【摘要】：目的:采用成年、健康、雄性的新西蘭大白兔建立手術(shù)顱骨缺損模型,對取下骨瓣進(jìn)行內(nèi)外板多處打孔(非交通性)、低溫保存液沖洗、程序化凍存3 m,復(fù)溫后24 h培養(yǎng)液體外培養(yǎng)等處理后自體回植4 w,評價(jià)多孔沖洗后自體骨瓣的低溫保存回植是否降低炎癥反應(yīng)和骨質(zhì)吸收發(fā)生率,增加回植骨瓣(replanted bone flap,RBF)血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)(vascular endothelial cells,VECs)。方法:成年、健康、雄性新西蘭白兔16只,體重(2±0.2)kg,統(tǒng)一建立白兔左側(cè)頂骨約1.0×1.0cm2四邊形缺損模型后隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組,每組8只。實(shí)驗(yàn)組對取下骨瓣進(jìn)行內(nèi)外板多處打孔(非交通性)、低溫保存液沖洗、程序化凍存3 m,復(fù)溫后24 h培養(yǎng)液體外培養(yǎng)等處理后自體回植4 w;對照組對取下骨瓣進(jìn)行內(nèi)外板多處打孔(非交通性)、低溫保存液中程序化凍存3 m,復(fù)溫后24h培養(yǎng)液體外培養(yǎng)等處理后自體回植4 w。骨瓣自體回植后于第1、3、7、14 d抽取兔血清檢測IL-1、TNF-α濃度;回植4 w后,再次于回植骨瓣邊緣外2-3mm取下完整骨瓣,觀察回植骨瓣大體形態(tài),并進(jìn)行HE染色及免疫組化血管內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果:1、白兔骨瓣回植后第1、3、7、14 d,通過抽白兔耳緣靜脈血檢測IL-1、TNF-α濃度,與對照組相比,實(shí)驗(yàn)組白兔血清IL-1、TNF-α濃度在第1、3、7、14 d均低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、實(shí)驗(yàn)過程中白兔全部存活,大體狀況良好。取回植骨瓣時,可見回植骨瓣呈白色,周邊顱骨呈鮮紅色,回植骨瓣內(nèi)板及外板周圍可見骨痂形成。實(shí)驗(yàn)組回植骨瓣未見骨質(zhì)吸收(骨質(zhì)吸收發(fā)生率0/8);對照組回植骨瓣出現(xiàn)3例骨質(zhì)吸收(骨質(zhì)吸收發(fā)生率3/8)。3、HE切片可見回植骨瓣與原顱骨缺損處愈合,界限分明。顯微鏡下觀察HE染色切片,見回植骨瓣愈合,愈合處可見形成新的骨痂形成,并可見骨細(xì)胞。4、CD31免疫組化結(jié)果示回植骨瓣內(nèi)有染成棕黃色的血管內(nèi)皮細(xì)胞,與對照組相比,實(shí)驗(yàn)組VECs明顯增多。結(jié)論:多孔沖洗自體骨瓣后程序化凍存及復(fù)溫可以降低炎癥反應(yīng)和骨質(zhì)吸收發(fā)生率,增加回植骨瓣的VECs。
【圖文】：

0.2ml/kg 誘導(dǎo)麻醉，20%烏拉坦 5ml/kg 腹腔維持麻醉。通過白兔角膜反射、肌張力、疼痛反射等判斷麻醉程度，待麻醉完成后，剪刀剪去白兔顱骨頂部兔毛，刀片刮除殘余兔毛，白兔保持俯臥位固定于動物立體定位頭架（DY 1 型，天津市醫(yī)療器械研究所），，術(shù)者刷手，碘伏消毒三遍，鋪巾，縱行切開頭皮約 8cm，由中間向左邊將骨膜剝離，暴露白兔顱骨人字縫、矢狀縫和冠狀縫，于左側(cè)頂骨處用高速牙科鉆取約 1.0×1.0cm2四邊形骨瓣，16 只白兔共計(jì) 16 塊骨瓣，并進(jìn)行編號。取下的實(shí)驗(yàn)組骨瓣立即置于肝素生理鹽水中，用 1ml 注射器針頭間隔3mm 于內(nèi)、外板扎孔，穿刺過程中出現(xiàn)突破感時停止進(jìn)針并拔出，由針孔處觀察到血液滲出，確保針尖僅穿孔至板障而不穿透骨瓣。以注射器抽取 1ml 肝素生理鹽水對每個針孔進(jìn)行沖洗，沖洗出的液體逐漸清亮，且整體骨瓣顏色逐漸變白（圖 1）。隨后骨瓣置于含 10%二甲基亞砜（Dimethyl Sulphoxide, DMSO）的胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）中，利用程序化冷凍方法，4℃冰箱冷藏30 min，隨后-20℃凍存 2h，最后-80℃低溫凍存 3 m。對照組除不進(jìn)行骨瓣沖洗外，余操作同實(shí)驗(yàn)組。骨瓣取下處理同時，助手進(jìn)行兔術(shù)區(qū)止血、縫合等操作，并肌注慶大霉素 0.2mL/kg 預(yù)防感染，放回籠內(nèi)，每日觀察傷口。

圖 2 取骨瓣前后大體形態(tài)。牙科轉(zhuǎn)鉆 4 孔及手術(shù)剪刀剪取骨瓣大體形態(tài)（A）；骨瓣取下后大體形態(tài)（B）。2.2 骨瓣鉆孔、沖洗后大體形態(tài)用 1ml 注射器針頭間隔 3mm 于對骨瓣內(nèi)、外板扎孔，實(shí)驗(yàn)組骨瓣通過注射器抽取 1ml 肝素生理鹽水對每個針孔進(jìn)行沖洗骨瓣內(nèi)、外板（非交通性）。沖洗前，骨瓣充滿血液，呈暗紅色；沖洗后，骨瓣內(nèi)血液大部分沖出且整體骨瓣顏色逐漸變白（圖 3）。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R651.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2605647