【摘要】：目的通過持續(xù)尾靜脈泵入胰蛋白酶(Trypsin,TPS)模擬重癥急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis,SAP)時(shí)胰酶釋放入血來制作急性肺損傷模型,觀察內(nèi)皮素-1(Endothelin-1,ET-1)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在肺組織中的表達(dá)變化情況并檢測肺組織毛細(xì)血管通透性,探討ET-1、VEGF在胰蛋白酶導(dǎo)致的急性肺損傷中的作用機(jī)制及意義。方法隨機(jī)選取72只體重為230-250g的健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)級大鼠,隨機(jī)分成3組,即模型組(胰蛋白酶注射組,即TPS組)、藥物抑制組(胰蛋白酶+烏司他丁(Ulinastatin,UTI)注射組,即UTI組)、正常對照組(生理鹽水注射組,即CON組),每組24只,隨機(jī)將每組再按時(shí)間點(diǎn)分為4個(gè)時(shí)間亞組,每個(gè)時(shí)間亞組6只大鼠,分別為3h組、6h組、12h組、24h組。TPS組將胰蛋白酶以15000U/Kg/h速度持續(xù)泵入大鼠尾靜脈制作急性肺損傷模型;CON組將等量生理鹽水采用同樣方法泵入大鼠尾靜脈作對照;UTI組同TPS組,制模后立即烏司他丁5萬單位皮下注射。觀察三組大鼠靜脈注射后的一般情況,處死動物前30min立即從股靜脈注入2%伊文思藍(lán)(Evans Blue,EB)(0.8 ml/kg),分別于造模成功后3h、6h、12h、24h各時(shí)間點(diǎn)眼底靜脈采血后處死大鼠采集標(biāo)本。采取眼底靜脈血1.5ml,采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-linked immuneosorbent assay,ELISA)檢測血漿中ET-1、VEGF的變化;于各時(shí)間點(diǎn)采集固定部位大小約1cm3肺組織,置入4ml甲酰胺溶液中,測量EB含量與肺組織干重比評價(jià)肺毛細(xì)血管通透性;取一定量肺組織,測量濕重及干重,計(jì)算肺組織濕干重比(Wet/dry weight ratio,W/D);取一定量肺組織分別用4%多聚甲醛、3%戊二醛固定,于光鏡及透射電鏡下觀察組織的病理形態(tài)學(xué)情況;通過ELISA法檢測肺組織中ET-1、VEGF蛋白的表達(dá)變化,實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測系統(tǒng)(Real-time Quantitative PCR Detecting System,QPCR)檢測肺組織中ET-1 m RNA和VEGF m RNA的表達(dá)變化。結(jié)果1.TPS組、CON組及UTI組大鼠存活率均為100%。TPS組各時(shí)間點(diǎn)W/D值較CON組及UTI組明顯增大(P0.05),且TPS組隨時(shí)間延長,W/D值逐漸增大。各時(shí)間點(diǎn)CON組大鼠肺組織大體及鏡下病理基本正常,UTI組各時(shí)間點(diǎn)組均有不同程度損傷,與TPS組同一時(shí)間相比病變較輕。TPS組肺損傷較其余兩組明顯加重:大體病理如下:肺組織3h開始即出現(xiàn)點(diǎn)片狀暗紅色出血,局部水腫,有少量非血性滲出,隨時(shí)間延長病變呈明顯加重趨勢,有的發(fā)展成“大葉性肺炎”,伴有血性滲出;光鏡下病理:肺泡大小、分布紊亂,肺間質(zhì)明顯增寬,毛細(xì)血管擴(kuò)張、淤血,肺間質(zhì)充血、水腫及肺泡腔內(nèi)出現(xiàn)滲出增多,支氣管和肺泡周圍大量的炎性細(xì)胞浸潤,隨時(shí)間延長肺損傷程度逐漸加重;電鏡下病理:肺組織毛細(xì)血管及肺泡上皮細(xì)胞3h開始即有損傷,細(xì)胞器變性,基底膜水腫、變性,隨時(shí)間延長毛細(xì)血管及肺泡上皮細(xì)胞損傷逐漸加重,基底膜變性加重,局部斷裂,毛細(xì)血管管腔狹窄,腔內(nèi)血液瘀滯,細(xì)胞膜破裂,線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器重度變性,細(xì)胞核固縮、溶解。2.通過ELISA方法檢測血漿ET-1和VEGF蛋白發(fā)現(xiàn),CON組各時(shí)間點(diǎn)無顯著差異,與CON組比較,TPS組表達(dá)顯著增高,3h開始即升高,12h時(shí)達(dá)高峰(P0.01),UTI組較TPS組ET-1和VEGF蛋白的表達(dá)水平下降(P0.01)。3.通過ELISA方法檢測肺組織ET-1和VEGF蛋白發(fā)現(xiàn),CON組各時(shí)間點(diǎn)無顯著差異,與CON組比較,TPS組表達(dá)顯著增高,3h開始即升高,12h時(shí)達(dá)高峰(P0.01),UTI組較TPS組ET-1和VEGF蛋白的表達(dá)水平下降(P0.01)。4.通過QPCR檢測肺組織ET-1 m RNA和VEGF m RNA發(fā)現(xiàn),與CON組比較,TPS組表達(dá)水平自3h開始明顯升高,12h時(shí)達(dá)高峰(P0.01),UTI組較TPS組ET-1 m RNA和VEGF m RNA的表達(dá)水平降低(P0.01)。5.通過伊文思藍(lán)漏出率法評價(jià)肺毛細(xì)血管通透性發(fā)現(xiàn),CON組各時(shí)間點(diǎn)無顯著差異,與CON組比較,TPS組肺組織毛細(xì)血管通透性顯著增加(P0.01),UTI組較TPS組毛細(xì)血管通透性下降(12h組、24h組P0.01)。結(jié)論1.胰蛋白酶可造成急性肺損傷,是重癥急性胰腺炎時(shí)胰腺外器官損傷的重要原因之一。2.胰蛋白酶導(dǎo)致的急性肺損傷早期肺組織ET-1和VEGF因子高表達(dá),致血管收縮、通透性增加,導(dǎo)致毛細(xì)血管內(nèi)皮屏障破壞,可能是胰蛋白酶導(dǎo)致微循環(huán)障礙的主要機(jī)制之一。血漿ET-1和VEGF因子的表達(dá)趨勢與肺組織相似,但數(shù)值高于肺組織,說明除了肺組織之外還有其他組織器官ET-1和VEGF因子高表達(dá)。3.烏司他丁對SAP時(shí)急性肺損傷及微循環(huán)障礙有一定的保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R657.51

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2390002