【摘要】：目的探討阻斷Kupffer細胞(Kupffer cells,KCs)T細胞免疫球蛋白黏蛋白4(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule 4,TIM-4)誘導小鼠原位肝移植術后i Treg細胞的產(chǎn)生及其相關機制。方法建立小鼠原位肝移植急性排斥反應模型,分為sham組、control m Ab組、TIM-4 m Ab組。流式細胞儀檢測KCs活化,Western blot檢測肝臟TIM-4表達,TUNEL檢測肝細胞凋亡指數(shù)(apoptotic index,AI)。提取KCs,激光共聚焦檢測KCs TIM-4表達,將KCs和提取的初始CD4+T細胞進行共培養(yǎng),激光共聚焦檢測Kupffer細胞TIM-4表達,分為control組、control m Ab組以及TIM-4 m Ab組;CFSE檢測CD4+T細胞增殖,流式細胞儀檢測CD4+CD25+Foxp3+T細胞,ELISA檢測IL-4、IL-6、IL-13水平,Western blot檢測STAT6表達。建立小鼠移植模型,分為3組:i Treg組移植模型注入i Treg細胞(預先用TIM-4 m Ab處理的TIM-4+KCs與初始CD4+T細胞共培養(yǎng)所誘導),sham組和單純肝移植組(LT)注入相應的PBS作為對照,檢測各組AST、ALT、TBIL水平,HE染色評價肝組織排斥活動指數(shù)(rejective activity index,RAI),觀察小鼠生存率。結(jié)果肝移植術后24、48、72 h KCs的活化分別為15.9%、21.6%、28.3%,術后1、3、7 d TIM-4蛋白表達水平明顯高于sham組(P0.05);control m Ab組AI值(29.23±2.56)明顯高于sham組和TIM-4 m Ab組[(0.40±0.49),(11.04±2.28),P0.05]。KCs與CD4+T細胞共培養(yǎng)后,control、control m Ab以及TIM-4 m Ab組CD4+T細胞的增殖率分別為32.5%、31.6%、17.2%,CD4+CD25+Foxp3+T細胞分化分別為12.4%、13.9%、28.1%,共培養(yǎng)上清液TIM-4 m Ab組IL-4、IL-6、IL-13分泌水平明顯低于control m Ab(P0.05),且加入TIM-4 m Ab明顯降低了與TIM-4+KCs共培養(yǎng)的CD4+T細胞p-STAT6蛋白表達(P0.05),外源性加入IL-4可明顯增高CD4+T細胞p-STAT6蛋白的表達(P0.05)。移植模型注入i Treg細胞,i Tregz組肝功指標明顯好轉(zhuǎn),與LT組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。肝組織病理學檢查,i Treg組RAI平均得分為(3.97±0.67),明顯低于LT組[(8.47±0.90),P0.05],且i Treg組小鼠平均存活時間延長。結(jié)論阻斷KCs TIM-4能夠抑制初始CD4+T細胞IL-4/STAT6信號通路的激活,從而誘導更多i Treg細胞的生成,致使宿主對移植物產(chǎn)生免疫耐受。
【圖文】：

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本文編號：2551104