【摘要】：目的:器官移植是目前治療器官衰竭以及終末期疾病的有效途徑,但器官移植術后的的免疫排斥反應極大的制約著器官移植的發(fā)展。接受器官移植術后的患者因為免疫排斥反應的存在需要長時間服用免疫抑制藥物,然而現(xiàn)在各種免疫抑制藥物及制劑不但效果不理想且毒副作用明顯。此外,很多免疫抑制藥物在用于治療器官移植術后排斥反應的同時,又誘發(fā)了腫瘤和各種疑難并發(fā)癥,極大的影響患者術后的生活質量。因此,新型理想免疫抑制劑的開發(fā)是解決移植術后排斥反應的急切需求。本研究首次將雷帕霉素衍生物替西羅莫司應用于器官移植領域,探究替西羅莫司的免疫抑制效果及其可能產(chǎn)生的機制。方法:采用小鼠頸部套管法建立從供體小鼠BalB/C到受體小鼠C57BL/6的同種異體心臟移植模型,通過替西羅莫司灌胃給藥組與空白液灌胃給藥組來對比心臟移植物生存期的長短,進而探索替西羅莫司能否延長移植物生存期。接著進行淋巴細胞轉化實驗和混合淋巴細胞培養(yǎng)實驗來摸索替西羅莫司是否抑制脾臟T細胞的活化增殖。進一步通過流式細胞術檢測調(diào)節(jié)性T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD19+B細胞的比例變化來探究替西羅莫司對T、B細胞亞群改變的影響。通過ELISA實驗以及qPCR實驗等對相關細胞因子IL-4、IL-10、IFN-y、TGF-β的轉錄水平以及表達水平進行檢測,進一步研究替西羅莫司抑制淋巴細胞免疫應答以及延長移植物生存期的機制。結果:替西羅莫司給藥組心臟移植物生存期天數(shù)較對照組明顯延長,且適宜濃度范圍的替西羅莫司對受體小鼠的體重無明顯影響。替西羅莫司給藥組,脾臟T淋巴細胞數(shù)量明顯下降;且CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD19+B細胞比例有一定程度的降低;血清中供者特異性抗體IgG1、IgG2、IgM有較為明顯的較少;脾臟、淋巴結中Treg細胞的比例有較為明顯升高。替西羅莫司給藥組進一步實驗檢測發(fā)現(xiàn)相關細胞因子IL-4、TGF-β、Foxp3和IL-10都呈現(xiàn)出明顯升高趨勢,細胞因子IFN-γ呈現(xiàn)明顯降低趨勢。在替西羅莫司停藥實驗中發(fā)現(xiàn),停藥組移植物生存期天數(shù)較持續(xù)給藥組明顯縮短。結論:替西羅莫司延長小鼠同種異體心臟移植的生存期,減輕移植物心臟炎性細胞浸潤程度,具有良好的免疫抑制功能。替西羅莫司抑制受體小鼠的細胞免疫,并且也通過抑制IgG1、IgG2、IgM等抗體生成來抑制受體小鼠的體液免疫;同時可促進Treg細胞的產(chǎn)生以及相關細胞因子TGF-β、Foxp3和IL-10的表達來誘導受體小鼠移植物達到長期存活狀態(tài)。本研究首次探討了雷帕霉素衍生物替西羅莫司在小鼠同種異體心臟移植中的免疫抑制效果,為開發(fā)既能抗腫瘤又能抗排斥的新型理想免疫抑制劑提供了可能,具有深遠的臨床應用意義。
【圖文】：

從而來研究這一問題。首次記錄受體小鼠體重的時間為移植術后６－８小時，逡逑之后每間隔２４小時稱量并記錄其體重；相關分組及平均體重數(shù)據(jù)如表３．２示。逡逑如圖３．３ａ所示，移植術后連續(xù)給藥８天內(nèi)，中、低濃度替西羅莫司給藥組逡逑與對照組相比：小鼠平均體重變化趨勢相同，說明中、低濃度替西羅莫司給藥不逡逑影響受體小鼠移植術后的體重；但高濃度的替西羅莫司給藥組與對照組相比，，小邐｜逡逑鼠平均體重變化趨勢存在明顯差異，說明高濃度替西羅莫司給藥會影響小鼠體重逡逑的改變；總的來說，適宜濃度的替西羅莫司對小鼠體重改變無影響。如圖３．３ｂ逡逑所示，適宜濃度（中濃度）替西羅莫司長時間給藥直到耐受（移植物生存期達到逡逑１００天及以上），受體鼠１、２、３術后體重并不會降低且呈現(xiàn)上升趨勢最終趨于逡逑穩(wěn)定，說明適宜濃度的替西羅莫司不影響術后小鼠的健康狀態(tài)。逡逑３１逡逑

邐８０邐１００逡逑Ｄａｙｓ邋ａｆｔｅｒ邋ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ邋（ｄ）逡逑圖３．２替西羅莫司對小鼠同種異體心臟移植生存期影響逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３．２邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ邋ｏｎ邋ｓｕｒｖｉｖａｌ邋ｏｆ邋ｍｏｕｓｅ邋ａｌｌｏｇｒａｆｔ邋ｈｅａｒｔ邋ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ逡逑３．１．３替西羅莫司對同種異體心臟移植術后小鼠健康狀態(tài)的影響逡逑不同濃度替西羅莫司給藥是否會對受體移植術后的健康狀態(tài)產(chǎn)生影響？本逡逑實驗根據(jù)每天記錄小鼠體重變化的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析并描制小鼠體重變化曲線逡逑圖，從而來研究這一問題。首次記錄受體小鼠體重的時間為移植術后６－８小時，逡逑之后每間隔２４小時稱量并記錄其體重；相關分組及平均體重數(shù)據(jù)如表３．２示。逡逑如圖３．３ａ所示，移植術后連續(xù)給藥８天內(nèi)，中、低濃度替西羅莫司給藥組逡逑與對照組相比：小鼠平均體重變化趨勢相同，說明中、低濃度替西羅莫司給藥不逡逑影響受體小鼠移植術后的體重；但高濃度的替西羅莫司給藥組與對照組相比，小邐｜逡逑鼠平均體重變化趨勢存在明顯差異，說明高濃度替西羅莫司給藥會影響小鼠體重逡逑的改變；總的來說，適宜濃度的替西羅莫司對小鼠體重改變無影響。如圖３．３ｂ逡逑所示，適宜濃度（中濃度）替西羅莫司長時間給藥直到耐受（移植物生存期達到逡逑１００天及以上）
【學位授予單位】：廈門大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R617

【參考文獻】

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1 張翼;;FDA批準套細胞淋巴癌治療新藥伊布魯替尼[J];藥品評價;2013年22期

2 盧芳;劉樹民;楊婷婷;;帕金森病的最新國內(nèi)外研究進展[J];中國老年學雜志;2009年09期

3 趙峻;張莉蓉;喬海靈;;免疫抑制劑硫唑嘌呤的藥物不良反應[J];中國誤診學雜志;2006年05期

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1 王偉銘;沈平雁;李灝;王朝暉;李婭;潘曉霞;任紅;陳楠;;糖皮質激素聯(lián)合免疫抑制劑CTX治療伴腎功能損傷的原發(fā)性IgA腎病的臨床研究[A];中國中西醫(yī)結合學會腎臟疾病專業(yè)委員會2015年學術年會資料匯編[C];2015年

本文編號：2675144