【摘要】：目的探討長時間不同強度負壓對兔BMSCs成骨分化及增殖的影響。方法取4~6月齡新西蘭大白兔股骨骨髓,采用密度梯度離心法分離培養(yǎng)BMSCs,并行流式細胞術及成骨誘導鑒定。取第3代細胞采用成骨誘導培養(yǎng)基誘導培養(yǎng),并加載不同強度負壓,分別為0、75、150 mm Hg(1 mm Hg=0.133 k Pa)(對照組、低負壓組、高負壓組);負壓時間為30 min/h。倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài),繪制細胞生長曲線;誘導3、7、14d采用ELISA法檢測細胞ALP活性,14d采用實時熒光定量PCR及Western blot檢測各組Ⅰ型膠原、骨鈣素(osteocalcin,OC)基因及蛋白表達。結(jié)果經(jīng)流式細胞儀及成骨誘導鑒定所培養(yǎng)細胞為BMSCs;第3代BMSCs為典型的長梭形和不規(guī)則形。誘導4d,高負壓組細胞顯著少于對照組及低負壓組(P0.05),低負壓組與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);5~7d 3組間細胞數(shù)比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),負壓越大細胞增殖受抑制越明顯。ALP活性檢測示,誘導3d各組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);7d,僅高負壓組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);14d,3組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),負壓越大ALP活性越高。實時熒光定量PCR及Western blot檢測示,低負壓組及高負壓組Ⅰ型膠原和OC m RNA及蛋白表達量均顯著高于對照組,高負壓組高于低負壓組,比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論隨負壓增高,兔BMSCs成骨能力逐漸增強,而細胞增殖能力逐漸受抑制。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of different intensity negative pressure on osteogenic differentiation and proliferation of rabbit BMSCs for a long time. Methods the bone marrow of 4 and 6 months old New Zealand white rabbits was isolated and cultured by density gradient centrifugation. Flow cytometry and osteogenesis induction were used to identify the bone marrow. The cells of the third passage were induced by osteoblast induction medium and loaded with negative pressure of different intensities, which were 0 ~ 75150 mm Hg (_ 1 mm Hg=0.133 k Pa) (control group, low negative pressure group and high negative pressure group, respectively, and the negative pressure time was 30 min/h.. The state of cell growth was observed under inverted microscope and the cell growth curve was drawn. The activity of ALP was detected by ELISA assay and the expression of type I collagen, osteocalcin (osteocalcin,OC) gene and protein were detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot on the 14th day after induction. Results the cultured cells were identified by flow cytometry and osteoblast induction to be typical fusiform and irregular shape of BMSCs in the third passage of BMSCs;. After induction for 4 days, the number of cells in the high negative pressure group was significantly lower than that in the control group and the low negative pressure group (P0.05), but there was no significant difference between the low negative pressure group and the control group (P0.05). There were significant differences in the number of cells between the three groups on the 7th day after induction (P0.05), and the more negative pressure the cells were inhibited, the more obvious the cell proliferation was. The ALP activity test showed that there was no significant difference between the three groups on the 3rd day of induction (P0.05). At 7 days, there was significant difference between the high negative pressure group and the control group (P0.05), and the difference between the 14 day group and the control group was statistically significant (P0.05). The higher the negative pressure was, the higher the ALP activity was. Real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot analysis showed that the expression of type I collagen, OC m RNA and protein in low negative pressure group and high negative pressure group were significantly higher than that in control group, and that in high negative pressure group was higher than that in low negative pressure group, the difference was statistically significant (P0.05). Conclusion with the increase of negative pressure, the osteogenic ability of rabbit BMSCs is gradually enhanced, and the proliferation of rabbit cells is inhibited gradually.
【作者單位】： 石河子大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院普外一科;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(31271458) 兵團應用基礎研究計劃資助項目(2016AG019)~~
【分類號】：R687

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