發(fā)布時(shí)間：2020-05-26 08:09

【摘要】：目的:觀察右美托咪定預(yù)處理對(duì)離體大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)效果,進(jìn)一步明確JNK通路及其介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激性細(xì)胞凋亡在其中的作用。方法:60只體重為230-260g健康成年雄性大鼠,隨機(jī)分為5組(n=12):對(duì)照組(N組),缺血再灌注組(I/R組),右美托咪定預(yù)處理+缺血再灌注組(D組),JNK抑制劑SP600125+缺血再灌注組(SP組),右美托咪定+SP600125+缺血再灌注組(D+SP組)。經(jīng)腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉各實(shí)驗(yàn)大鼠后,快速開胸取出心臟。輕輕擠壓心腔排除淤血,迅速將主動(dòng)脈根部提起懸掛于Langendorff離體心臟灌注裝置的灌注針尖端,左心耳剪口插入已預(yù)先調(diào)零的乳膠水囊并調(diào)節(jié)其大小為LVEDP在4-7mm Hg。每組分別給予不同的灌注方案,N組采用K-H液持續(xù)灌注205min;IR組:在K-H液平衡15min后,用K-H液繼續(xù)灌注30min,之后停止灌注40min,再用K-H液繼續(xù)灌注120min;D組:在K-H液平衡灌注15min后,用含有右美托咪定的K-H液繼續(xù)灌注30min,之后處理同I/R組;SP組:在K-H液平衡灌注15min后,用含有SP600125的K-H液繼續(xù)灌注30min,之后處理同I/R組;D+SP組:K-H液平衡灌注15min后,用含有右美托咪定以及SP600125的K-H液繼續(xù)灌注30min,之后處理同I/R組。分別于平衡末(T1)、缺血前(T2)、再灌注末(T3)采集心功能指標(biāo):心率(HR)、左室內(nèi)壓最大上升/下降速率(±dp/dtmax)、左心室發(fā)展壓(LVDP)、左心室舒張末壓(LVEDP);留取再灌注末大鼠心肌組織:用ELISA法檢測(cè)c Tn I濃度,用TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率,電鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu),采用RT-PCR法檢測(cè)GRP78、JNK基因的含量,采用Western blot檢測(cè)GRP78、JNK、p-JNK蛋白的表達(dá);對(duì)各組大鼠再灌注末心臟行TTC染色法檢測(cè)心肌梗死面積。結(jié)果:(1)各組間心功能各項(xiàng)指標(biāo)在平衡末(T1)、缺血前(T2)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與T1時(shí)刻比較,各組大鼠再灌注末時(shí)刻(T3)的HR、±dp/dtmax、LVDP均明顯降低,LVEDP均顯著升高,(P0.05);在T3時(shí)點(diǎn),與N組相比,I/R組、D組、SP組、D+SP組的HR、±dp/dtmax、LVDP均明顯降低,LVEDP均顯著升高,(P0.05);與I/R組相比,D組、SP組、D+SP組的HR、±dp/dtmax、LVDP均明顯升高,LVEDP均顯著降低,(P0.05);且D組、SP組、D+SP組之間各項(xiàng)心功能指標(biāo)變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(2)與N組比較,I/R組、D組、SP組、D+SP組的c Tn I相對(duì)濃度、心肌梗死面積、心肌細(xì)胞凋亡率顯著增加,(P0.05);與I/R組相比,D組、SP組、D+SP組的c Tn I相對(duì)濃度、心肌梗死面積、心肌細(xì)胞凋亡率顯著降低,(P0.05);D組、SP組、D+SP組的c Tn I相對(duì)濃度、心肌梗死面積均無明顯變化,(P0.05);D組、D+SP組心肌細(xì)胞凋亡率無明顯變化,(P0.05);但D組、D+SP組心肌細(xì)胞凋亡率小于SP組,(P0.05)。(3)電鏡下觀察N組心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)完整;I/R組超微結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞,可明顯見到凋亡小體;D組、SP組、D+SP組心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)破壞較少,可偶見凋亡小體(4)與N組比較,I/R組GRP78基因以及蛋白的表達(dá)明顯增加,(P0.05),JNK基因以及P-JNK蛋白的表達(dá)明顯降低,(P0.05);與I/R組比較,其余各組GRP78基因以及蛋白表達(dá)明顯降低,JNK基因以及P-JNK蛋白的表達(dá)明顯降低,(P0.05)。結(jié)論:右美托咪定預(yù)處理可以有效減輕大鼠離體心肌缺血再灌注損傷,且這種保護(hù)作用可能與抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的JNK信號(hào)通路過度活化,從而減輕心肌細(xì)胞凋亡有關(guān)。
【圖文】：

之后處理同 I/R 組。圖 1 各實(shí)驗(yàn)分組的不同灌注流程圖1.2.3 數(shù)據(jù)采集與標(biāo)本收集將每一個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象設(shè)定平衡灌注末時(shí)點(diǎn)為 T1、缺血前時(shí)點(diǎn)為 T2，再灌注末時(shí)點(diǎn)為 T3，分別于三個(gè)時(shí)刻（T1、T2、T3）采集并記錄心功能指標(biāo)。于再灌注末每組取6 只大鼠心臟做 TTC 染色并檢測(cè)心肌梗死面積，，將另外的 6 只大鼠心臟分別于再灌末立即放入液氮罐冷凍固定 2 小時(shí)后置于-80℃冰箱保存，待后續(xù)采用 Tunel 法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡、采用 ELISA 法檢測(cè)心肌組織超敏肌鈣蛋白 I（cTnI）的表達(dá)、RT-PCR

20圖 2 三種基因擴(kuò)增曲線與溶解曲線（GAPDH-1、GRP78-1、JNK-1 分別代表相應(yīng)基因的擴(kuò)增曲線，GAPDH-2、GRP78-2、JNK-2 分別代表相應(yīng)基因的溶解曲線）
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R614

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 郝卯林;趙珊;陳海娥;陳丹;宋冬;何金波;汪洋;王萬鐵;;siRNA沉默過度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激下JNK基因在缺血/再灌注肺損傷中的作用[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;2014年01期

2 張改改;滕旭;劉越;吳揚(yáng);寧明;齊永芬;尹新華;;離體大鼠心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型構(gòu)建條件的優(yōu)化[J];中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2013年06期

3 許華山;陳勝喜;羅萬俊;蔣海河;;應(yīng)激對(duì)心肌缺血預(yù)適應(yīng)保護(hù)作用的影響[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年08期

4 Qi Yang;Feng-Ping Zheng;Ya-Shi Zhan;Jin Tao;Si-Wei Tan;Hui-Ling Liu;Bin Wu;;Tumor necrosis factor-α mediates JNK activation response to intestinal ischemia-reperfusion injury[J];World Journal of Gastroenterology;2013年30期

5 姜翠翠;夏滿莉;王敏;陳士票;;右美托咪定預(yù)處理減輕離體大鼠心臟缺血/再灌注損傷的線粒體相關(guān)機(jī)制[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年03期

6 邱曉曉;戴雍月;宋張娟;方周溪;王萬鐵;;SP600125對(duì)大鼠肺缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;2012年03期

7 邱曉曉;宋張娟;戴雍月;方周溪;王萬鐵;;三七總皂苷對(duì)肺缺血/再灌注損傷時(shí)細(xì)胞凋亡及c-Jun氨基末端激酶的影響[J];生理學(xué)報(bào);2012年02期

8 何云云;何昆侖;劉春蕾;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與心血管疾病研究概述[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2011年06期

9 ;Rapid mitogen-activated protein kinase by basic fibroblast growth factor in rat intestine after ischemia/reperfusion injury[J];World Journal of Gastroenterology;2003年06期

本文編號(hào)：2681541