【摘要】：目的硫酸氨基葡萄糖對(duì)頸椎軟骨終板軟骨細(xì)胞退變影響的研究方法1.取材根據(jù)pfirrmann椎間盤退變?cè)u(píng)級(jí)準(zhǔn)(Ⅰ-Ⅴ)共5型的人頸椎間盤軟骨終板,使用酶解消化的方法獲取頸椎間盤軟骨終板當(dāng)中的軟骨細(xì)胞,并用甲苯胺藍(lán)染色液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)鑒定軟骨細(xì)胞,使用相差顯微鏡來(lái)觀察軟骨細(xì)胞的生長(zhǎng)情況并用比色法繪制生長(zhǎng)曲線。2.從軟骨終板中成功分離出軟骨細(xì)胞在體外培養(yǎng)至3代,每一型中取一組典型細(xì)胞分別標(biāo)記為A、B、C、D、E五組,每組實(shí)驗(yàn)設(shè)為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組(實(shí)驗(yàn)組為10μM、100μM、1000μM濃度硫酸氨基葡萄糖)分別干預(yù)72小時(shí),通過(guò)q-PCR檢測(cè)Ⅱ型膠原、多聚蛋白聚糖(Aggrecan)、MMP-3和MMP-13基因的表達(dá)。結(jié)果一、利用酶消化法獲得了形態(tài)正常,獲取大量純凈的軟骨細(xì)胞,并能在體外穩(wěn)定增殖。二、1、GS對(duì)多聚蛋白聚糖(Aggrecan)基因表達(dá)(1)A組:GS濃度為10μΜ下調(diào)Aggrecan基因的表達(dá),GS濃度為100μΜ、1000μΜ時(shí)上調(diào)Aggrecan基因的表達(dá);B、C組:GS濃度為10μΜ上調(diào)Aggrecan基因的表達(dá),GS濃度為100μΜ、1000μΜ時(shí)下調(diào)Aggrecan基因的表達(dá);D組:GS濃度為10μΜ、100μΜ時(shí)上調(diào)Aggrecan基因的表達(dá),GS濃度為10μΜ上調(diào)Aggrecan基因的表達(dá);E組:GS濃度為10μΜ上調(diào)Aggrecan基因的表達(dá),GS濃度為10μΜ、100μΜ時(shí)下調(diào)Aggrecan基因的表達(dá)。(2)GS為0、10μΜ時(shí),B、C、D、E與A相比上調(diào)Aggrecan基因的表達(dá);GS為100μΜ時(shí),B、C、D、E與A相比都下調(diào)Aggrecan基因的表達(dá);GS為1000μΜ時(shí),B、D、E與A相比都上調(diào)Aggrecan基因的表達(dá),C與A相比下調(diào)Aggrecan基因的表達(dá)。2、GS對(duì)Ⅱ型膠原的基因表達(dá)(1)A、B組:GS濃度為10μΜ、100μΜ時(shí),上調(diào)Ⅱ型膠原的基因表達(dá),GS濃度為1000μΜ時(shí),上調(diào)Ⅱ型膠原的基因表達(dá);C、D、E組:GS濃度為100μΜ、100μΜ、1000μΜ時(shí),下調(diào)Ⅱ型膠原的基因表達(dá);(2)GS在0、10μΜ時(shí),B、C、D與A相比都上調(diào)Ⅱ型膠原的基因的表達(dá),E與相比下調(diào)Ⅱ型膠原基因的表達(dá);GS為100μΜ時(shí),B、C、D、E與A相比都下調(diào)Ⅱ型膠原基因的表達(dá);GS為1000μΜ,B、D、E與A相比都上調(diào)Ⅱ型膠原基因的表達(dá),C與A相比下調(diào)Ⅱ型膠原基因的表達(dá)。3、GS對(duì)MMP-3基因表達(dá)(1)A、D組:GS濃度為10μΜ、100μΜ、1000μΜ時(shí)上調(diào)MMP-3基因表達(dá);B組:GS濃度為10μΜ、100μΜ時(shí)下調(diào)MMP-3基因表達(dá),GS濃度為1000μΜ時(shí)上調(diào)MMP-3基因表達(dá);C組:GS濃度為10μΜ、100μΜ時(shí)上調(diào)MMP-3基因表達(dá),GS濃度為1000μΜ時(shí)下調(diào)MMP-3基因表達(dá);E組:GS濃度為10μΜ、1000μΜ時(shí)上調(diào)MMP-3基因表達(dá),GS濃度為100μΜ下調(diào)MMP-3基因表達(dá);(2)GS的濃度10μΜ:B、C、D、E與A相比上調(diào)MMP-13基因的表達(dá);GS的濃度為100μΜ:B、E與A相比是上調(diào)MMP-13基因的表達(dá),C、D與A相比都是下調(diào)MMP-13基因的表達(dá);GS的濃度為1000μΜ:B、D與A相比上調(diào)MMP-13基因的表達(dá),C、E與A相比下調(diào)MMP-13基因的表達(dá)。4、GS對(duì)MMP-13基因表達(dá)(1)A、B、C組:GS濃度為10μΜ、100μΜ、1000μΜ時(shí)上調(diào)MMP-13基因表達(dá);D組:GS濃度為10μΜ、100μΜ時(shí)下調(diào)MMP-13基因表達(dá),GS濃度為1000μΜ時(shí)上調(diào)MMP-13基因表達(dá);D組:GS濃度為10μΜ、1000μΜ時(shí)下調(diào)MMP-13基因表達(dá),GS濃度為100μΜ時(shí)上調(diào)MMP-13基因表達(dá);(2)GS在0、10μΜ時(shí)B、C、D、E與A相比下調(diào)MMP-13基因的表達(dá);GS為100μΜ時(shí),B、C、D、與A相比下調(diào)MMP-3基因的表達(dá),E與A相比下調(diào)MMP-3基因的表達(dá);GS為1000μΜ時(shí),C、D、E與A相比下調(diào)MMP-3基因的表達(dá),B與A相比下調(diào)MMP-3基因的表達(dá)。結(jié)論:1、GS對(duì)聚集蛋白聚糖(Aggrecan)基因表達(dá):10μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ-Ⅴ型退變頸椎軟骨軟骨終板軟骨細(xì)胞中的聚集蛋白聚糖(Aggrecan)基因表達(dá);100、1000μΜ的GS下調(diào)Ⅰ-Ⅴ型退變頸椎軟骨軟骨終板細(xì)胞中聚集蛋白聚糖(Aggrecan)基因表達(dá)。2、GS對(duì)Ⅱ型膠原蛋白基因表達(dá):10μΜ、100μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ、Ⅱ型退變頸椎軟骨終板軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原蛋白基因表達(dá),下調(diào)Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原蛋白基因表達(dá);1000μΜ濃度GS下調(diào)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原蛋白基因表達(dá)。3、GS對(duì)MMP-3基因表達(dá):10μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨細(xì)胞MMP-3基因表達(dá),下調(diào)Ⅱ型退變頸椎軟骨終板軟骨細(xì)胞MMP-3基因表達(dá);100μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型退變頸椎軟骨終板軟骨MMP-3細(xì)胞基因表達(dá),下調(diào)Ⅱ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨細(xì)胞MMP-3基因表達(dá);1000μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨MMP-3細(xì)胞基因表達(dá),下調(diào)Ⅲ型退變頸椎軟骨終板軟骨細(xì)胞MMP-3基因表達(dá)。4、GS對(duì)MMP-13基因表達(dá):10μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型退變頸椎軟骨終板軟骨細(xì)胞MMP-13基因表達(dá),下調(diào)Ⅳ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨細(xì)胞MMP-13基因表達(dá);100μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ、Ⅱ型退變頸椎軟骨終板軟骨MMP-13細(xì)胞基因表達(dá),下調(diào)Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨細(xì)胞MMP-13基因表達(dá);1000μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、型退變頸椎軟骨終板軟骨MMP-13細(xì)胞基因表達(dá),下調(diào)Ⅲ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨細(xì)胞MMP-13基因表達(dá)。說(shuō)明不同濃度的GS對(duì)某些退變類型的頸椎軟骨終板有一定的保護(hù)作用,但其作用機(jī)制比較復(fù)雜。
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R681.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 曹旺烽;陳長(zhǎng)賢;;椎間盤軟骨終板退變的研究進(jìn)展[J];中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志;2016年10期

2 田野;徐瑩;付勤;;骨關(guān)節(jié)炎不同病變程度部位軟骨細(xì)胞分化的比較研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2016年03期

3 胡舟揚(yáng);李新華;崔健;孫貴新;譚軍;李立鈞;;椎體終板退變機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)脊柱脊髓雜志;2016年02期

4 陳巖;王擁軍;徐浩;丁道芳;周泉;盧盛;施杞;梁倩倩;;川芎嗪對(duì)白介素-1β誘導(dǎo)退變的椎間盤終板軟骨細(xì)胞的保護(hù)作用[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年05期

5 牛凱;趙永見;姚長(zhǎng)風(fēng);梁倩倩;李晨光;張宇;鄭為超;王擁軍;;苦杏仁苷對(duì)IL-1β誘導(dǎo)后大鼠椎間盤軟骨終板細(xì)胞的影響[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2013年12期

6 楊建輝;呂建國(guó);聶會(huì)勇;申曉東;;氨基葡萄糖對(duì)白細(xì)胞介素1β誘導(dǎo)體外培養(yǎng)人骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞蛋白聚糖代謝的影響[J];中國(guó)組織工程研究;2012年33期

7 吳子英;李云霞;陳世益;;氨基葡萄糖在骨性關(guān)節(jié)炎治療中的應(yīng)用[J];上海醫(yī)藥;2012年15期

8 江敏;;氨基葡萄糖的藥理學(xué)研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥房;2010年17期

9 吳靖平;朱斌;丁磊;余作沖;葉宣光;;大鼠椎間盤軟骨終板退變與細(xì)胞凋亡的形態(tài)計(jì)量學(xué)研究[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年02期

10 陳曉東;林建華;;硫酸氨基葡萄糖對(duì)大鼠軟骨細(xì)胞復(fù)制性老化的作用[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 王曉濱;硫酸氨基葡萄糖對(duì)白細(xì)胞介素1β誘導(dǎo)人骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞合成前列腺素E_2和一氧化氮的影響[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

，

本文編號(hào)：2665341