發(fā)布時(shí)間：2017-03-24 11:12

  本文關(guān)鍵詞：PIM1表達(dá)對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞增殖的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:骨肉瘤是最常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤,好發(fā)于長(zhǎng)骨干骺端,其特點(diǎn)為青少年發(fā)病率高,惡性程度高,早期易引起肺轉(zhuǎn)移而導(dǎo)致預(yù)后極差,是骨肉瘤死亡的主要原因之一。PIM是一種原癌基因,目前研究中已發(fā)現(xiàn)PIM家族中有PIM1、PIM2和PIM3三個(gè)成員,主要涉及細(xì)胞周期及代謝的調(diào)節(jié)、蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄與翻譯、促進(jìn)細(xì)胞凋亡及介導(dǎo)耐藥蛋白的產(chǎn)生,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。目的:本實(shí)驗(yàn)觀察PIM1蛋白在人骨肉瘤組織和相應(yīng)非癌組織中的表達(dá),并從組織學(xué)上進(jìn)行比較,分析其與骨肉瘤臨床病理指標(biāo)之間的聯(lián)系;利用RNA干擾技術(shù)靶向抑制PIM1基因表達(dá)或轉(zhuǎn)染PIM1高表達(dá)質(zhì)粒,觀察對(duì)骨肉瘤MG63和U2OS細(xì)胞株增殖產(chǎn)生的影響。探討PIM1表達(dá)對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞增殖的影響。方法:1.免疫組化SP法及多因素分析統(tǒng)計(jì)學(xué)方法探討PIM1在人骨肉瘤組織及相應(yīng)非癌組織中的表達(dá)情況選取2008-2012年期間在大學(xué)附屬醫(yī)院的120對(duì)人骨肉瘤組織與相應(yīng)非癌組織標(biāo)本,通過免疫組化實(shí)驗(yàn)分別測(cè)定組織中PIM1蛋白表達(dá)水平并相互比較。分析PIM1蛋白表達(dá)水平與性別、年齡、Enneking分期、腫瘤大小、分化程度、t分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和tnm分期等之間的相關(guān)性。2.rna干擾、細(xì)胞轉(zhuǎn)染后cck8法及平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察抑制pim1基因表達(dá)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖能力的影響利用靶向干擾pim1基因的sirna轉(zhuǎn)染骨肉瘤mg63和u2os細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組,并與陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染陰性載體)及空白對(duì)照組(未轉(zhuǎn)染)相比較,采用cck8法及平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖能力,分析抑制pim1基因表達(dá)后對(duì)細(xì)胞增殖產(chǎn)生的影響。3.細(xì)胞轉(zhuǎn)染后cck8法檢測(cè)pim1基因高表達(dá)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖能力的影響利用pim1基因過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染骨肉瘤mg63和u2os細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組,并與陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒)及空白對(duì)照組(未轉(zhuǎn)染)相比較。采用cck8法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖能力,分析pim1基因高表達(dá)后對(duì)細(xì)胞增殖產(chǎn)生的影響。結(jié)果:1.pim1在人骨肉瘤組織及相應(yīng)非癌組織中的表達(dá)情況pim1蛋白在人骨肉瘤組織中陽性表達(dá)率為90.00%(108/120),在相應(yīng)非癌組織中陽性表達(dá)率為73.33%(88/120),pim1蛋白在人骨肉瘤組織中的陽性表達(dá)率高于相應(yīng)非癌組織(p0.05)。而與相應(yīng)非癌組織相比,pim1蛋白在人骨肉瘤組織中表達(dá)上調(diào)的有59.17%(71/120),下調(diào)的有9.16%(11/120),不變的有31.67%(38/120)。說明pim1蛋白在人骨肉瘤組織中表達(dá)水平要高于相應(yīng)非癌組織(p0.05)。多因素分析顯示骨肉瘤組織中PIM1蛋白表達(dá)水平與腫瘤大小、Enneking分期和T分期相關(guān),且是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因子。2.干擾了PIM1基因表達(dá)的骨肉瘤細(xì)胞MG63和U2OS細(xì)胞的克隆形成及增殖能力較陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組顯著降低(p0.05)。3.轉(zhuǎn)染了PIM1高表達(dá)質(zhì)粒的骨肉瘤MG63和U2OS細(xì)胞增殖能力較陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組顯著升高(p0.05)。結(jié)論:1.PIM1蛋白在人骨肉瘤組織中高表達(dá),且與腫瘤大小、Enneking分期和T分期有關(guān)。2.PIM1表達(dá)可促進(jìn)骨肉瘤MG63和U2OS細(xì)胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：骨肉瘤 PIM1 MG63 U2OS 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R738.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 主要英文縮略語11-13
• 第1章 緒論13-17
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料17-21
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法21-25
• 3.1 免疫組織化學(xué)染色SP法21-22
• 3.2 細(xì)胞培養(yǎng)22
• 3.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染22-23
• 3.4 細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)23
• 3.5 CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況23-24
• 3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析24-25
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-32
• 第5章 討論32-36
• 第6章 結(jié)論36-38
• 參考文獻(xiàn)38-44
• 綜述 MicroRNA 在癌癥基因表達(dá)中的研究進(jìn)展44-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果52-54
• 致謝54

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