【摘要】：目的建立兔股骨髁骨缺損模型,通過組織學(xué)檢測(cè)方法觀察鉭-骨界面成骨情況及相關(guān)成骨蛋白表達(dá),研究鉭-骨界面成骨機(jī)制,評(píng)估PL修飾國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架的骨修復(fù)能力,為其臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)及科學(xué)依據(jù)。方法1實(shí)驗(yàn)材料及分組:選取數(shù)枚大小適宜的的國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架材料,超聲清洗,部分使用PL進(jìn)行修飾,備用。將36只實(shí)驗(yàn)兔隨機(jī)分為3組:PL多孔鉭組、多孔鉭組及空白對(duì)照組。2手術(shù)步驟:將實(shí)驗(yàn)兔麻醉后,取左股骨外髁處去毛、備皮、消毒、鋪單,于左股骨外髁處取長(zhǎng)約2.5cm的切口,切開皮膚及皮下組織,逐步暴露股骨外髁,使用3mm克氏針骨架鋼絲鉆入股骨外側(cè)髁,制造大小適宜的腔隙性骨缺損。將多孔鉭支架植入各組實(shí)驗(yàn)兔骨缺損處,支架盡可能貼近宿主骨孔道壁,空白對(duì)照組只制造骨缺損,不植入多孔鉭支架。使用可吸收線縫合切口,術(shù)后予以抗感染處理。3術(shù)后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基本狀況觀察。4取材及標(biāo)本解剖觀察:各組實(shí)驗(yàn)兔分別于術(shù)后2、4、8、16周處死,取材并查看各組骨缺損處的解剖情況。5組織學(xué)檢測(cè):HE染色觀察鉭-骨界面成骨情況;免疫組織化學(xué)檢測(cè)相關(guān)成骨蛋白Integrin-β1、Vinculin、F-actin、p38及pp38表達(dá),圖像采集后,使用Image-ProPlus 6.0圖像分析軟件進(jìn)行半定量分析得出IOD值后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;硬組織切片Goldner三色染色法觀察國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架新骨長(zhǎng)入的不同階段,VG染色行新生骨計(jì)量學(xué)分析。6鉭-骨界面掃描電鏡:觀察國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架成骨細(xì)胞附著及新骨長(zhǎng)入情況。結(jié)果1術(shù)后2天時(shí)間內(nèi),實(shí)驗(yàn)兔精神狀態(tài)不佳,活動(dòng)量少,進(jìn)食少許飼料及飲用水,糞便量較術(shù)前明顯減少。1周后實(shí)驗(yàn)兔活動(dòng)量明顯增加,飲食及精神狀況恢復(fù)正常;2周后肢體活動(dòng)基本恢復(fù)正常;術(shù)后傷口無紅腫,滲液及支架脫出等現(xiàn)象。2標(biāo)本大體觀察:術(shù)后各時(shí)期解剖觀察切口處均無明顯炎癥反應(yīng),多孔鉭支架未見松動(dòng)及脫出。各組支架逐漸被新生組織覆蓋,而空白對(duì)照組新生骨痂少,骨修復(fù)效果不如另外兩組。3 HE染色結(jié)果顯示:術(shù)后2周各組可見少量結(jié)締組織、毛細(xì)血管及成骨細(xì)胞,未見明顯新生骨痂;術(shù)后4周PL多孔鉭組較多新生軟骨基質(zhì),多孔鉭組少量新生軟骨,空白組未見明顯軟骨痂;術(shù)后8周PL多孔鉭組及多孔鉭組支架基本被新生骨痂覆蓋,空白組少量骨痂;術(shù)后16周各組支架均被新生組織完全覆蓋,PL多孔鉭組及多孔鉭組硬骨痂明顯多于空白組。4免疫組化結(jié)果顯示:Integrin-β1、Vinculin及F-actin:術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)PL多孔鉭組及多孔鉭組表達(dá)均高于空白對(duì)照組,術(shù)后2、4周PL多孔鉭組表達(dá)高于多孔鉭組(P0.05);PL多孔鉭組4周表達(dá)均高于其他時(shí)間點(diǎn),多孔鉭組和空白對(duì)照組術(shù)后8周表達(dá)均高于其他時(shí)間點(diǎn)(P0.05)。p38:術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)PL多孔鉭組及多孔鉭組表達(dá)高于空白對(duì)照組,術(shù)后2、4、8周PL多孔鉭組表達(dá)高于多孔鉭組(P0.05);PL多孔鉭組4周表達(dá)均高于其他時(shí)間點(diǎn),多孔鉭組和空白對(duì)照組術(shù)后8周表達(dá)均高于其他時(shí)間點(diǎn)(P0.05)。pp38:術(shù)后2、4、16周PL多孔鉭組表達(dá)顯著高于空白對(duì)照組(P0.05),各時(shí)間點(diǎn)多孔鉭組表達(dá)均高于空白組,術(shù)后2、4、8周PL多孔鉭組表達(dá)高于多孔鉭組(P0.05)。PL多孔鉭組4周表達(dá)均高于其他時(shí)間點(diǎn),多孔鉭組和空白對(duì)照組術(shù)后8周表達(dá)均高于其他時(shí)間點(diǎn)(P0.05)。5硬組織切片觀察:早期多孔鉭孔隙內(nèi)可見零星橘紅色新生類骨質(zhì),隨植入時(shí)間的延長(zhǎng),孔隙內(nèi)橘紅色新骨及綠染礦化骨逐漸增多,骨質(zhì)逐漸成熟。新骨長(zhǎng)入計(jì)量分析顯示:同一時(shí)間點(diǎn)PL多孔鉭組新骨面積分?jǐn)?shù)均高于多孔鉭組(P0.05),兩組新骨面積分?jǐn)?shù)均隨支架植入時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增大,術(shù)后16周新骨面積分?jǐn)?shù)均高于其他時(shí)間點(diǎn)(P0.05)。6掃描電鏡結(jié)果:同一時(shí)間點(diǎn)PL多孔鉭組支架成骨細(xì)胞數(shù)量及骨膠原纖維多于多孔鉭組,新骨逐漸長(zhǎng)入支架孔隙內(nèi),支架逐漸被新骨包繞。結(jié)論1 PL修飾的國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架材料擁有更強(qiáng)的骨修復(fù)能力。2 PL可促進(jìn)新骨長(zhǎng)入多孔鉭內(nèi)部孔隙,并加速新骨成熟。3 PL可促進(jìn)相關(guān)成骨蛋白Integrin-β1、Vinculin、F-actin早期表達(dá),激活p38MAPK通路,促進(jìn)成骨細(xì)胞早期遷移、黏附、增殖及分化。
【圖文】：

圖 1 國(guó)產(chǎn)多孔鉭外觀Fig. 1 The appearance of homemade porous tantalum3）PL 修飾多孔鉭支架手術(shù)前 1 天，將置于-80℃冰箱備用的 PL 取出解凍，至于 4℃冰箱暫時(shí)保存經(jīng)超聲清洗，高溫高壓滅菌后的多孔鉭支架材料浸泡在 PL 中，置于 4℃冰箱過育，術(shù)前現(xiàn)取現(xiàn)用。4）實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)兔由華北理工大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心供應(yīng)，實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)動(dòng)物的處置均契動(dòng)物福利準(zhǔn)則》，并取得華北理工大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的審批。36 只實(shí)驗(yàn)機(jī)分為 3 組：PL 多孔鉭組及多孔鉭組各 16 只，空白對(duì)照組 4 只。為減少對(duì)實(shí)的損傷程度，提高術(shù)后存活率，僅選擇在每只實(shí)驗(yàn)兔的左股骨外髁處制造骨，，植入相應(yīng)的多孔鉭材料。5）動(dòng)物模型建立與手術(shù)方法

華北理工大學(xué)碩士學(xué)位論文在骨缺損處植入經(jīng) PL 修飾的多孔鉭支架，多孔鉭組在骨缺損處植入未經(jīng)孔鉭支架，支架盡可能貼近宿主骨隧道壁（圖 3）。空白對(duì)照組只做骨缺入多孔鉭支架。多孔鉭支架植入后再次用無菌生理鹽水沖洗，清點(diǎn)手術(shù)器，用可吸收線間斷逐層縫合傷口，切口處涂抹碘伏消毒，不做固定。術(shù)后注射青霉素 40 萬 u/只，連續(xù)注射 3 天，分籠飼養(yǎng)。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R68

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2631685