本文選題：Coronin　切入點(diǎn)：1a　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的:Coronin蛋白家族是在提純細(xì)胞骨架蛋白時(shí)被發(fā)現(xiàn),而Coronin 1a正是Coronin蛋白家族中研究最為廣泛的一種。在細(xì)胞內(nèi),許多涉及到肌動蛋白的細(xì)胞骨架運(yùn)動中Coronin 1a都作為一種輔助因子而存在。Coronin 1a還被發(fā)現(xiàn)與寄生蟲-宿主反應(yīng),神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)展及信號傳導(dǎo)等過程有關(guān)。而Coronin 1a在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用一直未被闡明。前期研究發(fā)現(xiàn)在不同乳腺癌細(xì)胞系中Coronin1a的表達(dá)有很大差異,提示Coronin 1a可能與不同分型乳腺癌的腫瘤特性相關(guān)。本研究主要探討Coronin 1a表達(dá)量與乳腺癌細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移能力的關(guān)系,并分析其發(fā)揮作用的可能途徑。初步闡明Coronin 1a在細(xì)胞周期、EMT過程中可能發(fā)揮的作用。研究內(nèi)容:分析Coronin 1a在不同乳腺癌細(xì)胞系內(nèi)的表達(dá)情況,篩選Coronin 1a低表達(dá)的細(xì)胞系;構(gòu)建Coronin 1a高表達(dá)載體;建立Coronin 1a高表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞系;通過體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)研究Coronin 1a表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移能力的影響并初步探討其潛在的分子機(jī)制。研究方法:本研究首先檢測了常見乳腺癌細(xì)胞系T47D、MDA-MB-231、MCF10A、MCF-7、SK-Br-3、293中Coronin 1a的表達(dá)情況,篩選出Coronin 1a低表達(dá)的細(xì)胞系。進(jìn)而通過逆轉(zhuǎn)錄、PCR等技術(shù)擴(kuò)增目的基因Coronin 1a,并通過與真核表達(dá)載體連接,構(gòu)建出Coronin 1a的真核表達(dá)載體。利用慢病毒感染向Coronin1a低表達(dá)的細(xì)胞系內(nèi)介導(dǎo)Coronin 1a過表達(dá)質(zhì)粒,即成功構(gòu)建Coronin 1a的高表達(dá)乳腺癌細(xì)胞株。應(yīng)用MTT,平板克隆,EDU,流式細(xì)胞術(shù)等方法探究Coronin1a與乳腺癌細(xì)胞增殖之間的關(guān)系;應(yīng)用Transwell,劃痕實(shí)驗(yàn),EMT相關(guān)指標(biāo)的Western Blot實(shí)驗(yàn)探究Coronin 1a與乳腺癌細(xì)胞運(yùn)動轉(zhuǎn)移能力之間的關(guān)系。最后通過向裸鼠皮下注射過表達(dá)Coronin 1a的細(xì)胞懸液,探究Coronin 1a對活體動物成瘤能力的影響。通過我們的研究,第一次探討了Coronin 1a在乳腺癌增殖轉(zhuǎn)移能力中所發(fā)揮的作用,并初步探討了其可能參與的調(diào)控途徑。研究結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn),Coronin 1a在MDA-MB-231細(xì)胞系和SK-Br-3細(xì)胞系中低表達(dá),在MCF-7細(xì)胞系、MCF-10A細(xì)胞系中高表達(dá),在T47D、293細(xì)胞系中則為陰性表達(dá)。通過構(gòu)建pc DNA3.0-HA-Coronin 1a質(zhì)粒并向MDA-MB-231,SK-Br-3細(xì)胞內(nèi)介導(dǎo)轉(zhuǎn)染,我們成功構(gòu)建出Coronin 1a的高表達(dá)細(xì)胞株。MTT,平板克隆,EDU實(shí)驗(yàn)均證實(shí)Coronin 1a的過表達(dá)明顯促進(jìn)了乳腺癌細(xì)胞的增殖。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)對細(xì)胞周期進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn),過表達(dá)Coronin 1a后,乳腺癌細(xì)胞中處于S期的比例明顯升高。提示Coronin 1a可能通過調(diào)控細(xì)胞周期影響乳腺癌細(xì)胞的增殖活性。Transwell,劃痕實(shí)驗(yàn)均證實(shí)Coronin 1a的過表達(dá)明顯增強(qiáng)了乳腺癌細(xì)胞的運(yùn)動轉(zhuǎn)移能力。EMT相關(guān)指標(biāo)的Western blot實(shí)驗(yàn)表明,過表達(dá)Coronin 1a是E-cadherin表達(dá)下降,N-cadherin表達(dá)升高,Vimentin與Snail表達(dá)也相應(yīng)升高,提示Coronin 1a對乳腺癌細(xì)胞運(yùn)動轉(zhuǎn)移能力的影響可能與其促進(jìn)了EMT轉(zhuǎn)化過程有關(guān)。裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)證實(shí),過表達(dá)Coronin 1a后乳腺癌細(xì)胞具有更高的成瘤能力,且Ki-67指標(biāo)明顯高于對照組。研究結(jié)論:Coronin 1a與乳腺癌的增殖轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān),其可能通過影響細(xì)胞周期調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的增殖,可能通過促進(jìn)EMT過程調(diào)控乳腺癌細(xì)胞運(yùn)動轉(zhuǎn)移能力。
[Abstract]:Objective: To study the Coronin protein family was found in protein purification of cell skeleton, while Coronin 1a is the Coronin protein family of one of the most extensive. In cells, many involving actin cytoskeleton movements in Coronin 1A as a cofactor of.Coronin 1A has also been found to react with parasites the host, nervous system development and signal transduction and so on. Coronin 1a and its role in tumorigenesis has not been elucidated. Previous study found that the expression of Coronin1a in different breast cancer cell lines are very different, suggesting that Coronin 1A may be related to tumor characteristics in different subtypes of breast cancer. The relationship between the main to investigate the expression of 1A and Coronin in breast cancer cell proliferation and metastasis ability, and to analyze the possible ways to play role. Initially stated Coronin 1a in the cell cycle, may be in the process of EMT Role. Contents: to analyze the expression of Coronin 1a in breast cancer cell lines in the selection of Coronin 1A low expression cell line; construction of Coronin 1A high expression vector; establish breast cancer cell lines with high expression of Coronin 1A; in vivo and in vitro experimental study of Coronin 1A expression on the proliferation and metastasis of breast cancer cells and to explore its potential molecular mechanism. Methods: This study first examined the T47D common breast cancer cell line MDA-MB-231, MCF10A, MCF-7, Coronin 1A expression of SK-Br-3293 in the screening of low expression of Coronin 1A cell line. Then through reverse transcription amplification of PCR gene of Coronin 1A technology. And with the eukaryotic expression vector connection, construct the eukaryotic expression vector Coronin 1a. The infection to the low expression of Coronin1a cell line mediated by Coronin 1A using lentiviral expression plasmid, i.e. The successful construction of Coronin high expression of 1A in breast cancer cell lines. The application of MTT, clone, EDU, flow cytometry and other methods to explore the relationship between Coronin1a and breast cancer cell proliferation; application of Transwell, scratch test, the relationship between Western Blot EMT experimental indexes related to 1a and Coronin on breast cancer cell motility and metastasis. Finally, through to the over expression of Coronin 1a in nude mice subcutaneous injection of cell suspension, explore the impact of Coronin 1A on tumorigenicity in vivo animal. Through our research, first discusses the Coronin 1A transfer ability to play role in the proliferation of breast cancer, and to explore the regulatory pathways might be involved in the study. Results: we found that Coronin 1A low in MDA-MB-231 cells and SK-Br-3 cells expression in MCF-7 cells, higher expression of MCF-10A cells in T47D 293 cell line was negative expression through. Construction of PC DNA3.0-HA-Coronin plasmid and 1a to MDA-MB-231, SK-Br-3 cell mediated transfection, we successfully constructed Coronin 1A high expression cell line.MTT clone, EDU experiments have confirmed that overexpression significantly promoted the proliferation of breast cancer cells Coronin 1a. The cell cycle were detected by flow cytometry, too the expression of Coronin after 1a in breast cancer cells in S phase ratio increased significantly. Suggesting that Coronin 1A may be through the regulation of cell cycle proliferation of.Transwell breast cancer cells, scratch experiments confirmed overexpression significantly enhance the breast cancer cell metastasis Western blot experimental index movement ability of.EMT showed that Coronin 1a, expression Coronin 1a is the decreased expression of E-cadherin, increase the expression of N-cadherin, Vimentin and Snail expression increased, suggesting that Coronin 1A metastasis of breast cancer cell movement The effect may be related to promoting the EMT conversion process. The tumorigenicity experiments confirmed that overexpression of Coronin 1A breast cancer cells with tumorigenic ability higher, and the Ki-67 index was significantly higher than the control group. Conclusion: Coronin 1a and the proliferation of breast cancer metastasis, it may affect cell cycle regulation of breast the proliferation of cancer cells, could promote the EMT movement process of regulation of breast cancer cell metastasis ability.

【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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