【摘要】：目的:關(guān)節(jié)軟骨缺乏血管神經(jīng)的分布,導(dǎo)致其自我修復(fù)和再生能力弱�，F(xiàn)階段臨床應(yīng)用的軟骨缺損修復(fù)方法均存在不同程度的缺點(diǎn)。組織工程的應(yīng)用為更好的實(shí)現(xiàn)軟骨修復(fù)與再生帶來(lái)了新的思路。脂肪組織來(lái)源的基質(zhì)血管細(xì)胞混合物(Adipose Tissue-derived Stromal Vascular Fraction,AT-SVF)是一種新興的具有干細(xì)胞特性的細(xì)胞混合物。在前期研究中展現(xiàn)出對(duì)軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)分化及關(guān)節(jié)功能改善的積極作用。本研究將進(jìn)一步探索自體AT-SVF用于修復(fù)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨缺損的可行性及其修復(fù)效果。方法:在無(wú)菌環(huán)境下從大鼠腹股溝區(qū)獲取脂肪組織,采用傳統(tǒng)的膠原酶處理法獲取自體AT-SVF。體外培養(yǎng)采用流式細(xì)胞術(shù)和三系誘導(dǎo)分化檢驗(yàn)其干細(xì)胞特性。建立SD大鼠右側(cè)膝關(guān)節(jié)股骨滑車(chē)處的全層軟骨缺損模型,缺損直徑為2mm深1.5mm。實(shí)驗(yàn)共分為5組,每組14只大鼠,采用單次手術(shù)方式,按照缺損區(qū)密封物的不同分為:A組,空白組,缺損作曠置處理;B組,纖維蛋白膠組,缺損區(qū)僅用纖維蛋白膠密封;C組,AT-SVF組,缺損區(qū)植入AT-SVF并用纖維蛋白膠密封;D組,軟骨細(xì)胞外基質(zhì)源性微粒(Cartilage Extracellular Derived Particles,CEDPs)組,缺損區(qū)植入CEDPs并用纖維蛋白膠密封;E組:AT-SVF+CEDPs組,缺損區(qū)植入AT-SVF與CEDPs的混合物并用纖維蛋白膠密封。術(shù)后6周、12周取材,采用Micro-CT分析系統(tǒng)評(píng)估缺損部位軟骨下骨的重塑情況。參考國(guó)際軟骨修復(fù)協(xié)會(huì)軟骨修復(fù)大體評(píng)分系統(tǒng)(International Cartilage Repair Society Macroscopic Evaluation of Cartilage Repair,ICRS-MECR)評(píng)價(jià)大體觀察的軟骨缺損修復(fù)情況。標(biāo)本固定切片處理后進(jìn)行病理學(xué)染色,參考Wakitani評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分,分析評(píng)價(jià)缺損區(qū)軟骨的修復(fù)情況。結(jié)果:流式細(xì)胞術(shù)和三系誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)顯示AT-SVF體外培養(yǎng)的細(xì)胞具備干細(xì)胞的表征并可在特定培養(yǎng)條件下向多系細(xì)胞分化。Micro-CT系統(tǒng)分析結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)各分組均出現(xiàn)不同程度的軟骨下骨重塑表現(xiàn),AT-SVF組和AT-SVF+CEDPs組的骨體積分?jǐn)?shù)(Bone Volume Fraction,BVF)、骨小梁厚度(Trabecular Thickness,Tb.Th)較其他各組高(P0.05),軟骨下骨重塑程度和效果好。組織學(xué)分析顯示AT-SVF組和AT-SVF+CEDPs組軟骨缺損區(qū)新生組織主要為透明軟骨分布,其余各組為透明軟骨和纖維組織混合交織分布,且AT-SVF組和AT-SVF+CEDPs組組織學(xué)評(píng)分優(yōu)于其他組(P0.05),有效的修復(fù)了SD大鼠膝關(guān)節(jié)全層軟骨缺損。結(jié)論:自體AT-SVF可用于修復(fù)SD大鼠膝關(guān)節(jié)全層軟骨缺損,實(shí)現(xiàn)了采用單次手術(shù)修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損的過(guò)程。為實(shí)現(xiàn)單次手術(shù)修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損的臨床應(yīng)用提供了新的思路。并且在復(fù)合CEDPs進(jìn)行軟骨缺損修復(fù)的過(guò)程中,表現(xiàn)出修復(fù)速度加快的特點(diǎn)。為今后AT-SVF復(fù)合微載體進(jìn)行組織工程修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究提供了新的方向。
【圖文】：

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果鼠脂肪組織來(lái)源的基質(zhì)血管細(xì)胞混合物的體外脂肪組織來(lái)源的基質(zhì)血管細(xì)胞混合物接種到培養(yǎng)瓶中 貼壁生長(zhǎng)（如圖 3.1.1）。體外培養(yǎng) 2 天后，光學(xué)顯微鏡混合物中有大量的貼壁生長(zhǎng)的短梭形細(xì)胞，，且許多細(xì)胞更換和體外培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞增殖迅速，細(xì)胞集落數(shù)

更換和體外培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞增殖迅速，細(xì)胞集落數(shù)圖 3.1.1 基質(zhì)血管細(xì)胞混合物體外培養(yǎng) 3 小時(shí)后,光鏡下觀察細(xì)胞成短梭形貼壁生長(zhǎng)，部分細(xì)胞仍漂浮在培養(yǎng)液中未貼壁。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R684

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫祥q

本文編號(hào)：2658732