【摘要】：目的:探索BMP-7在體外誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分化為神經(jīng)元的作用。方法:以全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)大鼠BMSCs。流式細胞儀檢測細胞表型CD29、CD44。成脂誘導(dǎo)及油紅O染色鑒定大鼠BMSCs多向分化能力。MTT法檢測濃度分別為25ng/ml、50ng/ml、75ng/ml及100ng/ml的BMP-7對大鼠BMSCs增殖的影響。倒置相差顯微鏡下觀察25ng/ml、50ng/ml、75ng/ml及100ng/ml的BMP-7誘導(dǎo)大鼠BMSCS后形態(tài)學(xué)變化,并取形態(tài)學(xué)變化最顯著的進行后續(xù)實驗。qRT-PCR檢測誘導(dǎo)得到的細胞神經(jīng)絲蛋白200(Neurofilament protein-200,NF200)、突觸蛋白1(Synaptic protein 1,SYN1)、微管相關(guān)蛋白2(Microtubule-associated protein-2,MAP2)、膠質(zhì)纖微酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)mRNA相對表達量。免疫組化檢測誘導(dǎo)得到的細胞NF200、MAP2、SYN1、GFAP蛋白表達情況。免疫熒光實驗檢測誘導(dǎo)得到的細胞NF200、SYN1、MAP2、GFAP蛋白表達情況。Western Blot實驗檢測誘導(dǎo)得到的細胞NF200、SYN1、MAP2、GFAP蛋白表達情況。結(jié)果:體外培養(yǎng)的第3代大鼠BMSCs細胞胞漿豐富,多呈長梭形,部分為多角形,細胞聚集生長呈漩渦狀。分離培養(yǎng)得到的大鼠BMSCS陽性表達CD29、CD44,陽性率分別為99.44%、99.17%。大鼠BMSCs成脂誘導(dǎo)28天后胞漿內(nèi)出現(xiàn)脂滴,油紅O染色陽性。MTT實驗結(jié)果表明25ng/ml、50ng/ml、75ng/ml及100ng/ml的BMP-7對大鼠BMSCs的增殖均具有促進作用,其中75ng/ml的BMP-7促進大鼠BMSCs增殖作用最顯著。形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果表明25 ng/ml BMP-7組、50 ng/ml BMP-7組、75 ng/ml BMP-7組、100 ng/ml BMP-7組細胞形態(tài)均有不同程度的變化,尤以75 ng/mlBMP-7組細胞形態(tài)學(xué)變化最為顯著,形態(tài)上類似于神經(jīng)元細胞。大鼠BMSCs經(jīng)BMP-7(75 ng/ml)誘導(dǎo)2 h后,BMP-7組NF200 mRNA相對表達量為(5.47±0.59)顯著高于對照組(P0.05),BMP-7組SYN1 mRNA相對表達量(1.48±0.38)顯著高于對照組(P0.05),BMP-7誘導(dǎo)組MAP2 mRNA相對表達量(2.86±1.65)顯著高于對照組(P0.05),BMP-7誘導(dǎo)組GFAP mRNA相對表達量(4.41±0.13)顯著高于對照組。免疫組化結(jié)果表明大鼠BMSCs經(jīng)BMP-7誘導(dǎo)2 h后,陽性表達NF200、MAP2及SYN1,陰性表達GFAP。免疫熒光結(jié)果表明大鼠BMSCs經(jīng)BMP-7誘導(dǎo)后2 h后,誘導(dǎo)得到的細胞陽性表達NF200、MAP2、SYN1,且主要在胞漿及形成的突起中表達,陰性表達GFAP。Western Blot實驗結(jié)果表明大鼠BMSCs經(jīng)BMP-7誘導(dǎo)2h后,BMP-7組NF200的相對表達量(1.091±0.0060)顯著高于對照組(0.4385±0.0046)(p0.01),BMP-7組SYN1的相對表達量(1.293±0.0029)顯著高于對照組(0.9885±0.0018)(p0.01),BMP-7組MAP2的相對表達量(1.167±0.0045)顯著高于對照組(0.9697±0.0031)(p0.01),BMP-7組GFAP的相對表達量(0.6130±0.0012)顯著低于對照組(0.9286±0.0029)(p0.01)。結(jié)論:1.BMP-7具有促進大鼠BMSCs增殖的作用。2.BMP-7誘導(dǎo)大鼠BMSCs向神經(jīng)元分化的最佳濃度為75 ng/ml。3.BMP-7誘導(dǎo)大鼠BMSCs得到的細胞在形態(tài)上與神經(jīng)元細胞相似,陽性表達神經(jīng)元細胞標(biāo)志物,證實BMP-7在體外具有誘導(dǎo)大鼠BMSCs分化為神經(jīng)元的作用。
【圖文】：

圖 1 大鼠 BMSCs 的形態(tài)學(xué)觀察（a：×100 b：×400）Fig.1 Morphological observation of rat BMSCs (a: × 100 b: × 400)2. 大鼠 BMSCs 細胞表型 CD29、CD44 的表達情況流式細胞儀檢測分離、培養(yǎng)得到的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞細胞表型 CD29、CD44的結(jié)果顯示，分離、培養(yǎng)得到細胞均一表達 CD29、CD44，陽性率分別為 99.44%、99.17%。

誘導(dǎo)至第 7d 可見胞漿內(nèi)出現(xiàn)小油滴，見圖3a；隨著誘導(dǎo)時間的延長，脂滴逐漸增多并融合為較大的脂滴，見圖 3b；誘導(dǎo) 4w 后行油紅 O 染色，，經(jīng)油紅 O 染色，顯微鏡觀察，可見脂滴均著橘紅色，見圖 3c、d。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R651.2

【參考文獻】

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1 莫翠萍;王家傳;周光前;姚曉璐;龔飛鵬;陳鋼;;骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療大鼠脊髓損傷的神經(jīng)分化研究[J];中華細胞與干細胞雜志(電子版);2015年04期

2 鄧磊;尚暉;常巍;吳亞鵬;李兵奎;郭振鵬;王達義;;脊柱脊髓損傷患者424例流行病學(xué)分析[J];中國臨床研究;2015年07期

3 Tevfik Y?lmaz;Erkan Kaptano?lu;;Current and future medical therapeutic strategies for the functional repair of spinal cord injury[J];World Journal of Orthopedics;2015年01期

4 鄺業(yè)興;;納洛酮聯(lián)合醒腦靜用于顱腦外傷患者神經(jīng)功能改善的療效分析[J];現(xiàn)代診斷與治療;2014年17期

5 牟樂明;孫占勝;王伯珉;高平;初向全;;骨髓間充質(zhì)干細胞移植對脊髓損傷大鼠Toll樣受體4表達的影響[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年01期

6 Zuncheng Zheng;Guifeng Liu;Yuexia Chen;Shugang Wei;;Olfactory ensheathing cell transplantation improves sympathetic skin responses in chronic spinal cord injury[J];Neural Regeneration Research;2013年30期

7 于竹芹;魯成龍;李紅云;裴海濤;;BMP-7對大鼠腦缺血損傷后神經(jīng)細胞凋亡的影響[J];臨床醫(yī)學(xué)工程;2013年02期

8 李脈;敖麗娟;王文麗;;干細胞移植治療脊髓損傷的研究進展[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2012年S1期

9 王金光;荊鑫;張建民;張明健;傅晨;;RNA干擾對Caspase-3基因表達的抑制作用[J];中國康復(fù)理論與實踐;2009年04期

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2 高平;骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）誘導(dǎo)分化為類神經(jīng)細胞移植治療大鼠脊髓損傷[D];山東大學(xué);2013年

本文編號：2591379