【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)通過培養(yǎng)原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞建立OGD/R模型,作為大腦I/R損傷體外模型,在此基礎(chǔ)之上用右美托咪定標(biāo)準(zhǔn)液加入相應(yīng)處理組的培養(yǎng)液中,并用線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)的開放劑蒼術(shù)苷對(duì)相應(yīng)對(duì)照組進(jìn)行處理,來觀察模擬缺血再灌注期間大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞的MPTP的開放情況,線粒體分裂相關(guān)蛋白Drp1、Fis1和細(xì)胞色素C(Cyt C)、凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)的表達(dá)。探討線粒體通透性轉(zhuǎn)運(yùn)孔在右美托咪定預(yù)處理腦缺血再灌注中的作用及機(jī)制,為以后臨床治療缺血再灌注疾病的治療提供新的理論依據(jù)。方法:本實(shí)驗(yàn)分為兩部分,第一部分為預(yù)實(shí)驗(yàn),預(yù)實(shí)驗(yàn)的分組將原代培養(yǎng)出生24h之內(nèi)的SD大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞,采用氧糖剝奪法建立缺氧復(fù)氧模型,隨機(jī)數(shù)字表法分成8組(n=6):正常對(duì)照組(C組,不對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理)、賦形劑組(V組,不進(jìn)行缺氧復(fù)氧,加入體積分?jǐn)?shù)為0.0001的二甲亞砜培養(yǎng)6h)、缺氧復(fù)氧組(H/R組,采用氧糖剝奪法缺氧6h,復(fù)氧20h,建立大鼠海馬神經(jīng)元缺氧復(fù)氧損傷模型)、H/R+右美托咪定0.1μmol/L組(D1組)、H/R+右美托咪定1.0μmol/L組(D2組)、H/R+右美托咪定5.0μmol/L組(D3組),H/R+右美托咪定10.0μmol/L組(D4組),H/R+右美托咪定100.0μmol/L組(D5組),D1、D2、D3、D4、D5組在缺氧復(fù)氧期間分別加入終濃度為0.1、1.0、5.0、10.0、100.0μmol/L的右美托咪定,缺氧6h,復(fù)氧20h。用倒置顯微鏡觀察海馬神經(jīng)元細(xì)胞的數(shù)量與形態(tài),用細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)各組神經(jīng)元細(xì)胞活性,第二部分為正式實(shí)驗(yàn):分組為原代培養(yǎng)出生24h之內(nèi)的SD大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞,采用氧糖剝奪法建立缺氧復(fù)氧模型,隨機(jī)數(shù)字表法分成6組(n=6):正常對(duì)照組(C組,不對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理)、賦形劑組(V組,不進(jìn)行缺氧復(fù)氧,加入體積分?jǐn)?shù)為0.0001的二甲亞砜培養(yǎng)6h)、缺氧復(fù)氧組(H/R組,采用氧糖剝奪法缺氧6h,復(fù)氧20h,建立大鼠海馬神經(jīng)元缺氧復(fù)氧損傷模型)、H/R+右美托咪定1.0μmol/L組(D組)、H/R+蒼術(shù)苷(A組)、右美托咪定+蒼術(shù)苷組(D/A組)。用倒置顯微鏡觀察海馬神經(jīng)元細(xì)胞的數(shù)量與形態(tài),用細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)各組神經(jīng)元細(xì)胞活性,用細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測(cè)試劑盒測(cè)細(xì)胞質(zhì)中的鈣離子濃度,用自分光分度儀檢測(cè)海馬MPTP開放情況,用Western blot檢測(cè)線粒體分裂相關(guān)蛋白Drp1、Fis1和細(xì)胞色素C(Cyt C)、凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)的表達(dá)。結(jié)果:在預(yù)實(shí)驗(yàn)中,與H/R組比較,D4、D5組神經(jīng)元細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受抑制,在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中舍去,D2組較D1、D3組神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量和活性明顯增高(P0.05)。在正式實(shí)驗(yàn)中,與C組比較,V組各指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),H/R組神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量和活性明顯降低;且鈣離子濃度和Drp1、Fis1、Cyt C、AIF蛋白的表達(dá)顯著增高(P0.05),MPTP吸光值減少程度增大,MPTP開放程度增加,(P0.05);與(H/R)組比,D組、(D/A)組MPTP吸光值減少程度降低,MPTP開放程度減小,(P0.05);且鈣離子濃度和Drp1、Fis1、Cyt C、AIF蛋白的表達(dá)顯著降低(P0.05)。結(jié)論:右美托咪定(0.1-5.0μmol/L)可以明顯減輕大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷中細(xì)胞的凋亡,其中1μmol/L是右美托咪定最佳的腦保護(hù)濃度;右美托咪定減輕缺氧復(fù)氧對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞的損傷,可能通過抑制海馬神經(jīng)元細(xì)胞MPTP的開放發(fā)揮作用。
【圖文】：

各組神經(jīng)元生長(zhǎng)狀態(tài)（×400）

圖 2A. 線粒體分裂蛋白的表達(dá) 圖 2B. 細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)表 5. 各組大鼠海馬神經(jīng)元線粒體分裂相關(guān)蛋白及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)比較（n=6, x±s）組別 Drp1 Fis1 CytC AIF
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R614

【參考文獻(xiàn)】

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1 姜翠翠;夏滿莉;王敏;陳士票;;右美托咪定預(yù)處理減輕離體大鼠心臟缺血/再灌注損傷的線粒體相關(guān)機(jī)制[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年03期

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1 林生;右美托咪定對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制[D];山東大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：2647016