【摘要】：目的通過研究同時轉(zhuǎn)染表皮生長因子與血管內(nèi)皮生長因子基因的脂肪干細(xì)胞表達(dá)相關(guān)因子的水平,及其對成纖維細(xì)胞增殖、遷移和血管內(nèi)皮細(xì)胞成管能力的影響,探討生長因子基因轉(zhuǎn)染脂肪干細(xì)胞用于皮膚損傷修復(fù)的可行性。方法(一)取4周齡雄性SD大鼠,取雙側(cè)腹股溝區(qū)脂肪組織,利用酶消化法,提取大鼠脂肪干細(xì)胞,取P2代,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物CD73、CD90、CD45、CD11b,并誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞和成脂細(xì)胞方向分化。(二)構(gòu)建帶熒光慢病毒載體,將大鼠表皮生長因子與血管內(nèi)皮生長因子基因同時轉(zhuǎn)入脂肪干細(xì)胞,熒光顯微鏡下檢測轉(zhuǎn)染效率。(三)通過定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn),檢測基因轉(zhuǎn)染后脂肪干細(xì)胞合成相關(guān)基因的水平和分泌相應(yīng)生長因子的能力。(四)將基因轉(zhuǎn)染脂肪干細(xì)胞的培養(yǎng)上清,用來培養(yǎng)成纖維細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞,通過成纖維細(xì)胞增殖、成纖維細(xì)胞劃痕、成纖維細(xì)胞Transwell遷移和血管內(nèi)皮細(xì)胞成管等實(shí)驗(yàn),檢測其對成纖維細(xì)胞增殖、遷移和血管內(nèi)皮細(xì)胞成管能力的影響。結(jié)果(一)分離培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞倒置顯微鏡下呈長梭形、集落狀生長,流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞的相關(guān)表面分子表達(dá)率,顯示CD73、CD90的表達(dá)呈陽性,CD45、CD11b的表達(dá)呈陰性,P4代脂肪干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)向成骨細(xì)胞和成脂細(xì)胞方向分化后,分別用茜素紅和油紅O染色,均呈陽性;(二)慢病毒載體介導(dǎo)的表皮生長因子與血管內(nèi)皮生長因子基因能有效轉(zhuǎn)染脂肪干細(xì)胞;(三)同時轉(zhuǎn)染表皮生長因子與血管內(nèi)皮生長因子基因的脂肪干細(xì)胞能表達(dá)高水平的EGF、VEGF m RNA和蛋白;(四)同時轉(zhuǎn)染表皮生長因子與血管內(nèi)皮生長因子基因的脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)上清能促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖、成纖維細(xì)胞劃痕愈合、成纖維細(xì)胞Transwell遷移和血管內(nèi)皮細(xì)胞成管。結(jié)論(一)同時轉(zhuǎn)染表皮生長因子與血管內(nèi)皮生長因子基因的脂肪干細(xì)胞能表達(dá)高水平的EGF、VEGF m RNA和蛋白;(二)同時轉(zhuǎn)染表皮生長因子與血管內(nèi)皮生長因子基因的脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)上清能在體外促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖、遷移和血管內(nèi)皮細(xì)胞成管的能力,因此具有促進(jìn)皮膚損傷修復(fù)的潛能。
【圖文】：

圖 1A 原代 ADSC 第 3 天（40×） 圖 1B P3 代 ADSC（200×）圖 1 脂肪干細(xì)胞形態(tài)學(xué)表現(xiàn)，1A 是原代 ADSC 第三天，可見細(xì)胞貼壁，呈長梭形；1B 是 P3 代 ADSC，可見貼壁細(xì)胞數(shù)量變多，生長呈集落樣，細(xì)胞形態(tài)基本一致，似長梭形。

圖 1A 原代 ADSC 第 3 天（40×） 圖 1B P3 代 ADSC（200×）圖 1 脂肪干細(xì)胞形態(tài)學(xué)表現(xiàn)，1A 是原代 ADSC 第三天，可見細(xì)胞貼壁，，呈長梭形；1B 是 P3 代 ADSC，可見貼壁細(xì)胞數(shù)量變多，生長呈集落樣，細(xì)胞形態(tài)基本一致，似長梭形。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R622

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