【摘要】：目的:探討軟骨細(xì)胞與軟骨單位在海藻酸鈉中立體共培養(yǎng)后細(xì)胞生物學(xué)-力學(xué)特性,以期為組織工程種子細(xì)胞的選擇提供依據(jù)。方法:取3月齡新西蘭大白兔膝關(guān)節(jié)軟骨,用兩種方法分別消化成軟骨細(xì)胞和軟骨單位,然后把細(xì)胞以2×105/ml的密度與2%海藻酸鈉凝膠混勻,制成海藻酸鈉小球(約50ul),實(shí)驗(yàn)分三組:①單純軟骨細(xì)胞組、②軟骨單位+軟骨細(xì)胞(1:1)共培養(yǎng)組、③單純軟骨單位組。HE染色法觀察兩者在海藻酸鈉中的大致形態(tài);在培養(yǎng)第7、14、21、28天時(shí)用CCK-8法測(cè)定細(xì)胞的增殖情況;RT-PCR測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)三組細(xì)胞蛋白聚糖(aggrecan,AGG)、Ⅱ型膠原(Collagen typeⅡ,Col-Ⅱ)和基質(zhì)金屬蛋白酶-13(Matrix metalloproteinase 13,MMP-13)的基因相對(duì)表達(dá)量;微管吸吮技術(shù)測(cè)定培養(yǎng)不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞力學(xué)特性。結(jié)果:1.細(xì)胞生長(zhǎng)代謝的結(jié)果:培養(yǎng)第7天時(shí),軟骨細(xì)胞組的細(xì)胞增殖最快,共培養(yǎng)組的細(xì)胞增殖速度介于其它兩組之間,軟骨單位組細(xì)胞增殖最慢(P0.05);第14天時(shí),共培養(yǎng)組的細(xì)胞增殖最快(P0.05),其它兩組間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;培養(yǎng)第21天時(shí),軟骨細(xì)胞組的細(xì)胞增殖最慢(P0.05),其它兩組間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;第28天時(shí),軟骨單位組的細(xì)胞增殖最快,高于其它兩組(P0.05),其它兩組間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.RT-PCR結(jié)果:①Ⅱ型膠原:培養(yǎng)第7天時(shí),軟骨細(xì)胞組的Ⅱ型膠原相對(duì)表達(dá)量高于軟骨單位組(P0.05),共培養(yǎng)組與其它兩組比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;第14天時(shí),共培養(yǎng)組相對(duì)表達(dá)量高于其它兩組(P0.05),其它兩組間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;第21天時(shí),三組之間相比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;第28天時(shí),軟骨單位組的Ⅱ型膠原相對(duì)表達(dá)量最高(P0.05),其它兩組間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②AGG:培養(yǎng)第7天時(shí),軟骨細(xì)胞組的AGG相對(duì)表達(dá)量最高(P0.05);第14天時(shí),三組之間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;第21、28天時(shí),軟骨細(xì)胞組基因相對(duì)表達(dá)量最低(P0.05),其它兩組相比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③MMP-13:MMP-13基因相對(duì)表達(dá)量在第7天與第14天時(shí)三組間相比差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第21、28天時(shí),軟骨細(xì)胞組與共培養(yǎng)組表達(dá)量高于共培養(yǎng)組(P0.05),但兩者相比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.軟骨細(xì)胞粘彈性參數(shù)分析結(jié)果:①對(duì)3組軟骨細(xì)胞的瞬時(shí)模量(E0)、平衡模量(E∞)、表觀黏性(μ)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn),培養(yǎng)第7天時(shí)軟骨細(xì)胞組的E0、E∞、μ均低于后兩組(P0.05);共培養(yǎng)組介于兩者之間(P0.05);軟骨單位組高于其它兩組(P0.05)。②培養(yǎng)第14天時(shí)軟骨細(xì)胞組的E0、E∞、μ均低于后兩組(P0.05);共培養(yǎng)組介于其它兩者之間(P0.05);軟骨單位組高于其它兩組(P0.05)。③培養(yǎng)第21天時(shí),軟骨細(xì)胞組與共培養(yǎng)組的E0、E∞、μ差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;軟骨單位組高于其它兩組(P0.05)。④培養(yǎng)第28天時(shí),軟骨細(xì)胞組與共培養(yǎng)組的E0、E∞、μ差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;軟骨單位組高于其它兩組(P0.05)。結(jié)論:軟骨細(xì)胞與軟骨單位立體共培養(yǎng)能使細(xì)胞增殖和相關(guān)基因表達(dá)維持較長(zhǎng)的時(shí)間,亦能保持較好的力學(xué)特性,但仍需進(jìn)一步研究來(lái)證實(shí),在體內(nèi)是否也會(huì)得到相同的結(jié)果。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R684.3

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4 張e，

本文編號(hào)：2278445