【摘要】：研究背景缺血再灌注損傷是長(zhǎng)期、嚴(yán)重腦損傷的主要原因之一。缺血再灌注損害神經(jīng)元功能并導(dǎo)致細(xì)胞死亡,尤其對(duì)海馬錐體神經(jīng)元。缺血性腦卒中往往發(fā)生在大腦主要?jiǎng)用}阻塞時(shí),大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)正是一種廣泛接受的用于研究缺血機(jī)制的動(dòng)物模型。盡管缺血再灌注卒中在臨床上有很高的發(fā)生率和病死率,但目前仍然缺乏有效的治療方法來(lái)減輕由此引起的神經(jīng)損傷。Toll樣受體-4(TLR4)是大腦中的第一道防線,主要位于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞上,包括小膠質(zhì)細(xì)胞,星形膠質(zhì)細(xì)胞和橄欖核細(xì)胞。Toll樣受體(TLR)屬于主要的非抗原特異性先天免疫機(jī)制。它們包括了一系列受體,這些受體在其配體結(jié)合后可用于識(shí)別與病原體相關(guān)的分子模式。它們還誘導(dǎo)幾種激酶和核因子-κB(NF-κ B)的激活。NF-κ B作為炎癥反應(yīng)的中樞調(diào)節(jié)因子,也影響信號(hào)通路TLR4并誘導(dǎo)許多參與先天免疫的促炎介質(zhì)。研究表明,TLR4/NF-KB通路與炎性細(xì)胞因子的釋放密切相關(guān),與心肌缺血再灌注損傷密切相關(guān)。近年來(lái),七氟醚在缺血再灌注損傷中的作用越來(lái)越引起人們的關(guān)注。研究表明,七氟醚后處理可通過(guò)降低血清腫瘤壞死因子-a(TNF-a),白細(xì)胞介素-1β(IL-1β),一氧化氮(NO),一氧化氮合酶(NOS)來(lái)增強(qiáng)免疫力并且還降低了人內(nèi)皮細(xì)胞中TLR2和TLR4的表達(dá)以及炎癥標(biāo)志物。研究表明,自噬和細(xì)胞凋亡參與了不同類(lèi)型的腦損傷。自噬是一種自我降解的過(guò)程,與許多神經(jīng)退行性疾病的病理過(guò)程有關(guān)。越來(lái)越多的證據(jù)支持自噬通過(guò)降解細(xì)胞自身內(nèi)蛋白質(zhì)和細(xì)胞器,激活細(xì)胞凋亡以促進(jìn)細(xì)胞死亡。Caspase-3和B細(xì)胞淋巴瘤2(Bcl-2)是重要的凋亡調(diào)節(jié)因子,可以決定細(xì)胞的命運(yùn)。此外,1輕鏈3(LC3)和Beclin-1參與神經(jīng)元自噬的調(diào)節(jié)。在許多嚴(yán)重的人類(lèi)疾病中觀察到炎癥或自噬途徑或兩者的紊亂,所以關(guān)于這些途徑之間的相互作用的信息不僅對(duì)于闡明人類(lèi)病癥的分子基礎(chǔ)至關(guān)重要,對(duì)于闡明一般細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑可能也是相當(dāng)重要的。眾多的研究表明,通過(guò)抑制TLR4/NF-kB信號(hào)通路可以改善腦細(xì)胞的凋亡。然而,尚不清楚TLR4/NF-κB信號(hào)通路是否參與MCAO誘導(dǎo)的I/R腦損傷。七氟醚是一種常用的揮發(fā)性麻醉劑,最近,許多研究表明,七氟醚后處理具有神經(jīng)保護(hù)作用。然而,七氟醚保護(hù)作用的潛在機(jī)制尚不完全清楚。因此,在本研究中,我們假設(shè)七氟醚通過(guò)抑制腦缺血期間的炎癥反應(yīng)、自噬和細(xì)胞凋亡而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,試圖通過(guò)TLR4-NF-κ B途徑驗(yàn)證七氟醚是否能改善MCAO大鼠的腦損傷。研究目的:1.建立大鼠腦缺血再灌注模型,對(duì)每組大鼠進(jìn)行不同處理,探討基于TLR4-NF-κ B通路,七氟烷后處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷抗炎作用研究。2.探討七氟醚后處理對(duì)腦缺血再灌注損傷后自噬水平的影響。研究方法:第一部分:將30只健康成年大鼠,隨機(jī)分為3組,每組10只。分為假手術(shù)組(Sham)、缺血再灌注損傷組(I/R)、七氟烷后處理組(Se)。建立大鼠MCAO模型,給予各組大鼠不同的七氟烷處理。然后采用H-E染色法觀察各組大鼠大腦梗死區(qū)域炎癥反應(yīng)水平,采用ELISA法檢測(cè)血清中促炎細(xì)胞因子INF-a、IL-1、IL-6的濃度,采用CRT及Western Blot檢測(cè)各組大鼠腦組織中TLR4、NF-κ B p65的mRNA及蛋白表達(dá)水平。第二部分:將40只健康成年大鼠(雄性),隨機(jī)分為4組,每組10只。分為假手術(shù)組(Sham)、缺血再灌注損傷組(I/R)、七氟烷后處理組(Se)、QNZ(EVP4593)(抑制劑)組。建立大鼠MCAO模型,給予各組大鼠不同的處理。采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力;TTC染色觀察腦組織梗死面積;TUNEL檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡;免疫組化檢測(cè)腦組織中TLR4和NF-KB蛋白表達(dá);透射電鏡觀察自噬小體;Western blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白及細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。研究結(jié)果:第一部分:(1)七氟烷后處理可降低缺血再灌注大鼠腦梗死區(qū)域炎癥反應(yīng)水平。(2)七氟烷后處理可降低缺血再灌注大鼠血清中促炎細(xì)胞因子INF-a、IL-1、IL-6的濃度。(3)七氟烷后處理可抑制TLR4-NF-κ B通路上關(guān)鍵基因TLR4、NF-kBp65的mRNA表達(dá)。(4)七氟烷后處理可抑制TLR4-NF-κ B通路上關(guān)鍵蛋白TLR4、NF-kBp65的表達(dá)。第二部分:(1)七氟烷后處理可改善由于腦缺血再灌注損傷而帶來(lái)的學(xué)習(xí)、記憶功能障礙。(2)七氟烷后處理可減小腦組織梗死面積。(3)七氟烷后處理可降低神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù),減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡。(4)七氟烷后處理可抑制腦組織中蛋白TLR4和NF-kB的表達(dá)。(5)七氟烷后處理可減少自噬小體空泡的形成。(6)七氟烷后處理可抑制自噬相關(guān)蛋白LC3I、LC3II和Beclin-1以及凋亡標(biāo)記蛋白Bad和Caspase-3的表達(dá),上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)水平。研究結(jié)論1.七氟烷后處理能降低腦缺血再灌注損傷引起的大鼠腦梗死區(qū)域的炎癥反應(yīng),降低血清中促炎細(xì)胞因子濃度,而起到神經(jīng)保護(hù)作用,該保護(hù)作用機(jī)制可能與TLR4-NF-κ B信號(hào)通路有關(guān)。2.七氟烷后處理可改善由于腦缺血再灌注損傷而帶來(lái)的學(xué)習(xí)、記憶功能障礙,減小腦組織梗死面積和神經(jīng)細(xì)胞凋亡,下調(diào)腦組織中TLR4和NF-κ B蛋白表達(dá),減少自噬小體空泡的形成,抑制自噬相關(guān)蛋白以及細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)。因此,七氟烷后處理可通過(guò)抑制自噬和細(xì)胞凋亡來(lái)發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,其對(duì)腦缺血再灌注損傷后自噬水平的影響機(jī)制與TLR4-NF-κB信號(hào)通路具有相關(guān)性。
【圖文】：

注：與假手術(shù)組相比，＾＜０．０５；與缺血再灌注損傷組相比，逡逑５．３七氟烷后處理對(duì)ＴＬＲ４－ＮＦ－ＫＢ通路上關(guān)鍵基因表達(dá)的影響逡逑如圖３所示，與假手術(shù)組比較，缺血再灌注損傷組的ＴＬＲ４ｍＲＮＡ、ＮＦ－ｋＢ逡逑ｐ６５ｍＲＮＡ表達(dá)升高至３．０８ｅｑ和２．邋ｌｌｅｑ，，七氟烷后處理組升為１．７９ｅｑ．、１．３９ｅｑ，逡逑差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（／Ｙｆｔ邋０５）；與缺血再灌注損傷組相比，七氟烷后處理組逡逑ＴＬＲ４邋ｍＲＮＡ和ＮＦ－ｋＢ邋ｐ６５ｍＲＮＡ的表達(dá)明顯降低（代歷）。以上結(jié)果證明，七逡逑氟烷后處理可顯著抑制ＴＬＲ４－ＮＦ－邋ｋ邋Ｂ通路上關(guān)鍵基因的表達(dá)。逡逑４．０邋ｒ逡逑？邐Ｉ邋ｉ邋Ｓｈａｍ逡逑３．５邋－邐Ｉ邋Ｒ逡逑Ｚ邐邐Ｓｅ逡逑＾邋３．０邋－邐ｗｍｍｍｍ逡逑－Ｂ邋＿Ｌ逡逑－

注：與假手術(shù)組相比，＾＜０．０５；與缺血再灌注損傷組相比，逡逑５．３七氟烷后處理對(duì)ＴＬＲ４－ＮＦ－ＫＢ通路上關(guān)鍵基因表達(dá)的影響逡逑如圖３所示，與假手術(shù)組比較，缺血再灌注損傷組的ＴＬＲ４ｍＲＮＡ、ＮＦ－ｋＢ逡逑ｐ６５ｍＲＮＡ表達(dá)升高至３．０８ｅｑ和２．邋ｌｌｅｑ，七氟烷后處理組升為１．７９ｅｑ．、１．３９ｅｑ，逡逑差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（／Ｙｆｔ邋０５）；與缺血再灌注損傷組相比，七氟烷后處理組逡逑ＴＬＲ４邋ｍＲＮＡ和ＮＦ－ｋＢ邋ｐ６５ｍＲＮＡ的表達(dá)明顯降低（代歷）。以上結(jié)果證明，七逡逑氟烷后處理可顯著抑制ＴＬＲ４－ＮＦ－邋ｋ邋Ｂ通路上關(guān)鍵基因的表達(dá)。逡逑４．０邋ｒ逡逑？邐Ｉ邋ｉ邋Ｓｈａｍ逡逑３．５邋－邐Ｉ邋Ｒ逡逑Ｚ邐邐Ｓｅ逡逑＾邋３．０邋－邐ｗｍｍｍｍ逡逑－Ｂ邋＿Ｌ逡逑－邋■■逡逑１0０＿逡逑％：ＩＩ邐■邐Ｉ邋Ｉ邋■逡逑ＴＬＲ４邋ｍＲＮＴＡ邐ＭＦ－ｋ：邋Ｂ邋ｐ６５ｍＲｌＳＩＡ逡逑圖３七氟烷后處理對(duì)ＴＬＲ４－ＮＦ－ＫＢ通路上關(guān)鍵基因表達(dá)的影響逡逑注：與假手術(shù)組相比，Ｔ＜０．0５；與缺血再灌注損傷組相比，爐＜０．０５。逡逑第２１頁(yè)共１１２頁(yè)逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R614

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 曹宇飛;;七氟烷在小兒臨床麻醉中的應(yīng)用分析[J];現(xiàn)代醫(yī)學(xué)與健康研究電子雜志;2017年09期

2 徐莉;;右美托咪啶復(fù)合七氟烷麻醉在小兒纖維支氣管鏡檢查中的應(yīng)用[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2017年10期

3 何峰;杜耀武;;七氟烷預(yù)處理對(duì)大鼠肢體缺血/再灌注所致肺損傷的影響[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2017年09期

4 尚荻;王大波;;探討七氟烷在小兒臨床麻醉中的應(yīng)用效果[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2014年35期

5 程俊;余晶晶;;七氟烷麻醉用于小兒腔鏡下疝修補(bǔ)術(shù)的臨床觀察[J];中國(guó)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育;2015年25期

6 牟煒洋;王雙;殷燕;;七氟烷麻醉骨折老年患者蘇醒期躁動(dòng)應(yīng)用右美托咪定的臨床效果觀察[J];健康之路;2016年09期

7 劉全成;;小兒七氟烷麻醉中不同劑量瑞芬太尼持續(xù)輸注下自主呼吸情況比較[J];健康之路;2016年09期

8 胡曉芳;;七氟烷復(fù)合瑞芬太尼用于腹腔鏡膽囊切除術(shù)的麻醉[J];健康之路;2017年01期

9 江山;;七氟烷和丙泊酚對(duì)老年胸外科患者術(shù)后認(rèn)知功能的影響觀察[J];家庭醫(yī)藥.就醫(yī)選藥;2016年09期

10 王傳福;朱巖;;七氟烷麻醉對(duì)老年患者腦保護(hù)的研究[J];健康之路;2017年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 種朋貴;高鴻;秦成名;;七氟烷對(duì)風(fēng)心病瓣膜置換術(shù)中術(shù)后房顫心律的影響和機(jī)制研究[A];2014年貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)麻醉學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)暨貴州省第五次臨床麻醉質(zhì)量控制會(huì)議論文匯編[C];2014年

2 鄒彬;;七氟烷預(yù)處理對(duì)低溫環(huán)境中失血性休克豬腦保護(hù)的研究[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)會(huì)[CSIA]年會(huì)暨第二屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)術(shù)研討會(huì)、江蘇省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)麻醉專(zhuān)業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2015年

3 周詠華;孫建良;孫平;;喉麻管復(fù)合七氟烷在小兒氣管異物取出術(shù)中的應(yīng)用[A];2009年浙江省麻醉學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

4 ;舒芬太尼在預(yù)防小兒七氟烷麻醉蘇醒后激惹中的應(yīng)用[A];2009年西部麻醉學(xué)術(shù)論壇論文匯編[C];2009年

5 張明強(qiáng);紀(jì)木火;邱麗麗;吳晶;楊建軍;;新生大鼠七氟烷暴露所致神經(jīng)行為異常與后天生活方式及環(huán)境相關(guān)[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)會(huì)[CSIA]年會(huì)暨第二屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)術(shù)研討會(huì)、江蘇省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)麻醉專(zhuān)業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2015年

6 鄧斌;張進(jìn);徐禮鮮;;七氟烷對(duì)電磁脈沖輻射性腦損傷的防護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制的研究[A];全國(guó)第四次麻醉藥理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨2013年貴州省麻醉學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2013年

7 唐松江;肖南;祝勁松;;七氟烷在小兒困難氣道處理中的應(yīng)用[A];2007年貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)麻醉學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

8 王壽勇;;異氟烷蒸發(fā)器用于小兒七氟烷麻醉的初步觀察[A];中國(guó)西南地區(qū)第九屆小兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

9 王麗晶;孫瑩杰;刁玉剛;張鐵錚;;七氟烷對(duì)失血性休克豬腸屏障損傷的保護(hù)作用[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)會(huì)[CSIA]年會(huì)暨第二屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)術(shù)研討會(huì)、江蘇省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)麻醉專(zhuān)業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2015年

10 安立新;李錦;任秀君;劉韞寧;王保國(guó);;不同穴組電針對(duì)七氟烷麻醉的影響[A];第十屆全國(guó)針刺麻醉針刺鎮(zhèn)痛及針刺調(diào)整效應(yīng)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 戴小河;恒瑞醫(yī)藥吸入用七氟烷獲美FDA認(rèn)證[N];中國(guó)證券報(bào);2015年

2 通訊員　 陳平 記者　 王波;我市3個(gè)項(xiàng)目列入[N];連云港日?qǐng)?bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 石存現(xiàn);七氟烷后處理基于TLR4-NF-κB通路對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[D];山東大學(xué);2018年

2 柴軍;七氟烷對(duì)大鼠肺缺血再灌注后組織通透性的影響[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2007年

3 李恒;七氟烷后處理激活大鼠缺血再灌注心肌補(bǔ)救酶途徑的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2008年

4 于洋;七氟烷致小鼠發(fā)育期大腦神經(jīng)毒性的機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2017年

5 董平;老齡加重缺血腦損傷并使七氟烷后處理保護(hù)失�。禾剿鰾cl-2作用[D];山東大學(xué);2016年

6 徐麗麗;自噬在七氟烷誘導(dǎo)的發(fā)育期大鼠海馬神經(jīng)毒性中的作用及機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2017年

7 成剛;七氟烷延遲后處理對(duì)離體大鼠心臟缺血再灌注損傷的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

8 高素敏;七氟烷后處理對(duì)非糖尿病及糖尿病小鼠心肌缺血再灌注損傷的影響及其與TOPK/PTEN/Akt通路的關(guān)系[D];華中科技大學(xué);2016年

9 李亮;運(yùn)動(dòng)通過(guò)下調(diào)肥胖心肌氧化應(yīng)激改善七氟烷預(yù)處理的心肌保護(hù)效應(yīng)[D];山東大學(xué);2016年

10 王樂(lè);七氟烷預(yù)處理對(duì)A549細(xì)胞及肺癌患者血清miRNA和炎性因子的影響[D];蘇州大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 樊佳;宮腔鏡手術(shù)七氟烷最低肺泡有效濃度測(cè)定[D];川北醫(yī)學(xué)院;2018年

2 蒲勁宏;七氟烷對(duì)骨肉瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響及機(jī)制研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2018年

3 賴(lài)增燕;地氟烷和七氟烷復(fù)合丙泊酚麻醉在機(jī)器人腔鏡手術(shù)中的效果觀察[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

4 唐茜茜;體外循環(huán)中七氟烷的肺保護(hù)效應(yīng)機(jī)制研究進(jìn)展[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

5 李小芳;異丙酚與七氟烷對(duì)糖尿病患者術(shù)中糖耐量影響的比較[D];山西醫(yī)科大學(xué);2018年

6 張興;L型鈣離子通道CaV1.2蛋白在大鼠七氟烷麻醉中的作用研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2018年

7 方楚龍;不同濃度七氟烷全程吸入在小兒先天性心臟病矯治術(shù)中心肌保護(hù)作用的研究[D];云南中醫(yī)學(xué)院;2018年

8 劉嘉穎;七氟烷影響小鼠胚胎干細(xì)胞自我更新能力的分子機(jī)制研究[D];鄭州大學(xué);2018年

9 江家龍;基于代謝組學(xué)探討七氟烷對(duì)大鼠發(fā)育神經(jīng)的毒性機(jī)制[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

10 邵春曉;七氟烷預(yù)處理對(duì)先天性心臟病合并肺動(dòng)脈高壓患者圍術(shù)期血清GDF-15、TNF-α、cTnⅠ表達(dá)的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2665498