【摘要】：【研究背景】椎間盤退變(IDD,Intervertebral Disc Degeneration)是下腰部疼痛最為常見的原因,也是脊柱退變性疾病的始動(dòng)因素。全世界有6.32億人患病,嚴(yán)重者可導(dǎo)致勞動(dòng)能力的喪失,嚴(yán)重的影響了人類的健康。目前針對(duì)IDD的主要治療方法為保守治療和手術(shù)治療,但以上方法均無法有效控制椎間盤退行性變性的進(jìn)程。椎間盤退變是一種進(jìn)行性的疾病,因此,深入揭示椎間盤退變的分子機(jī)制,尋找調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路和組織病理變化的關(guān)鍵靶分子,開發(fā)有針對(duì)性的生物治療方法,對(duì)治療椎間盤退變及其引發(fā)的各類疾病有著重要的意義�！灸康摹课覀兺ㄟ^閱讀并分析文獻(xiàn),發(fā)現(xiàn),miR-640在退變的椎間盤組織中高表達(dá),而其下游靶基因參與調(diào)控NF-κB,WNT等與細(xì)胞衰老、凋亡等進(jìn)程直接相關(guān)的信號(hào)通路。據(jù)此,我們推測,miR-640在椎間盤退變的病理生理過程中可能發(fā)揮著重要作用。因此,本研究的主要目的就是,以miR-640的功能及其調(diào)控機(jī)制研究為突破口,綜合利用轉(zhuǎn)染、雙熒光素酶報(bào)告基因、RNAi等分子生物學(xué)技術(shù)系統(tǒng)的研究miR-640在椎間盤退變及髓核細(xì)胞衰老、凋亡過程中的作用機(jī)制,豐富椎間盤退變的理論研究,并為臨床椎間盤退變的防治提供潛在的藥物作用靶點(diǎn)。【方法】1.人髓核細(xì)胞(NP cells)的分離培養(yǎng)。2.提取人椎間盤組織及髓核細(xì)胞的總RNA,并通過RT-PCR檢測人椎間盤組織及髓核細(xì)胞中miR-640的表達(dá)情況。3.綜合利用qPCR、HE染色、免疫組化染色的方法研究退變髓核細(xì)胞中炎癥因子的表達(dá)情況,及其與miR-640的相關(guān)性。4.利用雙熒光素酶報(bào)告、免疫細(xì)胞熒光、生物信息學(xué)預(yù)測等方法研究NF-κB與miR-640的關(guān)系及其在髓核細(xì)胞中的分布。5.利用生物信息學(xué)分析的方法預(yù)測miR-640的下游靶分子,并通過雙熒光素酶報(bào)告、qPCR證實(shí)miR-640對(duì)下游靶分子的調(diào)控。6.利用SA-β-gal染色檢測miR-640過表達(dá)髓核細(xì)胞的衰老情況。7.流式細(xì)胞術(shù)測miR-640對(duì)髓核細(xì)胞衰老及凋亡的影響,CellTiter-Glo試劑盒檢測miR-640對(duì)髓核細(xì)胞活性的影響�！窘Y(jié)果】1.在退變的椎間盤組織及髓核細(xì)胞中miR-640的表達(dá)量顯著增高。2.在退變髓核組織中高表達(dá)的炎癥因子TNF-α和IL-1β能夠通過NF-κB信號(hào)通路激活miR-640的表達(dá)。3.miR-640通過抑制LRP1表達(dá),促進(jìn)NF-κB的持續(xù)激活,構(gòu)成正反饋環(huán)路。4.miR-640能夠抑制WNT信號(hào)通路的關(guān)鍵分子β-catenin和EP300,故可降低WNT通路活性。5.miR-640能夠通過對(duì)WNT信號(hào)通路的抑制促進(jìn)髓核細(xì)胞的衰老、凋亡�！窘Y(jié)論】本研究證實(shí),在衰老退變的髓核組織中形成了炎癥微環(huán)境,促炎因子與miR-640的表達(dá)形成正反饋環(huán)路,造成miR-640的大量積累,并抑制其下游WNT通路活性,促進(jìn)髓核細(xì)胞的衰老和凋亡。在此調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中,miR-640位于信號(hào)通路的關(guān)鍵交叉節(jié)點(diǎn)之上,干預(yù)其表達(dá)可有效減少髓核細(xì)胞的凋亡。本研究闡明了髓核細(xì)胞退變過程中miR-640相關(guān)的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò),并為治療椎間盤退變相關(guān)的各種疾病提供了潛在的藥物作用靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R681.53

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 呂明;張穎;彭寶淦;;椎間盤退變模型研究現(xiàn)狀與進(jìn)展[J];中國矯形外科雜志;2009年23期

2 郭健行;黃桂成;;椎間盤退變影響因素研究進(jìn)展[J];國際骨科學(xué)雜志;2008年01期

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本文編號(hào)：2650310