【摘要】：目的:采用成年、健康、雄性的新西蘭大白兔建立手術顱骨缺損模型,對取下骨瓣進行內外板多處打孔(非交通性)、低溫保存液沖洗、程序化凍存3 m,復溫后24 h培養(yǎng)液體外培養(yǎng)等處理后自體回植4 w,評價多孔沖洗后自體骨瓣的低溫保存回植是否降低炎癥反應和骨質吸收發(fā)生率,增加回植骨瓣(replanted bone flap,RBF)血管內皮細胞數(shù)(vascular endothelial cells,VECs)。方法:成年、健康、雄性新西蘭白兔16只,體重(2±0.2)kg,統(tǒng)一建立白兔左側頂骨約1.0×1.0cm2四邊形缺損模型后隨機分為實驗組和對照組,每組8只。實驗組對取下骨瓣進行內外板多處打孔(非交通性)、低溫保存液沖洗、程序化凍存3 m,復溫后24 h培養(yǎng)液體外培養(yǎng)等處理后自體回植4 w;對照組對取下骨瓣進行內外板多處打孔(非交通性)、低溫保存液中程序化凍存3 m,復溫后24h培養(yǎng)液體外培養(yǎng)等處理后自體回植4 w。骨瓣自體回植后于第1、3、7、14 d抽取兔血清檢測IL-1、TNF-α濃度;回植4 w后,再次于回植骨瓣邊緣外2-3mm取下完整骨瓣,觀察回植骨瓣大體形態(tài),并進行HE染色及免疫組化血管內皮細胞計數(shù)。結果:1、白兔骨瓣回植后第1、3、7、14 d,通過抽白兔耳緣靜脈血檢測IL-1、TNF-α濃度,與對照組相比,實驗組白兔血清IL-1、TNF-α濃度在第1、3、7、14 d均低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2、實驗過程中白兔全部存活,大體狀況良好。取回植骨瓣時,可見回植骨瓣呈白色,周邊顱骨呈鮮紅色,回植骨瓣內板及外板周圍可見骨痂形成。實驗組回植骨瓣未見骨質吸收(骨質吸收發(fā)生率0/8);對照組回植骨瓣出現(xiàn)3例骨質吸收(骨質吸收發(fā)生率3/8)。3、HE切片可見回植骨瓣與原顱骨缺損處愈合,界限分明。顯微鏡下觀察HE染色切片,見回植骨瓣愈合,愈合處可見形成新的骨痂形成,并可見骨細胞。4、CD31免疫組化結果示回植骨瓣內有染成棕黃色的血管內皮細胞,與對照組相比,實驗組VECs明顯增多。結論:多孔沖洗自體骨瓣后程序化凍存及復溫可以降低炎癥反應和骨質吸收發(fā)生率,增加回植骨瓣的VECs。
【圖文】：

0.2ml/kg 誘導麻醉，20%烏拉坦 5ml/kg 腹腔維持麻醉。通過白兔角膜反射、肌張力、疼痛反射等判斷麻醉程度，待麻醉完成后，剪刀剪去白兔顱骨頂部兔毛，刀片刮除殘余兔毛，白兔保持俯臥位固定于動物立體定位頭架（DY 1 型，天津市醫(yī)療器械研究所），，術者刷手，碘伏消毒三遍，鋪巾，縱行切開頭皮約 8cm，由中間向左邊將骨膜剝離，暴露白兔顱骨人字縫、矢狀縫和冠狀縫，于左側頂骨處用高速牙科鉆取約 1.0×1.0cm2四邊形骨瓣，16 只白兔共計 16 塊骨瓣，并進行編號。取下的實驗組骨瓣立即置于肝素生理鹽水中，用 1ml 注射器針頭間隔3mm 于內、外板扎孔，穿刺過程中出現(xiàn)突破感時停止進針并拔出，由針孔處觀察到血液滲出，確保針尖僅穿孔至板障而不穿透骨瓣。以注射器抽取 1ml 肝素生理鹽水對每個針孔進行沖洗，沖洗出的液體逐漸清亮，且整體骨瓣顏色逐漸變白（圖 1）。隨后骨瓣置于含 10%二甲基亞砜（Dimethyl Sulphoxide, DMSO）的胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）中，利用程序化冷凍方法，4℃冰箱冷藏30 min，隨后-20℃凍存 2h，最后-80℃低溫凍存 3 m。對照組除不進行骨瓣沖洗外，余操作同實驗組。骨瓣取下處理同時，助手進行兔術區(qū)止血、縫合等操作，并肌注慶大霉素 0.2mL/kg 預防感染，放回籠內，每日觀察傷口。

圖 2 取骨瓣前后大體形態(tài)。牙科轉鉆 4 孔及手術剪刀剪取骨瓣大體形態(tài)（A）；骨瓣取下后大體形態(tài)（B）。2.2 骨瓣鉆孔、沖洗后大體形態(tài)用 1ml 注射器針頭間隔 3mm 于對骨瓣內、外板扎孔，實驗組骨瓣通過注射器抽取 1ml 肝素生理鹽水對每個針孔進行沖洗骨瓣內、外板（非交通性）。沖洗前，骨瓣充滿血液，呈暗紅色；沖洗后，骨瓣內血液大部分沖出且整體骨瓣顏色逐漸變白（圖 3）。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R651.1

【參考文獻】

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本文編號：2605647