【摘要】：第一部分腺病毒沉默HIF-1α對低氧狀態(tài)下人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響目的:探索沉默HIF-1α對低氧狀態(tài)下人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞(human dermal microvascular endothelial cells,HDMECs)凋亡的影響及潛在機(jī)制。方法:通過三氣低氧孵箱構(gòu)建細(xì)胞低氧環(huán)境;構(gòu)建腺病毒沉默HIF-1α基因的表達(dá)。HDMECs經(jīng)分組培養(yǎng)后,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率,Western Blot及RT-PCR檢測蛋白和m RNA的表達(dá)。結(jié)果:HDMECs的凋亡率及HIF-1α的表達(dá)隨氧濃度的降低而增加,隨低氧時(shí)間的增加而增加;HIF-1αsi RNA腺病毒抑制了低氧狀態(tài)下HDMECs中HIF-1α約74%的表達(dá),且凋亡率增加。HIF-1α的敲低上調(diào)了P53和BAX蛋白的表達(dá),下調(diào)BCL-2、VEGF和GLUT1蛋白的表達(dá)。結(jié)論:低氧狀態(tài)下HDMECs的凋亡率存在明顯的氧濃度依賴性和時(shí)間依賴性;HIF-1α可通過影響線粒體凋亡通路一定程度上減輕低氧對細(xì)胞的損傷,其潛在機(jī)制可能與促進(jìn)新生血管和增加葡萄糖攝取有關(guān)。第二部分舒洛地特對低氧狀態(tài)下人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響目的:探討舒洛地特(sulodexide,SDX)對低氧狀態(tài)下人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞(human dermal microvascular endothelial cells,HDMECs)凋亡的影響及其分子機(jī)制;方法:對HDMECs進(jìn)行分組培養(yǎng):常氧對照組(在常氧狀態(tài)培養(yǎng));低氧對照組于1%O2、5%CO2、37°C條件孵箱培養(yǎng)24 h;處理組用不同濃度(0.25、0.50、1.00 LSU/m L)舒洛地特作用于HDMECs低氧培養(yǎng)24 h;CCK8法檢測細(xì)胞存活率;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率;caspase3活性檢測試劑盒測定細(xì)胞內(nèi)caspase3活性;Western blot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測促凋亡基因P53、Bax、caspase3和抑凋亡基因Bcl2的蛋白及m RNA表達(dá)。結(jié)果:低氧狀態(tài)下舒洛地特可提高HDMECs生長活力,降低其凋亡率,抑制促凋亡基因P53、Bax和caspase3的蛋白與m RNA表達(dá)以及caspase3的活性,提高抑凋亡基因Bcl2的蛋白與m RNA表達(dá)。結(jié)論:舒洛地特可以抑制低氧狀態(tài)下人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡,其分子機(jī)制與抑制線粒體凋亡通路有關(guān)。
【圖文】：

圖 1.1 不同氧濃度對 HDMECs 調(diào)亡及 HIF-1a 表達(dá)的影響Figure 1.1 The effect of different oxygen concentrations on the apoptosis and HIF-1aexpression of HDMECs .A-B: The quantitative analysis of the apoptotic rates between groups.C-E: The analysis of HIF-1a protein and mRNA expression between groups. Mean SD, n=3.＊P<0.05 vs 21% O2 group; ＃P<0.05 vs 5% O2 group.

圖 1.2 不同低氧時(shí)間對 HDMECs 調(diào)亡及 HIF-1a 表達(dá)的影響Figure 1.2 The effect of different levels of hypoxic time on apoptosis and HIF-1a expression ofHDMECs.A-B: The quantitative analysis of the apoptotic rates between groups. C-E: Theanalysis of HIF-1a protein and mRNAexpression between groups. Mean SD, n=3. ＊P<0.05vs 0h hypoxia group; ＃P<0.05 vs 12h hypoxia group; △P<0.05 vs 24h hypoxia group.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R654.4

【參考文獻(xiàn)】

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1 舒Q，

本文編號(hào)：2616411