本文選題：神經(jīng)病理性疼痛 + 晚期糖化終末產(chǎn)物受體��； 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：研究背景和目的：由創(chuàng)傷、感染、神經(jīng)病變、代謝性或炎癥性疾病、藥物副作用等多種因素所導(dǎo)致的神經(jīng)病理性疼痛嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。神經(jīng)病理性疼痛形成機(jī)制復(fù)雜,涉及神經(jīng)元傷害性感受器敏化、痛覺(jué)傳導(dǎo)通路的多種離子與蛋白偶聯(lián)受體及信號(hào)分子失調(diào)、非神經(jīng)細(xì)胞(如膠質(zhì)細(xì)胞)的異常激活、免疫細(xì)胞浸潤(rùn)、以及多種致痛因子如ATP、谷氨酸鹽、活性氧、促炎細(xì)胞因子、趨化因子、緩激肽、前列腺素、P物質(zhì)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子等的釋放。晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(the recepotr for advanced glycation end products,RAGE),是一種表達(dá)在細(xì)胞膜表面的免疫球蛋白超家族蛋白受體。最近的研究表明RAGE參與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生和發(fā)展,其主要的機(jī)制為增加氧化應(yīng)激的水平和加劇免疫炎癥反應(yīng)。在中樞神經(jīng)系統(tǒng),大量堆積的RAGE配體可促進(jìn)膠質(zhì)細(xì)胞活化,活化的膠質(zhì)細(xì)胞釋放大量炎癥因子,如IL-6、TNF-α和IL-1p等,使組織炎癥發(fā)應(yīng)放大。神經(jīng)元上的RAGE激活,使細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)大量生成,導(dǎo)致神經(jīng)元的逐漸凋亡。ROS和炎癥因子導(dǎo)致神經(jīng)毒性,形成惡性循環(huán),長(zhǎng)期持續(xù)存在會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)功能紊亂。在外周神經(jīng)軸突損傷后,RAGE可調(diào)控單核巨噬細(xì)胞的遷移并浸潤(rùn)在損傷軸突遠(yuǎn)端,與神經(jīng)元表達(dá)的RAGE共同作用促進(jìn)受損神經(jīng)軸突芽生,有利于神經(jīng)的重建,恢復(fù)傳導(dǎo)功能。而長(zhǎng)期過(guò)表達(dá)RAGE介導(dǎo)神經(jīng)元軸突的脫髓鞘病變,導(dǎo)致軸突轉(zhuǎn)導(dǎo)功能障礙。RAGE/NF-κB作為重要信號(hào)通路介導(dǎo)外周神經(jīng)損傷已被大量研究所證實(shí),RAGE基因敲除糖尿病模型小鼠中NF-κB活化減少,感覺(jué)傳導(dǎo)纖維數(shù)量比對(duì)照組明顯增加。RAGE的阻斷劑可緩解外周感覺(jué)神經(jīng)纖維的低敏癥狀,過(guò)表達(dá)RAGE則能進(jìn)行性加重外周神經(jīng)癥狀。由于膠質(zhì)細(xì)胞活化和炎癥因子釋放都是疼痛信號(hào)傳導(dǎo)通路上的重要環(huán)節(jié),因此RAGE在神經(jīng)系統(tǒng)與疼痛發(fā)生的關(guān)系有待進(jìn)一步明確。目前RAGE在神經(jīng)病理性疼痛方面相關(guān)的研究較少,為明確RAGE在神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病中的作用,我們建立大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎模型,觀察RAGE在背根神經(jīng)節(jié)和脊髓背角的表達(dá)。通過(guò)鞘內(nèi)注射RAGE中和抗體鎮(zhèn)痛作用的研究,檢測(cè)其下游NF-κB和TNF-a和IL-1p的表達(dá),以及GFAP和Wntl蛋白的表達(dá),探討其在背根神經(jīng)節(jié)發(fā)揮作用的可能機(jī)制。這一研究可為臨床治療神經(jīng)病理性疼痛提供新的思路,同時(shí)也對(duì)炎癥機(jī)制參與的急性神經(jīng)損傷提供借鑒和參考。研究方法：雄性SD大鼠,體重200-250g,采用結(jié)扎腰5脊神經(jīng)(L5)制備模型(SNL)。取脊髓和背根神經(jīng)節(jié)組織,用免疫組化熒光染色和Westernblot分別檢測(cè)術(shù)后1d,3d,7d的RAGE的表達(dá)情況。將大鼠隨機(jī)分為三組,分別為藥物組：SNL術(shù)后每天鞘內(nèi)注射RAGE中和抗體；對(duì)照組：假手術(shù)+磷酸緩沖鹽溶液；安慰劑組：SNL術(shù)+磷酸緩沖鹽溶液。于術(shù)前及術(shù)后1d,3d,5d,7d測(cè)定大鼠的機(jī)械撤爪闞值(PWT)和熱刺激縮爪潛伏期(PTWL)。取術(shù)后7d大鼠背根神經(jīng)節(jié),Westernblot分別檢測(cè)NF-κB、GFAP和Wnt蛋白的表達(dá),采用ELISA檢測(cè)各組中TNF-a和IL-1p的表達(dá)。研究結(jié)果：免疫組化熒光提示,背根神經(jīng)節(jié)RAGE在SNL后3d和7d相比正常對(duì)照組表達(dá)增高(P0.05),且表達(dá)在衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元。Western blot提示,背根神經(jīng)節(jié)RAGE在SNL后1d,3d和7d表達(dá)較術(shù)前表達(dá)增高(P0.05)；脊髓背角RAGE表達(dá)在SNL后1d,3d和7d與正常對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。行為學(xué)結(jié)果提示,與對(duì)照組相比,安慰劑組術(shù)后1d,3d,5d,7d的PWT降低(P0.05)；藥物組術(shù)后1d,3d,5d,7d的PWT降低(P0.05)。與安慰劑組比較,藥物組術(shù)后3d,5d,7d的PWT增加(P0.05)。與對(duì)照組相比,安慰劑組術(shù)后1d,3d,5d,7d的PTWL降低(P0.05)；藥物組術(shù)后1d,3d,5d,7d的PTWL降低(P0.05)。與安慰劑組比較,藥物組術(shù)后3d,5d,7d的PTWL增加(P0.05)。鞘內(nèi)注射RAGE中和抗體提高了大鼠術(shù)后3d、5d、7d的機(jī)械縮爪閾值和熱刺激縮爪潛伏期。采用Western blot測(cè)定SNL術(shù)后7d背根神經(jīng)節(jié)NF-κB、GFAP和Wnt蛋白結(jié)果提示：與對(duì)照組比較,安慰劑組NF-κB (0.80±0.04 vs 0.31±0.02, P0.05)、GFAP (1.46±0.04 vs 0.32±0.08,P0.05)表達(dá)明顯增加；Wntl(0.41±0.04 vs.2.47±0.12,P0.05)表達(dá)降低。與對(duì)照組比較,藥物組術(shù)NF-κB≥(0.51±0.03 vs.0.31±0.02,P0.05).GFAP(0.69±0.06 vs.0.32±0.08,P0.05)表達(dá)明顯增加；Wntl(0.93±0.17 vs.2.47±0.12,P0.05)表達(dá)降低。藥物組術(shù)后的NF-κB(0.51±0.03 vs.0.80±0.04,P0.05).GFAP (0.69±0.06 vs.1.46±0.04,P0.05)較安慰劑組表達(dá)降低；Wntl(0.93±0.17vs. 0.41士0.04,P0.05)表達(dá)增高。采用ELISA法測(cè)定術(shù)后7天背根神經(jīng)節(jié)TNF-α和IL-1β水平提示：與對(duì)照組比較,安慰劑組TNF-α(109.9±4.97 vs.40.18±3.13, P0.05)、IL-1β(168.77±6.34 vs.58.12±3.11,P0.05)表達(dá)明顯增加。與對(duì)照組比較,藥物組TNF-α(70.53±6.57 vs.40.18±3.13,P0.05).IL-1β(88.24 ±3.6v s.58.12±3.11,P0.05)表達(dá)明顯增加。藥物組術(shù)后的TNF-α(70.53±6.57 vs.109.9±4.97,P0.05).IL-1β(88.24±3.6 vs.168.77±6.34,P0.05)較安慰劑組表達(dá)水平降低。研究結(jié)論：RAGE在大鼠SNL后的背根神經(jīng)節(jié)表達(dá)增加,參與了神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生。鞘內(nèi)給予RAGE抗體有效的緩解了大鼠的痛敏癥狀并且抑制了衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞的活化,降低NF-κB和TNF-α和IL-1p表達(dá),增加Wntl蛋白的表達(dá)。綜上所述,背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)RAGE與神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)病密切相關(guān)。
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本文編號(hào)：1815706