本文選題：Coronin　切入點：1a　出處：《天津醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的:Coronin蛋白家族是在提純細胞骨架蛋白時被發(fā)現(xiàn),而Coronin 1a正是Coronin蛋白家族中研究最為廣泛的一種。在細胞內(nèi),許多涉及到肌動蛋白的細胞骨架運動中Coronin 1a都作為一種輔助因子而存在。Coronin 1a還被發(fā)現(xiàn)與寄生蟲-宿主反應,神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)展及信號傳導等過程有關。而Coronin 1a在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用一直未被闡明。前期研究發(fā)現(xiàn)在不同乳腺癌細胞系中Coronin1a的表達有很大差異,提示Coronin 1a可能與不同分型乳腺癌的腫瘤特性相關。本研究主要探討Coronin 1a表達量與乳腺癌細胞增殖轉移能力的關系,并分析其發(fā)揮作用的可能途徑。初步闡明Coronin 1a在細胞周期、EMT過程中可能發(fā)揮的作用。研究內(nèi)容:分析Coronin 1a在不同乳腺癌細胞系內(nèi)的表達情況,篩選Coronin 1a低表達的細胞系;構建Coronin 1a高表達載體;建立Coronin 1a高表達的乳腺癌細胞系;通過體內(nèi)和體外實驗研究Coronin 1a表達對乳腺癌細胞增殖和轉移能力的影響并初步探討其潛在的分子機制。研究方法:本研究首先檢測了常見乳腺癌細胞系T47D、MDA-MB-231、MCF10A、MCF-7、SK-Br-3、293中Coronin 1a的表達情況,篩選出Coronin 1a低表達的細胞系。進而通過逆轉錄、PCR等技術擴增目的基因Coronin 1a,并通過與真核表達載體連接,構建出Coronin 1a的真核表達載體。利用慢病毒感染向Coronin1a低表達的細胞系內(nèi)介導Coronin 1a過表達質(zhì)粒,即成功構建Coronin 1a的高表達乳腺癌細胞株。應用MTT,平板克隆,EDU,流式細胞術等方法探究Coronin1a與乳腺癌細胞增殖之間的關系;應用Transwell,劃痕實驗,EMT相關指標的Western Blot實驗探究Coronin 1a與乳腺癌細胞運動轉移能力之間的關系。最后通過向裸鼠皮下注射過表達Coronin 1a的細胞懸液,探究Coronin 1a對活體動物成瘤能力的影響。通過我們的研究,第一次探討了Coronin 1a在乳腺癌增殖轉移能力中所發(fā)揮的作用,并初步探討了其可能參與的調(diào)控途徑。研究結果:我們發(fā)現(xiàn),Coronin 1a在MDA-MB-231細胞系和SK-Br-3細胞系中低表達,在MCF-7細胞系、MCF-10A細胞系中高表達,在T47D、293細胞系中則為陰性表達。通過構建pc DNA3.0-HA-Coronin 1a質(zhì)粒并向MDA-MB-231,SK-Br-3細胞內(nèi)介導轉染,我們成功構建出Coronin 1a的高表達細胞株。MTT,平板克隆,EDU實驗均證實Coronin 1a的過表達明顯促進了乳腺癌細胞的增殖。應用流式細胞術對細胞周期進行檢測發(fā)現(xiàn),過表達Coronin 1a后,乳腺癌細胞中處于S期的比例明顯升高。提示Coronin 1a可能通過調(diào)控細胞周期影響乳腺癌細胞的增殖活性。Transwell,劃痕實驗均證實Coronin 1a的過表達明顯增強了乳腺癌細胞的運動轉移能力。EMT相關指標的Western blot實驗表明,過表達Coronin 1a是E-cadherin表達下降,N-cadherin表達升高,Vimentin與Snail表達也相應升高,提示Coronin 1a對乳腺癌細胞運動轉移能力的影響可能與其促進了EMT轉化過程有關。裸鼠成瘤實驗證實,過表達Coronin 1a后乳腺癌細胞具有更高的成瘤能力,且Ki-67指標明顯高于對照組。研究結論:Coronin 1a與乳腺癌的增殖轉移能力密切相關,其可能通過影響細胞周期調(diào)控乳腺癌細胞的增殖,可能通過促進EMT過程調(diào)控乳腺癌細胞運動轉移能力。
[Abstract]:Objective: To study the Coronin protein family was found in protein purification of cell skeleton, while Coronin 1a is the Coronin protein family of one of the most extensive. In cells, many involving actin cytoskeleton movements in Coronin 1A as a cofactor of.Coronin 1A has also been found to react with parasites the host, nervous system development and signal transduction and so on. Coronin 1a and its role in tumorigenesis has not been elucidated. Previous study found that the expression of Coronin1a in different breast cancer cell lines are very different, suggesting that Coronin 1A may be related to tumor characteristics in different subtypes of breast cancer. The relationship between the main to investigate the expression of 1A and Coronin in breast cancer cell proliferation and metastasis ability, and to analyze the possible ways to play role. Initially stated Coronin 1a in the cell cycle, may be in the process of EMT Role. Contents: to analyze the expression of Coronin 1a in breast cancer cell lines in the selection of Coronin 1A low expression cell line; construction of Coronin 1A high expression vector; establish breast cancer cell lines with high expression of Coronin 1A; in vivo and in vitro experimental study of Coronin 1A expression on the proliferation and metastasis of breast cancer cells and to explore its potential molecular mechanism. Methods: This study first examined the T47D common breast cancer cell line MDA-MB-231, MCF10A, MCF-7, Coronin 1A expression of SK-Br-3293 in the screening of low expression of Coronin 1A cell line. Then through reverse transcription amplification of PCR gene of Coronin 1A technology. And with the eukaryotic expression vector connection, construct the eukaryotic expression vector Coronin 1a. The infection to the low expression of Coronin1a cell line mediated by Coronin 1A using lentiviral expression plasmid, i.e. The successful construction of Coronin high expression of 1A in breast cancer cell lines. The application of MTT, clone, EDU, flow cytometry and other methods to explore the relationship between Coronin1a and breast cancer cell proliferation; application of Transwell, scratch test, the relationship between Western Blot EMT experimental indexes related to 1a and Coronin on breast cancer cell motility and metastasis. Finally, through to the over expression of Coronin 1a in nude mice subcutaneous injection of cell suspension, explore the impact of Coronin 1A on tumorigenicity in vivo animal. Through our research, first discusses the Coronin 1A transfer ability to play role in the proliferation of breast cancer, and to explore the regulatory pathways might be involved in the study. Results: we found that Coronin 1A low in MDA-MB-231 cells and SK-Br-3 cells expression in MCF-7 cells, higher expression of MCF-10A cells in T47D 293 cell line was negative expression through. Construction of PC DNA3.0-HA-Coronin plasmid and 1a to MDA-MB-231, SK-Br-3 cell mediated transfection, we successfully constructed Coronin 1A high expression cell line.MTT clone, EDU experiments have confirmed that overexpression significantly promoted the proliferation of breast cancer cells Coronin 1a. The cell cycle were detected by flow cytometry, too the expression of Coronin after 1a in breast cancer cells in S phase ratio increased significantly. Suggesting that Coronin 1A may be through the regulation of cell cycle proliferation of.Transwell breast cancer cells, scratch experiments confirmed overexpression significantly enhance the breast cancer cell metastasis Western blot experimental index movement ability of.EMT showed that Coronin 1a, expression Coronin 1a is the decreased expression of E-cadherin, increase the expression of N-cadherin, Vimentin and Snail expression increased, suggesting that Coronin 1A metastasis of breast cancer cell movement The effect may be related to promoting the EMT conversion process. The tumorigenicity experiments confirmed that overexpression of Coronin 1A breast cancer cells with tumorigenic ability higher, and the Ki-67 index was significantly higher than the control group. Conclusion: Coronin 1a and the proliferation of breast cancer metastasis, it may affect cell cycle regulation of breast the proliferation of cancer cells, could promote the EMT movement process of regulation of breast cancer cell metastasis ability.

【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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本文編號：1677924