射藥物,激動劑組注射DMOG(二甲基乙二;拾彼),40mg/kg;抑制劑組注射YC-1[3-(5-羥甲基-2-呋喃基)-1-苯甲基吲唑],10mg/kg;對照組給予等體積生理鹽水。在大鼠背部左側(cè)建立一個以髂腰動脈為血管蒂,跨越肋間動脈和胸背動脈,肩胛下角為上邊界,髂后上棘連線為下邊界,后正中線為內(nèi)側(cè)邊界,腋后線為外側(cè)邊界,長12cm,寬3cm的矩形跨區(qū)皮瓣模型。觀察指標(biāo)包括:(1)術(shù)后7天通過肉眼觀察大體皮瓣的成活情況;(2)術(shù)后第7天通過M2 Image Analysis system圖像分析系統(tǒng)對皮瓣成活率進行計算(皮瓣成活率=皮瓣成活面積/皮瓣總面積);(3)通過造影技術(shù)檢測術(shù)后7天ChokeⅡ區(qū)血管生成情況;(4)通過HE染色法進行鏡下血管數(shù)量檢測;(5)通過Elisa法檢測術(shù)后7天不同組間HIF-1ɑ、VEGF表達量。(6)通過Western blot檢測術(shù)后7天不同組間HIF-1ɑ、VEGF表達量。(7)通過免疫組化檢測術(shù)后7天不同組間HIF-1ɑ、VEGF的表達情況。結(jié)果1.大體觀察:術(shù)后7天在3組皮瓣模型中,激動劑組皮瓣遠端壞死范圍明顯小于對照組和抑制劑組。激動劑組內(nèi)Choke II區(qū)出現(xiàn)血管擴張增生、貫通直達遠端皮瓣組織,而對照組Choke II內(nèi)血管未見明顯變化,且遠端皮瓣組織呈輕度暗黑色,抑制劑組內(nèi)Choke II血管出現(xiàn)中斷,遠端皮瓣組織出現(xiàn)壞死。2.壞死面積:術(shù)后7天采用高清數(shù)碼相機攝片,將圖片數(shù)據(jù)通過M2 Image Analysis system圖像分析系分別計算激動劑組、抑制劑組、對照組成活率(%)分別為90.38±1.36;84.28±1.45;85.83±1.59。與對照組相比,激動劑組高于對照組,有明顯差異性(P0.05),具有統(tǒng)計學(xué)意義;而抑制劑組與對照組相比未見明顯差異性,(P0.05),不具有統(tǒng)計學(xué)意義。3.造影:術(shù)后7天造影,激動劑組Choke vessels II區(qū)血管結(jié)構(gòu)密集清晰,可出現(xiàn)大面積血管吻合網(wǎng),而對照組和抑制劑組Choke vessels II區(qū)血管區(qū)血管結(jié)構(gòu)則稀少模糊不清,血管吻合網(wǎng)較少。4.HE染色法進行鏡下血管數(shù)量檢測:在10×20倍光學(xué)顯微鏡鏡下隨意選取5個視野觀測,根據(jù)實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)激動劑組在術(shù)后第7天有明顯的血管生長趨勢和血管數(shù)量的增生;對照組術(shù)后第7天也出現(xiàn)新鮮血管生長趨勢,但未見明顯血管數(shù)量增生;抑制劑組術(shù)后血管生長較差,未有明顯新血管增生。在Choke vessels II區(qū)中,平均血管數(shù)量為激動劑組24.00±5.52個;抑制劑組7.60±7.71個;對照組Choke vessels II區(qū)14.00±2.34個,激動劑組對照組抑制劑組。差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5.Elisa法檢測術(shù)后7天choke II區(qū)choke II區(qū)的HIF-1ɑ表達量為激動劑組對照組抑制劑組(分別為2.87±0.19;1.85±0.41;0.89±0.29,單位為ng/mg);VEGF表達量為激動劑組對照組抑制劑組,(分別為34.87±3.05;19.64±1.13;14.41±1.34,單位為ng/mg)。與對照組相比二者均由明顯差異性,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6.Western blot檢測HIF-1ɑ、VEGF:選取術(shù)后7天進行檢測,Choke vessels II區(qū)HIF-1ɑ、VEGF的灰度值/β-actin的灰度值大小來表示HIF-1ɑ、VEGF蛋白表達強度,其結(jié)果為激動劑組對照組抑制劑組,兩者與對照組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。7.免疫組化檢測內(nèi)HIF-1ɑ、VEGF表達:在40×10倍電子顯微鏡下觀察,發(fā)現(xiàn)現(xiàn)術(shù)后7天的激動劑組血管中HIF-1ɑ、VEGF表達明顯,對照組、抑制劑組血管中也可見HIF-1ɑ、VEGF的表達,但兩者表達量明顯小于激動劑組。結(jié)論1.HIF-1α的表達可明顯降低大鼠Choke vessles II區(qū)早期缺血的損傷程度。2.皮瓣移植術(shù)后,體內(nèi)誘導(dǎo)HIF-1α的高表達可促進跨區(qū)皮瓣VEGF的表達,進而促進皮瓣Choke vessels II區(qū)的血管新生,進一步加快了早期血管化的進程,促進了皮瓣遠端的血液供應(yīng),從而提高了大鼠背部跨區(qū)穿支皮瓣的成活。3.術(shù)后早期提高HIF-1α的表達有望成為促進跨區(qū)皮瓣成活的一種新途徑。
【圖文】:
縫合線原位縫合。術(shù)閉,用碘伏消毒液依次擦拭切口。為防止大鼠互咬皮瓣模型,術(shù)后均采用單籠飼養(yǎng),,自由進食水。所用動物操作臺術(shù)前均行紫外線照射,所用手術(shù)器械均高壓蒸汽滅菌。(附:圖1)2.3術(shù)后大體觀察皮瓣的成活情況術(shù)后 7 天分別對三組皮瓣成活情況進行肉眼觀察,觀察指標(biāo)主要包括:背部毛發(fā)生

術(shù)后7天激動劑組(A)、抑制劑組(B)、對照組(C)皮瓣大體觀
【學(xué)位授予單位】:甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2018
【分類號】:R622
【參考文獻】
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2698333
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