【摘要】：研究背景骨關(guān)節(jié)炎是最常見的全關(guān)節(jié)疾病,以軟骨下骨的異常骨重建、內(nèi)外側(cè)脛骨平臺(tái)不均勻沉降、軟骨的損傷和滑膜增厚為主要特征。世界范圍內(nèi)有超過7億人口患有OA,并因此產(chǎn)生了巨大的社會(huì)經(jīng)濟(jì)消耗和負(fù)擔(dān)。目前,已有2700萬人因OA致殘,預(yù)計(jì)在2030年致殘人數(shù)將翻一番。Salubrinal是一種化學(xué)合成劑,能抑制真核翻譯起始因子2α(eIF2α)的去磷酸化水平。本課題組前期工作證實(shí),Salubrinal可促進(jìn)骨創(chuàng)傷的愈合,并通過抑制破骨細(xì)胞的發(fā)育治療骨質(zhì)疏松和股骨頭壞死。還有研究顯示,Salubrinal可通過抑制炎性因子的表達(dá)和活性,對(duì)OA軟骨的損傷有保護(hù)作用。研究目的為了觀察Salubrinal對(duì)早期骨關(guān)節(jié)炎小鼠軟骨下骨的治療作用。本研究通過手術(shù)切除小鼠膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)半月板建立骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型。探討Salubrinal是否能夠通過抑制異常破骨細(xì)胞活性、糾正軟骨下骨異常骨重建和脛骨平臺(tái)內(nèi)外側(cè)不均勻沉降對(duì)早期骨關(guān)節(jié)炎起到治療作用。研究方法實(shí)驗(yàn)一:20只雌性C57BL/6小鼠(約14周齡),隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組(Sham,n=5)、2周OA模型組(2w OA,n=5)、4周OA模型組(4w OA,n=5)和8周OA模型組(8w OA,n=5)。采用手術(shù)切除小鼠膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)半月板建立骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型。分別于術(shù)后第2周末、第4周末和第8周末處死小鼠,分離小鼠后腿骨組織。采用HE組織學(xué)染色觀察早、中、晚三個(gè)時(shí)期骨關(guān)節(jié)炎小鼠膝關(guān)節(jié)病理變化,判斷造模是否成功。實(shí)驗(yàn)二:30只雌性C57BL/6小鼠(約14周齡),隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組(Sham,n=10)、2周OA模型組(OA,n=10)和2周OA+Salubrinal組(OA+Sal)。動(dòng)物造模方法同實(shí)驗(yàn)一。OA+Sal組小鼠皮下注射Salubrinal(1 mg/kg/d)2周。于術(shù)后第二周末處死小鼠并分離收集小鼠后腿骨組織。采用HE、番紅O和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)組織學(xué)染色方法,觀察脛骨平臺(tái)內(nèi)側(cè)和外側(cè)軟骨、軟骨下骨的組織形態(tài)學(xué)改變以及破骨細(xì)胞活性變化。實(shí)驗(yàn)三:9只雌性C57BL/6小鼠(約14周齡),分組及動(dòng)物造模同實(shí)驗(yàn)二(n=3)。處死小鼠后,收集小鼠股骨、脛骨骨髓腔中的骨髓細(xì)胞,并進(jìn)行培養(yǎng)和誘導(dǎo)。使用骨髓細(xì)胞的破骨細(xì)胞形成、遷移、粘附實(shí)驗(yàn)檢測各組小鼠破骨細(xì)胞發(fā)育。研究結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,2w OA膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)軟骨表面不連續(xù),潮線不規(guī)則甚至消失;軟骨細(xì)胞數(shù)目明顯減少,并出現(xiàn)大量肥大的空泡細(xì)胞。外側(cè)脛骨平臺(tái)軟骨表面有輕微纖維化表現(xiàn)。內(nèi)外側(cè)脛骨平臺(tái)軟骨下骨呈現(xiàn)不均一改變,軟骨下骨的骨小梁粗細(xì)不均、走行不規(guī)則。而且滑膜結(jié)構(gòu)也明顯增厚。隨著造模時(shí)間的增加,4w OA和8w OA中軟骨的磨損和軟骨下骨的骨重建越來越嚴(yán)重。4w OA膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)邊緣處有軟骨增生,在8w時(shí)形成骨性骨贅。2w組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與Sham組相比,OA組骨髓來源的破骨細(xì)胞發(fā)育顯著激活(P0.05),遷移和粘附能力明顯增加(P0.05),軟骨下骨破骨細(xì)胞活性也明顯增高(P0.05)。關(guān)節(jié)軟骨OARSI評(píng)分、鈣化軟骨比例(CC/TAC)均顯著升高(P0.05)。脛骨平臺(tái)內(nèi)側(cè)軟骨下骨的骨面積分?jǐn)?shù)(B.Ar/T.Ar)明顯增加(P0.05),但外側(cè)B.Ar/T.Ar、軟骨下骨板(SBP)厚度均顯著降低(P0.05)。四象限滑膜評(píng)分均明顯增高(P0.05)。與OA組相比,OA+Sal組骨髓來源的破骨細(xì)胞發(fā)育及遷移和粘附能力顯著降低,軟骨下骨破骨細(xì)胞活性也被抑制(P0.05)。OARSI評(píng)分、CC/TAC均有所降低(P0.05)。而且,內(nèi)外側(cè)脛骨平臺(tái)軟骨下骨B.Ar/T.Ar和SBP的不均勻改變均明顯恢復(fù)(P0.05)。四象限滑膜評(píng)分也顯著降低(P0.05)。通過內(nèi)外側(cè)倍數(shù)變化分析比較,我們發(fā)現(xiàn)與Sham組的脛骨平臺(tái)相比,OA小鼠OARSI評(píng)分和B.Ar/T.Ar(%)在內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)的倍數(shù)變化明顯高于外側(cè)脛骨平臺(tái)(P0.05)。與OA組的脛骨平臺(tái)相比,OA+Sal組小鼠內(nèi)外側(cè)脛骨平臺(tái)OARSI評(píng)分的倍數(shù)變化無顯著差異(P0.05),而B.Ar/T.Ar(%)在內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)的倍數(shù)變化明顯低于外側(cè)脛骨平臺(tái)(P0.05)。研究結(jié)論我們通過手術(shù)切除小鼠膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)半月板成功建立骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型。并發(fā)現(xiàn)Salubrinal可以通過調(diào)控破骨細(xì)胞發(fā)育對(duì)早期OA脛骨平臺(tái)的骨重建和不均勻沉降起到明顯的改善作用。研究表明,Salubrinal有望成為治療OA的新方法。
【圖文】：

術(shù)后第 2 周末進(jìn)行取材。③ 4 周 OA 組（4w）：同上行手術(shù)后，第 4 周末進(jìn)行取材。④ 8 周 OA 組（8w）：術(shù)后第 8 周末進(jìn)行取材。1.1.2.2 小鼠膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)半月板切除術(shù)術(shù)前一天對(duì)小鼠進(jìn)行稱重，并觀察小鼠一般情況，判斷其狀態(tài)是否良好。對(duì)于狀態(tài)良好的小鼠給予術(shù)前備皮準(zhǔn)備，雙側(cè)后肢膝關(guān)節(jié)周圍剃毛備皮。紫外線燈消毒手術(shù)室。術(shù)前采用 1.5％異氟烷麻醉小鼠，流速 1.0L/ min。70％酒精溶液對(duì)手術(shù)臺(tái)區(qū)域進(jìn)行消毒滅菌。然后將動(dòng)物仰臥位固定在手術(shù)臺(tái)上，常規(guī)消毒、鋪巾。使用手術(shù)刀，于膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)區(qū)，切開 15mm 皮膚切口以暴露膝關(guān)節(jié)，接著鈍性分離關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)周圍組織，用解剖刀在關(guān)節(jié)連接的位置離斷內(nèi)側(cè)副韌帶，打開關(guān)節(jié)腔使用手術(shù)顯微鏡和顯微外科技術(shù)切除內(nèi)側(cè)半月板（如圖 1.1）。然后用生理鹽水沖洗去除組織碎片，關(guān)閉皮膚切口。對(duì)于 Sham 組，使用相同的方法只切開皮膚切口，沒有離斷韌帶、去除內(nèi)側(cè)半月板。術(shù)后使用丁丙諾啡鹽酸鹽鎮(zhèn)痛抗感染分籠飼養(yǎng)，不予固定、活動(dòng)自由，隨意飲水、攝食。

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 一、小鼠膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)半月板切除誘導(dǎo)的骨關(guān)節(jié)炎模型節(jié)內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)軟骨表面不連續(xù)，透明軟骨（HC）明顯變薄，染色明顯變淺；潮線不規(guī)則甚至消失；軟骨細(xì)胞數(shù)目明顯減少，并出現(xiàn)大量肥大的空泡細(xì)胞。外側(cè)脛骨平臺(tái)軟骨僅有輕微纖維化表現(xiàn)。內(nèi)外側(cè)脛骨平臺(tái)軟骨下骨呈現(xiàn)不均一改變，軟骨下骨的骨小梁粗細(xì)不均、走行不規(guī)則（如圖 1.2）。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示，，OA 組 OARSI 評(píng)分較 Sham 組顯著升高(P<0.001)，鈣化軟骨/全層關(guān)節(jié)軟骨（CC/TAC）的百分比明顯增高(P<0.001)。（見表 2.8）內(nèi)側(cè)半月板切除術(shù)后 4 周（OA 中期），透明軟骨病變加重，損傷累計(jì)鈣化軟骨。在膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)邊緣處有軟骨增生。軟骨下骨小梁走行不規(guī)則且數(shù)量減少（如圖 1.2）。內(nèi)側(cè)半月板切除術(shù)后 8 周（OA 晚期），內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)軟骨層幾近消失，軟骨下骨實(shí)變、骨組織明顯增多，已經(jīng)失去軟骨下骨松質(zhì)骨區(qū)域的結(jié)構(gòu)特征。外側(cè)脛骨平臺(tái)軟骨層也出現(xiàn)明顯病變，病理改變類似于 2 周的內(nèi)側(cè)（如圖 1.2）。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R684.3

【參考文獻(xiàn)】

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1 張英澤;李存祥;李冀東;王飛;朱燕賓;楊光;田野;;不均勻沉降在膝關(guān)節(jié)退變及內(nèi)翻過程中機(jī)制的研究[J];河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年02期

本文編號(hào)：2652352