發(fā)布時(shí)間：2020-06-01 21:39

【摘要】：深度大面積燒燙傷的臨床治療效果遠(yuǎn)不能達(dá)到患者的期望,留下的瘢痕也給患者帶來極大的生理和心理創(chuàng)傷。找到一種更為有效的治療方法迫在眉睫。外泌體是細(xì)胞分泌的直徑為30-150 nm的雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡,它不僅在細(xì)胞通訊和免疫調(diào)節(jié)中起作用,其組織修復(fù)功能近年來也倍受關(guān)注。肌母細(xì)胞外泌體與干細(xì)胞外泌體相比,產(chǎn)量更能滿足燒燙傷臨床需要并且穩(wěn)定性更高。本課題以體內(nèi)外模型為對象,研究了肌母細(xì)胞外泌體治療燙傷的效果及其機(jī)制。取得如下主要研究結(jié)果:(1)建立了誘導(dǎo)鼠源肌母細(xì)胞C2C12分化促進(jìn)其外泌體分泌的培養(yǎng)條件,并通過超速離心方法分離獲得鼠源肌母細(xì)胞C2C12外泌體(以下簡稱C2C12-Ex)。誘導(dǎo)分化條件培養(yǎng)基為:含1%馬血清和0.3%胰島素的高糖DMEM。動(dòng)態(tài)光散射和透射電鏡分析所獲得的肌母細(xì)胞外泌體為圓形或橢圓形并具備雙層膜結(jié)構(gòu),粒徑為100nm左右;進(jìn)一步采用蛋白免疫印跡分析,發(fā)現(xiàn)所獲得的外泌體中含有大量的外泌體標(biāo)記蛋白CD63和TSG101;以上結(jié)果證明通過超速離心方法成功獲得肌母細(xì)胞外泌體。并采用BCA蛋白定量方法確定外泌體的產(chǎn)率為2 mg外泌體蛋白/1000 mL條件培養(yǎng)基。(2)建立了體外熱激小鼠成纖維細(xì)胞損傷模型,發(fā)現(xiàn)C2C12-Ex對該模型的細(xì)胞有明顯的促增殖和抗凋亡效應(yīng)。分別在40℃、43℃、46℃條件下熱水浴刺激小鼠胚胎成纖維細(xì)胞3T3-L1和成纖維細(xì)胞L929 40 min,在不同時(shí)間對細(xì)胞計(jì)數(shù),結(jié)果顯示,43℃刺激40 min為最適造模溫度;在選定的造模條件下,研究了C2C12-Ex對細(xì)胞損傷模型的修復(fù)效果,對增殖蛋白PCNA和抑凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)進(jìn)行分析,結(jié)果顯示,C2C12-Ex能在該細(xì)胞損傷模型中促進(jìn)PCNA和Bcl-2的表達(dá),表明C2C12-Ex對體外熱激受損的成纖維細(xì)胞3T3-L1和L929有明顯的促增殖和抑凋亡效應(yīng)。(3)建立了SD大鼠深Ⅱ度燙傷模型,并研究了C2C12-Ex對該模型的治療效果及可能機(jī)制。燙傷愈合實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),C2C12-Ex能顯著促進(jìn)大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合,且具有劑量效應(yīng);對創(chuàng)面組織角質(zhì)細(xì)胞的表面標(biāo)記CK19、增殖核抗原PCNA和新生血管標(biāo)記CD31的表達(dá)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)C2C12-Ex能加速創(chuàng)面更完整地完成表皮再生的過程,并能提前促進(jìn)細(xì)胞和血管大量再生;對各組膠原蛋白Ⅰ和膠原蛋白ⅢmRNA表達(dá)的分析發(fā)現(xiàn),C2C12-Ex在創(chuàng)面愈合過程中,能優(yōu)化燙傷創(chuàng)面皮膚組織膠原的產(chǎn)生,減少瘢痕的形成。以上研究結(jié)果為肌母細(xì)胞外泌體C2C12-Ex治療深Ⅱ度燙傷的臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【圖文】：

1 緒論 燒燙傷概述1 皮膚的結(jié)構(gòu)與功能皮膚是身體表面包在肌肉外面的組織，是人體最常見也是最大的器官，成展開后面積一般在 1.5 m2-2 m2之間，，占體重的 5%-15%。皮膚分為表皮、下組織三層，表皮由外到內(nèi)依次為角質(zhì)層、透明層、顆粒層、棘細(xì)胞層和真皮由纖維、基質(zhì)及細(xì)胞構(gòu)成，皮下組織由疏松的結(jié)締組織及脂肪小葉組中的附屬器官主要為汗腺、皮脂腺、毛囊、血管、和淋巴管等[2]。這些附屬調(diào)節(jié)體溫，潤滑皮膚，阻止微生物和其他有害物質(zhì)的入侵。皮膚的總體結(jié).1 所示。

1.2 外泌體研究進(jìn)展1.2.1 外泌體的生物學(xué)特性和起源在過去的二十年里，細(xì)胞外囊泡被認(rèn)為是細(xì)胞間通訊的重要媒介，它通過在細(xì)胞間運(yùn)輸細(xì)胞內(nèi)的活性分子而發(fā)揮功能，因此也可以確定這些囊泡參與了諸多生理過程[24]。外泌體屬于細(xì)胞外囊泡的一個(gè)亞群，大多數(shù)細(xì)胞都會(huì)產(chǎn)生外泌體，這種納米級(jí)囊泡具備脂質(zhì)雙層膜，呈圓形或橢圓形的茶托樣結(jié)構(gòu)，直徑大約在 30-150 nm 之間。盡管在 1983 年就發(fā)現(xiàn)了外泌體的存在，但過去一直認(rèn)為它是細(xì)胞廢棄物的一種，而最近幾年人們發(fā)現(xiàn)這種納米級(jí)膜泡中含有來源細(xì)胞特異的蛋白、糖、脂質(zhì)和核酸。細(xì)胞通過分泌外泌體來運(yùn)輸外泌體內(nèi)含有的蛋白、糖、脂質(zhì)和核酸來介導(dǎo)細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo)從而改變其他細(xì)胞的功能以及其代謝過程[25]。外泌體的經(jīng)典形狀和粒徑如圖 1.2 所示[26]。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R644

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 胡國文;李青;牛鑫;胡斌;劉鵑;沈曉黎;汪泱;鄧志鋒;;旋轉(zhuǎn)超濾:一種提取細(xì)胞外泌體的新方法[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年06期

2 秦云龍;李U嗞

本文編號(hào)：2692103