【摘要】：【研究背景】椎間盤退變(IDD,Intervertebral Disc Degeneration)是下腰部疼痛最為常見的原因,也是脊柱退變性疾病的始動因素。全世界有6.32億人患病,嚴重者可導致勞動能力的喪失,嚴重的影響了人類的健康。目前針對IDD的主要治療方法為保守治療和手術治療,但以上方法均無法有效控制椎間盤退行性變性的進程。椎間盤退變是一種進行性的疾病,因此,深入揭示椎間盤退變的分子機制,尋找調(diào)控相關信號通路和組織病理變化的關鍵靶分子,開發(fā)有針對性的生物治療方法,對治療椎間盤退變及其引發(fā)的各類疾病有著重要的意義�！灸康摹课覀兺ㄟ^閱讀并分析文獻,發(fā)現(xiàn),miR-640在退變的椎間盤組織中高表達,而其下游靶基因參與調(diào)控NF-κB,WNT等與細胞衰老、凋亡等進程直接相關的信號通路。據(jù)此,我們推測,miR-640在椎間盤退變的病理生理過程中可能發(fā)揮著重要作用。因此,本研究的主要目的就是,以miR-640的功能及其調(diào)控機制研究為突破口,綜合利用轉染、雙熒光素酶報告基因、RNAi等分子生物學技術系統(tǒng)的研究miR-640在椎間盤退變及髓核細胞衰老、凋亡過程中的作用機制,豐富椎間盤退變的理論研究,并為臨床椎間盤退變的防治提供潛在的藥物作用靶點�！痉椒ā�1.人髓核細胞(NP cells)的分離培養(yǎng)。2.提取人椎間盤組織及髓核細胞的總RNA,并通過RT-PCR檢測人椎間盤組織及髓核細胞中miR-640的表達情況。3.綜合利用qPCR、HE染色、免疫組化染色的方法研究退變髓核細胞中炎癥因子的表達情況,及其與miR-640的相關性。4.利用雙熒光素酶報告、免疫細胞熒光、生物信息學預測等方法研究NF-κB與miR-640的關系及其在髓核細胞中的分布。5.利用生物信息學分析的方法預測miR-640的下游靶分子,并通過雙熒光素酶報告、qPCR證實miR-640對下游靶分子的調(diào)控。6.利用SA-β-gal染色檢測miR-640過表達髓核細胞的衰老情況。7.流式細胞術測miR-640對髓核細胞衰老及凋亡的影響,CellTiter-Glo試劑盒檢測miR-640對髓核細胞活性的影響。【結果】1.在退變的椎間盤組織及髓核細胞中miR-640的表達量顯著增高。2.在退變髓核組織中高表達的炎癥因子TNF-α和IL-1β能夠通過NF-κB信號通路激活miR-640的表達。3.miR-640通過抑制LRP1表達,促進NF-κB的持續(xù)激活,構成正反饋環(huán)路。4.miR-640能夠抑制WNT信號通路的關鍵分子β-catenin和EP300,故可降低WNT通路活性。5.miR-640能夠通過對WNT信號通路的抑制促進髓核細胞的衰老、凋亡�！窘Y論】本研究證實,在衰老退變的髓核組織中形成了炎癥微環(huán)境,促炎因子與miR-640的表達形成正反饋環(huán)路,造成miR-640的大量積累,并抑制其下游WNT通路活性,促進髓核細胞的衰老和凋亡。在此調(diào)控網(wǎng)絡中,miR-640位于信號通路的關鍵交叉節(jié)點之上,干預其表達可有效減少髓核細胞的凋亡。本研究闡明了髓核細胞退變過程中miR-640相關的分子調(diào)控網(wǎng)絡,并為治療椎間盤退變相關的各種疾病提供了潛在的藥物作用靶點。
【學位授予單位】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R681.53

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 呂明;張穎;彭寶淦;;椎間盤退變模型研究現(xiàn)狀與進展[J];中國矯形外科雜志;2009年23期

2 郭健行;黃桂成;;椎間盤退變影響因素研究進展[J];國際骨科學雜志;2008年01期

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本文編號：2650310