【摘要】：目的:在全世界范圍內(nèi),顱腦創(chuàng)傷(Traumatic Brain Injury,TBI)已經(jīng)成為中青年人群致死、致殘的首要因素。TBI病理過(guò)程主要包括原發(fā)顱腦損傷和繼發(fā)性顱腦損傷,原發(fā)性的顱腦損傷往往發(fā)生在受傷當(dāng)時(shí),由機(jī)械暴力直接導(dǎo)致,而繼發(fā)性損傷則是出現(xiàn)在原發(fā)性損傷之后的一系列細(xì)胞及生化級(jí)聯(lián)反應(yīng),包括炎性反應(yīng)、自由基損傷、興奮性毒性、水腫、鈣超載、線粒體損傷等一系列病理過(guò)程,并導(dǎo)致腦水腫、細(xì)胞功能障礙、顱內(nèi)壓增高、腦內(nèi)調(diào)節(jié)機(jī)制的破壞等,并最終加重腦部損傷,預(yù)后變差。研究發(fā)現(xiàn),高遷移率族蛋白B1(High Mobility Group Box 1,HMGB1)作為促炎癥反應(yīng)介質(zhì),在繼發(fā)性損傷的炎癥反應(yīng)中具有潛在的中心作用。在我們臨床工作中,顱腦創(chuàng)傷合并肢體骨折(Bone Fracture,BF)是常見(jiàn)的TBI復(fù)合傷類(lèi)型,并且這類(lèi)患者往往比單純TBI患者病情更重,預(yù)后更差。而在BF對(duì)于TBI患者神經(jīng)功能恢復(fù)的影響,以及HMGB1在其中的作用方面的研究尚屬空白。因此,本次研究旨在探討合并肢體骨折對(duì)TBI小鼠及患者神經(jīng)功能恢復(fù)及預(yù)后的影響,以及血清中HMGB1在這一過(guò)程中所扮演的角色。方法:1動(dòng)物實(shí)驗(yàn):將192只雄性C57BL/6小鼠(12~14周齡、28~32 g)分成對(duì)照組、單純TBI組、TBI+BF組、TBI+BF+HMGB1抗體組四組,每組48只。模型制作完成后,均立即抽取小鼠靜脈血,靜置離心后獲取血清標(biāo)本并置于-80℃冰箱保存待測(cè)。小鼠正常飼養(yǎng)。在飼養(yǎng)2天后,從各組小鼠中隨機(jī)挑選8只小鼠,抽取靜脈血并獲取血清標(biāo)本,置于-80℃冰箱保存待測(cè),抽血完成后放回各自籠中,同樣的方法再次從各組中隨機(jī)挑選8只小鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分(Neurological severity score,NSS)、粘附物去除實(shí)驗(yàn)(Adhesive removal test)、轉(zhuǎn)角實(shí)驗(yàn)(Corner test)等測(cè)試,記錄測(cè)試結(jié)果后放回原飼養(yǎng)籠。再?gòu)母鹘M中隨機(jī)挑選24只小鼠,其中,8只進(jìn)行腦含水量測(cè)試,8只利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)腦損傷部位炎癥因子基因的表達(dá)水平,剩下8只測(cè)定損傷壞死腦組織體積。在飼養(yǎng)第4天,采用與第2天同樣的方法,對(duì)四組小鼠留取靜脈血清標(biāo)本,并進(jìn)行各項(xiàng)測(cè)試和檢驗(yàn)。小鼠血液標(biāo)本收集完畢后,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)測(cè)試血清標(biāo)本內(nèi)HMGB1含量。2臨床實(shí)驗(yàn)根據(jù)實(shí)驗(yàn)納入標(biāo)準(zhǔn)將41位急性TBI重癥患者納入研究,并分為2組:單純TBI組和TBI+BF組,記錄患者入院時(shí)GCS評(píng)分,并在受傷第1天、第3天、第5天、第7天進(jìn)行血液HMGB1的檢測(cè)。正常對(duì)照組標(biāo)本來(lái)自于體檢中心體檢人群中身體健康體檢者10名。所有患者隨訪6個(gè)月,并記錄傷后第6個(gè)月時(shí)的GOS評(píng)分。結(jié)果:1 TBI組與TBI+BF組小鼠在第2天、第4天的NSS評(píng)分、粘附物去除試驗(yàn)去除時(shí)間均比對(duì)照組要大(P0.01),轉(zhuǎn)角試驗(yàn)左轉(zhuǎn)的頻率均明顯高于對(duì)照組小鼠(TBI組:P0.05,TBI+BF組:P0.01)。而與TBI組相比,TBI+BF組小鼠NSS評(píng)分在第2天無(wú)明顯差異,第4天時(shí)TBI+BF組評(píng)分明顯高于單純TBI組(P0.01);TBI+BF組小鼠在第2天、第4天的粘附物去除試驗(yàn)去除時(shí)間均比TBI組長(zhǎng)(第2天P0.05,第4天P0.01)。TBI+BF組小鼠轉(zhuǎn)角試驗(yàn)左轉(zhuǎn)的頻率在第2天時(shí)與TBI組無(wú)明顯差異(P0.05),而在第4天時(shí)明顯高于TBI組(P0.05)。2小鼠損傷腦組織的體積占比:在第2天和第4天,TBI組和TBI+BF組明顯比對(duì)照組要大(P0.01)。TBI組和TBI+BF組相比,兩組第2天沒(méi)有明顯區(qū)別(P0.05),但是在第4天,TBI+BF組小鼠比單純TBI組要大(P0.05)。小鼠腦組織含水量:TBI組與TBI+BF組在第2天和第4天均高于對(duì)照組(P0.05),TBI組和TBI+BF組在第2天沒(méi)有明顯差異(P0.05),但在第4天TBI+BF組比TBI組的含水量要高(P0.05)。3在傷后第2天、第4天,TBI和TBI+BF組的TNF-α,IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá)水平均比對(duì)照組要高(P0.01)。TBI組和TBI+BF組在第2天TNF-α和IL-1β的m RNA表達(dá)水平?jīng)]有明顯差異,而TBI+BF組小鼠IL-6 m RNA表達(dá)水平則高于單純TBI組小鼠(P0.05)。在第4天,TBI+BF組小鼠這三種因子的m RNA表達(dá)水平全部明顯高于TBI組小鼠(TNF-α,IL-1β:P0.05;IL-6:P0.01)。4小鼠血清HMGB1含量:三組在受傷當(dāng)日測(cè)得含量均較低,且無(wú)明顯差別;在受傷第2天TBI和TBI+BF組含量明顯增高,均高于空白對(duì)照組(P0.01),且TBI+BF組含量比單純TBI組高(P0.05);受傷第4天時(shí),TBI+BF組小鼠比單純TBI組小鼠含量更高(P0.05);TBI組小鼠血清HMGB1含量在TBI后2天之后保持穩(wěn)定,而TBI+BF組小鼠HMGB1水平持續(xù)升高,并且明顯高于TBI組(P0.05)。5與TBI+BF組小鼠相比,TBI+BF+HMGB1抗體組小鼠第2天及第4天損傷腦組織體積占比、腦組織水含量、NSS評(píng)分、轉(zhuǎn)角試驗(yàn)左轉(zhuǎn)的頻率均比TBI+BF組低(P0.05)。提示HMGB1抗體減輕了腦損傷的程度。6在臨床實(shí)驗(yàn)中,單純TBI組患者與TBI+BF組患者在入院時(shí)GCS評(píng)分無(wú)明顯差異(P0.05),實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間段測(cè)得的血清HMGB1含量均高于正常對(duì)照組(P0.01)。單純TBI組與TBI+BF組相比較,第一天兩組HMGB1含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),而第3天、第5天、第7天測(cè)得TBI+BF組HMGB1含量均大于單純TBI組(P0.05),提示TBI+BF組的血清HMGB1組增長(zhǎng)速度比單純TBI組要快。7單純TBI組比TBI+BF組傷后第6個(gè)月GOS評(píng)分高(P0.05),患者在第3天血清HMGB1含量與其受傷第6個(gè)月時(shí)GOS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.619,P0.01)。結(jié)論:1小鼠和人TBI均可引起血清中HMGB1含量增加;2 HMGB1是晚期致炎因子,它在人和小鼠TBI早期階段血液中的含量逐漸增加;3合并肢體骨折的TBI小鼠或患者可以通過(guò)HMGB1途徑加重腦部炎癥反應(yīng),并進(jìn)一步加重繼發(fā)性腦損傷;4可以通過(guò)降低TBI+BF小鼠血清HMGB1含量來(lái)減輕繼發(fā)性腦損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R683.4;R651.15

【參考文獻(xiàn)】

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1 曾小燕;謝勇;傅穎s，

本文編號(hào)：2259590