發(fā)布時間：2019-10-18 08:07

【摘要】：目的本文探討大鼠急性脊髓損傷后急性期線粒體形態(tài)和線粒體功能的變化,從亞細(xì)胞器的角度闡述了脊髓損傷后的病理生理變化,同時也為進(jìn)一步研究線粒體靶向治療脊髓損傷奠定基礎(chǔ)。方法選取SD大鼠108只,采用隨機(jī)數(shù)字表法分6組:假手術(shù)組(Sham組)和脊髓損傷組(SCI組),SCI組又分為處理后2h、4h、8h、16h、24h組,每組18只(6只用于透射電鏡觀察,6只用于Western blot檢測,6只用于生物化學(xué)功能檢測)。對SCI組采用Allen's打擊法制作大鼠脊髓損傷模型,假手術(shù)組只暴露脊髓,不打擊。在各時相提取傷段脊髓組織線粒體,運(yùn)用透射電鏡觀察線粒體的形態(tài)改變;通過運(yùn)用Western blot方法測定線粒體融合、分裂蛋白的表達(dá)反映線粒體動力學(xué)改變;通過測定線粒體丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)以及ATP含量反映線粒體氧化損傷情況;通過測定線粒體Na+-K+-ATP酶活性變化、JC-1法測定線粒體膜電位的變化反映線粒體膜通透性變化;通過運(yùn)用Western blot方法測定細(xì)胞色素C的釋放及凋亡關(guān)鍵蛋白caspase-3的表達(dá)反映各時相凋亡損傷情況。結(jié)果1、透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn),Sham組線粒體形態(tài)規(guī)則,嵴清楚,排列整齊;SCI組在傷后2h線粒體形態(tài)規(guī)則,體積略增大;傷后4h線粒體體積略增大,嵴排列稍紊亂;傷后8h線粒體體積增大,嵴稍腫脹;傷后16h線粒體結(jié)構(gòu)不清,嵴斷裂、排列紊亂、部分線粒體膜破裂,有空泡化;傷后24h線粒體大小不一,形態(tài)不規(guī)則,部分線粒體膜破裂,有空泡化。2、急性脊髓損傷后線粒體融合蛋白Mfn1表達(dá)呈現(xiàn)上升趨勢,在8h表達(dá)量達(dá)到峰值,隨之呈現(xiàn)迅速下降趨勢,在24h表達(dá)量最少;急性脊髓損傷后線粒體分裂蛋白Drp1呈現(xiàn)先減少后增加趨勢,在8h表達(dá)開始增多,在24h表達(dá)量最多。3、急性脊髓損傷后線粒體MDA含量呈現(xiàn)增多趨勢,4h開始顯著增多,24h達(dá)到峰值;線粒體GSH含量呈現(xiàn)減少趨勢,4h開始顯著減少,24h含量達(dá)到最低。4、急性脊髓損傷后線粒體ATP含量呈現(xiàn)減少趨勢,4h顯著減少,24h含量達(dá)到最低。5、急性脊髓損傷后線粒體Na+-K+-ATP酶活性呈現(xiàn)降低趨勢,4h顯著降低,24h活性最低。6、急性脊髓損傷后線粒體膜電位呈現(xiàn)下降趨勢,4h顯著降低,24h呈現(xiàn)最低。7、急性脊髓損傷后細(xì)胞色素C的釋放量與caspase-3的表達(dá)量呈現(xiàn)增長趨勢,在16h達(dá)到峰值。結(jié)論大鼠急性脊髓損傷后急性期線粒體形態(tài)發(fā)生明顯改變,并且動力學(xué)蛋白也發(fā)生改變,融合先占主導(dǎo),隨著受損時間延長,分裂后占主導(dǎo);傷段脊髓組織4h-8h線粒體功能變化比較明顯,生物氧化受阻,生物產(chǎn)能降低,線粒體Na+-K+-ATP酶活性降低,線粒體膜電位明顯下降,線粒體膜通透性下降,隨著受損時間延長,最終導(dǎo)致線粒體凋亡途徑的激活。
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R651.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 蔡衛(wèi)華;張寧;范衛(wèi)民;胡志毅;金正帥;賈連順;葉曉健;;脊髓損傷后大鼠脊髓線粒體呼吸功能和游離Ca~(2+)含量的變化[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2006年06期

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本文編號：2550992