目的:驗(yàn)證脫氧膽酸鈉(SD)對(duì)脂肪細(xì)胞的溶解作用,研究脫氧膽酸鈉(SD)在微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的影響,為減少SD溶脂過(guò)程中對(duì)血管的損傷提供理論依據(jù),增加SD溶脂的安全性。方法:1、觀(guān)察SD對(duì)脂肪細(xì)胞損傷作用;檢測(cè)方法:CCK-8、乳酸脫氫酶檢測(cè)。2、觀(guān)察SD對(duì)HDMECs的損傷作用并研究以Caspase-3激活為主的凋亡途徑在這一損傷中的影響;檢測(cè)方法:CCK-8、Western Blot、Real-time PCR、Annexin V/PI雙染。3、研究凋亡在SD損傷脂肪細(xì)胞中的影響;檢測(cè)方法:Hoechst染色、Western Blot、CCK-8。4、觀(guān)察運(yùn)用Z-DEVD-FMK(Caspase-3抑制劑)后SD對(duì)HDMECs損傷程度及凋亡作用方面的變化;檢測(cè)方法:CCK-8、Western Blot、Annexin V/PI雙染。結(jié)果:1、不同濃度的SD作用后均可引起人成熟脂肪細(xì)胞存活率降低,使脂肪細(xì)胞膜受損,細(xì)胞數(shù)量減少。2、不同濃度的SD可使HDMECs存活率下降;0.15mg/m L的SD作用于HDMECs 4、8、12h后,Western Blot檢測(cè)Bax表達(dá)、Caspase-3及PARP活化增加;除4h外,藥物作用8、12h時(shí),Caspase-9活化比對(duì)照組顯著增高;Bcl-2無(wú)明顯變化;各時(shí)間點(diǎn)Caspase-8活化不顯著;加入Z-DEVD-FMK后Caspase-3及PARP活化均減少;Real-time PCR檢測(cè)SD作用下HDMECs后Bax mRNA表達(dá)稍增加,Bcl-2 mRNA表達(dá)無(wú)明顯改變;Annexin V/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)低濃度SD作用于HDMECs后細(xì)胞早期凋亡稍增加,高濃度時(shí)壞死或晚期凋亡的細(xì)胞比例相對(duì)較大。3、SD作用于脂肪細(xì)胞后Hoechst染色未見(jiàn)明顯細(xì)胞凋亡;Western Blot檢測(cè)Caspase-3無(wú)明顯活化;加入Z-DEVD-FMK并未使脂肪細(xì)胞存活增加。4、SD聯(lián)合Z-DEVD-FMK可減少SD對(duì)HDMECs的損傷,使Caspase-3和PARP活化減少,早期凋亡的比例減少。結(jié)論:SD可以通過(guò)依賴(lài)Caspase-3的細(xì)胞凋亡途徑損傷HDMECs,但其對(duì)細(xì)胞的物理性破壞作用仍較大。
【學(xué)位授予單位】:第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類(lèi)號(hào)】:R656
文章目錄
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
第一部分 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(HAMSCs)誘導(dǎo)成脂
一、實(shí)驗(yàn)材料與方法
二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第二部分 驗(yàn)證脫氧膽酸鈉(SD)對(duì)成熟脂肪細(xì)胞的溶解作用(驗(yàn)證藥物溶脂有效性)
一、材料與方法
二、結(jié)果
三、討論與分析
第三部分 研究脫氧膽酸鈉(SD)對(duì)人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HDMECs)及人成熟脂肪細(xì)胞的凋亡作用
一、實(shí)驗(yàn)材料
二、實(shí)驗(yàn)方法
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
四、討論與分析
第四部分 研究Z-DEVD-FMK在脫氧膽酸鈉(SD)對(duì)人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HDMEC)凋亡作用方面的影響
一、實(shí)驗(yàn)材料
二、實(shí)驗(yàn)方法
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
四、討論與分析
全文結(jié)論
綜述
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間成果
致謝
【參考文獻(xiàn)】
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本文編號(hào):
1727861
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