【摘要】：目的硫酸氨基葡萄糖對頸椎軟骨終板軟骨細胞退變影響的研究方法1.取材根據(jù)pfirrmann椎間盤退變評級準(Ⅰ-Ⅴ)共5型的人頸椎間盤軟骨終板,使用酶解消化的方法獲取頸椎間盤軟骨終板當(dāng)中的軟骨細胞,并用甲苯胺藍染色液對細胞進行檢測鑒定軟骨細胞,使用相差顯微鏡來觀察軟骨細胞的生長情況并用比色法繪制生長曲線。2.從軟骨終板中成功分離出軟骨細胞在體外培養(yǎng)至3代,每一型中取一組典型細胞分別標(biāo)記為A、B、C、D、E五組,每組實驗設(shè)為對照組和實驗組(實驗組為10μM、100μM、1000μM濃度硫酸氨基葡萄糖)分別干預(yù)72小時,通過q-PCR檢測Ⅱ型膠原、多聚蛋白聚糖(Aggrecan)、MMP-3和MMP-13基因的表達。結(jié)果一、利用酶消化法獲得了形態(tài)正常,獲取大量純凈的軟骨細胞,并能在體外穩(wěn)定增殖。二、1、GS對多聚蛋白聚糖(Aggrecan)基因表達(1)A組:GS濃度為10μΜ下調(diào)Aggrecan基因的表達,GS濃度為100μΜ、1000μΜ時上調(diào)Aggrecan基因的表達;B、C組:GS濃度為10μΜ上調(diào)Aggrecan基因的表達,GS濃度為100μΜ、1000μΜ時下調(diào)Aggrecan基因的表達;D組:GS濃度為10μΜ、100μΜ時上調(diào)Aggrecan基因的表達,GS濃度為10μΜ上調(diào)Aggrecan基因的表達;E組:GS濃度為10μΜ上調(diào)Aggrecan基因的表達,GS濃度為10μΜ、100μΜ時下調(diào)Aggrecan基因的表達。(2)GS為0、10μΜ時,B、C、D、E與A相比上調(diào)Aggrecan基因的表達;GS為100μΜ時,B、C、D、E與A相比都下調(diào)Aggrecan基因的表達;GS為1000μΜ時,B、D、E與A相比都上調(diào)Aggrecan基因的表達,C與A相比下調(diào)Aggrecan基因的表達。2、GS對Ⅱ型膠原的基因表達(1)A、B組:GS濃度為10μΜ、100μΜ時,上調(diào)Ⅱ型膠原的基因表達,GS濃度為1000μΜ時,上調(diào)Ⅱ型膠原的基因表達;C、D、E組:GS濃度為100μΜ、100μΜ、1000μΜ時,下調(diào)Ⅱ型膠原的基因表達;(2)GS在0、10μΜ時,B、C、D與A相比都上調(diào)Ⅱ型膠原的基因的表達,E與相比下調(diào)Ⅱ型膠原基因的表達;GS為100μΜ時,B、C、D、E與A相比都下調(diào)Ⅱ型膠原基因的表達;GS為1000μΜ,B、D、E與A相比都上調(diào)Ⅱ型膠原基因的表達,C與A相比下調(diào)Ⅱ型膠原基因的表達。3、GS對MMP-3基因表達(1)A、D組:GS濃度為10μΜ、100μΜ、1000μΜ時上調(diào)MMP-3基因表達;B組:GS濃度為10μΜ、100μΜ時下調(diào)MMP-3基因表達,GS濃度為1000μΜ時上調(diào)MMP-3基因表達;C組:GS濃度為10μΜ、100μΜ時上調(diào)MMP-3基因表達,GS濃度為1000μΜ時下調(diào)MMP-3基因表達;E組:GS濃度為10μΜ、1000μΜ時上調(diào)MMP-3基因表達,GS濃度為100μΜ下調(diào)MMP-3基因表達;(2)GS的濃度10μΜ:B、C、D、E與A相比上調(diào)MMP-13基因的表達;GS的濃度為100μΜ:B、E與A相比是上調(diào)MMP-13基因的表達,C、D與A相比都是下調(diào)MMP-13基因的表達;GS的濃度為1000μΜ:B、D與A相比上調(diào)MMP-13基因的表達,C、E與A相比下調(diào)MMP-13基因的表達。4、GS對MMP-13基因表達(1)A、B、C組:GS濃度為10μΜ、100μΜ、1000μΜ時上調(diào)MMP-13基因表達;D組:GS濃度為10μΜ、100μΜ時下調(diào)MMP-13基因表達,GS濃度為1000μΜ時上調(diào)MMP-13基因表達;D組:GS濃度為10μΜ、1000μΜ時下調(diào)MMP-13基因表達,GS濃度為100μΜ時上調(diào)MMP-13基因表達;(2)GS在0、10μΜ時B、C、D、E與A相比下調(diào)MMP-13基因的表達;GS為100μΜ時,B、C、D、與A相比下調(diào)MMP-3基因的表達,E與A相比下調(diào)MMP-3基因的表達;GS為1000μΜ時,C、D、E與A相比下調(diào)MMP-3基因的表達,B與A相比下調(diào)MMP-3基因的表達。結(jié)論:1、GS對聚集蛋白聚糖(Aggrecan)基因表達:10μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ-Ⅴ型退變頸椎軟骨軟骨終板軟骨細胞中的聚集蛋白聚糖(Aggrecan)基因表達;100、1000μΜ的GS下調(diào)Ⅰ-Ⅴ型退變頸椎軟骨軟骨終板細胞中聚集蛋白聚糖(Aggrecan)基因表達。2、GS對Ⅱ型膠原蛋白基因表達:10μΜ、100μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ、Ⅱ型退變頸椎軟骨終板軟骨細胞Ⅱ型膠原蛋白基因表達,下調(diào)Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨細胞Ⅱ型膠原蛋白基因表達;1000μΜ濃度GS下調(diào)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨細胞Ⅱ型膠原蛋白基因表達。3、GS對MMP-3基因表達:10μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨細胞MMP-3基因表達,下調(diào)Ⅱ型退變頸椎軟骨終板軟骨細胞MMP-3基因表達;100μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型退變頸椎軟骨終板軟骨MMP-3細胞基因表達,下調(diào)Ⅱ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨細胞MMP-3基因表達;1000μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨MMP-3細胞基因表達,下調(diào)Ⅲ型退變頸椎軟骨終板軟骨細胞MMP-3基因表達。4、GS對MMP-13基因表達:10μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型退變頸椎軟骨終板軟骨細胞MMP-13基因表達,下調(diào)Ⅳ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨細胞MMP-13基因表達;100μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ、Ⅱ型退變頸椎軟骨終板軟骨MMP-13細胞基因表達,下調(diào)Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨細胞MMP-13基因表達;1000μΜ濃度GS上調(diào)Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、型退變頸椎軟骨終板軟骨MMP-13細胞基因表達,下調(diào)Ⅲ、Ⅴ型退變頸椎軟骨終板軟骨細胞MMP-13基因表達。說明不同濃度的GS對某些退變類型的頸椎軟骨終板有一定的保護作用,但其作用機制比較復(fù)雜。
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R681.5

【參考文獻】

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本文編號：2665341