【摘要】：目的觀察糖尿病大鼠自體靜脈橋的形態(tài)學(xué)變化以及骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4(bone morphogenic protein-4,BMP4)和增殖細(xì)胞抗原Ki-67在其管壁中的表達(dá)與分布情況,初步探討B(tài)MP4在高糖環(huán)境下靜脈橋增殖重構(gòu)進(jìn)程中的潛在作用。方法選用8周齡的48只雄性Sprague-Dawley大鼠,隨機(jī)分配為非糖尿病組(即血糖正常組,n=24)及糖尿病組(n=24),采用高脂高糖飲食聯(lián)合鏈脲佐菌素的誘導(dǎo)方法構(gòu)建糖尿病大鼠模型。兩組大鼠均建立單側(cè)頸外靜脈-頸總動(dòng)脈橋接模型,每組分別于術(shù)前,術(shù)后1周、2周和4周獲取大鼠靜脈橋(n=6)。應(yīng)用HE染色切片測(cè)算大鼠靜脈橋血管壁的形態(tài)學(xué)參數(shù),免疫組化觀察Ki-67及BMP4在管壁中的表達(dá)及分布情況,逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)BMP4基因和蛋白在靜脈橋中的表達(dá)量。結(jié)果在大鼠靜脈橋增殖重構(gòu)進(jìn)程中,管壁隨時(shí)間進(jìn)展不斷增厚,而糖尿病大鼠術(shù)后內(nèi)膜和中膜厚度均高于同期的正常大鼠(P0.05)。免疫組化提示Ki-67表達(dá)于大鼠靜脈橋管壁平滑肌細(xì)胞的胞核,Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)隨橋血管增殖重構(gòu)進(jìn)程逐漸增高,而術(shù)后糖尿病大鼠靜脈橋內(nèi)Ki-67的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)高于同期的正常大鼠(P0.05)。免疫組化提示BMP4表達(dá)于大鼠靜脈橋管壁平滑肌細(xì)胞的胞漿,結(jié)合RT-PCR及Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),正常大鼠術(shù)后靜脈橋中僅有少量BMP4的表達(dá),而糖尿病大鼠靜脈橋管壁內(nèi)BMP4的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)以及在基因和蛋白水平的表達(dá)量均隨時(shí)間進(jìn)展逐漸增高,并高于術(shù)后同期的正常大鼠(P0.05)。結(jié)論糖尿病大鼠靜脈移植術(shù)后橋血管增殖性重構(gòu)改變與管壁內(nèi)BMP4的高表達(dá)密切相關(guān),而B(niǎo)MP4可能在高糖環(huán)境下靜脈橋加速失效進(jìn)程中發(fā)揮了重要的促進(jìn)作用。
[Abstract]:Objective to observe the morphologic changes of autogenous vein bridge and the expression and distribution of bone morphogenetic protein-4 (bone morphogenic protein-4,BMP4) and proliferative cell antigen (Ki-67) in diabetic rats. To explore the potential role of BMP4 in the process of vein bridge proliferation and remodeling in high glucose environment. Methods 48 male Sprague-Dawley rats aged 8 weeks were randomly assigned to non-diabetic group (normal blood glucose group, nong24) and diabetic group (nni24). The diabetic rats were induced by high-fat and high-glucose diet combined with streptozotocin (STZ). The unilateral external jugular vein-common carotid artery bridging model was established in both groups. The venous bridge (nong6) was obtained in each group before operation, 1 week, 2 weeks and 4 weeks after operation, respectively. The morphological parameters of vascular wall of venous bridge in rats were measured by HE staining section. The expression and distribution of Ki-67 and BMP4 in vascular wall were observed by immunohistochemistry. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot (Western blot) were used to detect the expression of BMP4 gene and protein in venous bridge. Results in the process of vein bridge proliferation and remodeling, the wall of the vessel was thickened with time, while the thickness of intima and media of diabetic rats was higher than that of normal rats after operation (P0.05). Immunohistochemical staining showed that Ki-67 was expressed in the nucleus of smooth muscle cells of rat venous bridge wall, and the positive expression of Ki-67 increased with the proliferation and remodeling of grafts. The number of Ki-67 positive cells in vein bridge of diabetic rats was higher than that of normal rats (P0.05). Immunohistochemical staining showed that BMP4 was expressed in the cytoplasm of smooth muscle cells of rat venous bridge wall. Combined with RT-PCR and Western blot detection, only a small amount of BMP4 expression was found in normal rat vein bridge after operation. However, the number of BMP4 positive cells and the expression of gene and protein in the venous bridge wall of diabetic rats increased with time, and were higher than those of normal rats in the same period after operation (P0.05). Conclusion the proliferative remodeling of grafts in diabetic rats is closely related to the high expression of BMP4 in vascular wall, and BMP4 may play an important role in accelerating the failure of venous bridges in high glucose environment.
【作者單位】： 四川大學(xué)華西醫(yī)院麻醉科;四川大學(xué)華西醫(yī)院心臟大血管外科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81300155,No.81670327)資助
【分類號(hào)】：R614

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本文編號(hào)：2381739