【摘要】：目的:以脫細(xì)胞基質(zhì)/殼聚糖為支架材料,負(fù)載可控釋姜黃素微球和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,應(yīng)用3D打印技術(shù)將三者有機(jī)的結(jié)合在一起,構(gòu)建與脊髓形態(tài)結(jié)構(gòu)相似的姜黃素可控釋活性脊髓支架用于脊髓損傷的治療方法:首先,使用改良脫細(xì)胞法,制備神經(jīng)脫細(xì)胞基質(zhì),勻漿機(jī)勻漿,真空凍干后復(fù)合殼聚糖制備支架材料。使用京尼平、戊二醛、殼聚糖三種方法對(duì)支架進(jìn)行交聯(lián),掃描電鏡觀察三種方案交聯(lián)后材料的形態(tài)結(jié)構(gòu),并對(duì)其溶脹率、孔隙率、降解率、交聯(lián)度、細(xì)胞毒性、組織相容性和細(xì)胞相容性進(jìn)行觀察,選出最佳交聯(lián)方案;隨后,MRI獲取脊髓影像學(xué)資料,MIMIC逆向建模后應(yīng)用3D打印技術(shù)負(fù)載殼聚糖緩釋微球和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建仿生脊髓支架。結(jié)果:掃描電鏡結(jié)果顯示,四組材料均為多孔隙結(jié)構(gòu),京尼平呈蜂窩狀結(jié)構(gòu),其余三組呈層狀結(jié)構(gòu);溶脹率檢測(cè)結(jié)果顯示,京尼平組和戊二醛組交聯(lián)的支架材料比紫外線和未交聯(lián)的支架具有更好的親水性和保水性;交聯(lián)度檢測(cè)顯示,戊二醛和京尼平交聯(lián)度相似,紫外線為物理交聯(lián),交聯(lián)度為零;抗酶解實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,京尼平組和戊二醛組交聯(lián)的支架比紫外線和未交聯(lián)組支架具有更強(qiáng)的抗酶解能力。細(xì)胞毒性檢測(cè)顯示,戊二醛組交聯(lián)毒性最強(qiáng),為2級(jí),京尼平組細(xì)胞毒性最低為0級(jí);組織相容性結(jié)果顯示,戊二醛組炎癥反應(yīng)較嚴(yán)重,炎性細(xì)胞聚集包繞材料,其余三組炎癥反應(yīng)較輕,極少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);細(xì)胞相容性結(jié)果顯示,未交聯(lián)組塌縮比較嚴(yán)重,細(xì)胞粘附較少,京尼平組和戊二醛組可以保持完好的結(jié)構(gòu),京尼平組可見(jiàn)大量細(xì)胞粘附,細(xì)胞充分伸展,粘附生長(zhǎng)狀態(tài)良好。使用MRI獲得大鼠脊髓影像,逆向建模后得到仿生脊髓支架模型;應(yīng)用離子凝膠法獲得姜黃素微球,微球包封率 73.56±1.23%,載藥率為 18.67±0.87%。Cur-CCH/ECM-CCH比Cur/ECM-CCH緩釋速率緩慢,可以持續(xù)緩釋姜黃素10W。應(yīng)用MRI及時(shí)獲得大鼠脊髓影像資料,MIMICS逆向建模獲得模型,采用3D打印技術(shù)成功制備出仿生脊髓支架;將負(fù)載姜黃素微球的支架和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三維培養(yǎng),DAPI染色,結(jié)果顯示,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在支架上粘附生長(zhǎng),證明姜黃素可控釋活性脊髓構(gòu)建成功。結(jié)論:神經(jīng)脫細(xì)胞基質(zhì)/殼聚糖為原材料,京尼平交聯(lián)制備支架材料是構(gòu)建仿生脊髓的理想材料;應(yīng)用3D打印技術(shù)將支架材料、姜黃素緩釋微球和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可成功構(gòu)建可控釋仿生脊髓支架,為臨床上應(yīng)用組織工程技術(shù)橋接神經(jīng)元治療外傷性脊髓損傷提供一種新的思路。
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R318.08;R651.2

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