本文選題：富血小板血漿　切入點：兔坐骨神經(jīng)斷裂　出處：《西南醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:通過對周圍神經(jīng)斷裂動物模型的建立,用制備的自體富血小板血漿(platelet-rich plasma,PRP)在不同時間點種植于損傷的周圍神經(jīng)局部,研究PRP對周圍神經(jīng)斷裂縫合后局部微環(huán)境變化的影響。分析周圍神經(jīng)再生修復與局部微環(huán)境參數(shù)VEG、IGF-1等是否存在量變關系,觀察不同時段分次局部給予PRP對周圍神經(jīng)的再生修復是否會產(chǎn)生持續(xù)的誘導、促進作用,并用宏觀、微觀及生化等指標驗證PRP對治療周圍神經(jīng)損傷的可行性,分析其可能存在的原理及機制。為周圍神經(jīng)損傷尋找一種合理、經(jīng)濟、有效、操作便利的治療方法。方法:1.選取同產(chǎn)地、月齡與體重相當?shù)男挛魈m大白兔48只,雌雄不限。隨機分成四組,A組(假手術組)、B組(NS組)、C組(S-PRP組)、D組(T-PRP組)。2.動物模型建立:2.1先C、D兩組每只實驗大白兔用帶抗凝劑的注射器抽取耳緣靜脈血,用Landesberg兩次離心法制備PRP,進行血小板檢測。2.2全部實驗動物:無菌操作,實驗兔解剖坐骨神經(jīng),A組只做暴露,B、C、D組于梨狀肌下緣約1.5cm完全切斷,再用8-0顯微縫線均勻縫合4針。2.3 B組在神經(jīng)縫合斷端及周圍注入生理鹽水(NS)0.4ml,C、D組在神經(jīng)縫合斷端及周圍注入PRP 0.4ml(C、D組于手術前同上述方法制備PRP備用),縫合術口。術后大白兔非實驗側臀部肌注抗生素預防感染處理3天,限制部分活動,相同生存環(huán)境及飼養(yǎng)方法。3.分別術后每周相同時間,在超聲引導下,B組在坐骨神經(jīng)縫合口周緣注射0.4ml NS,D組在坐骨神經(jīng)縫合口周緣注射0.4ml PRP(其中D組均術前抽取全血,制備PRP待用)。4.觀察指標:4.1術后12周,同造模方法解剖所有動物坐骨神經(jīng),進行電生理檢測。4.2電生理測量完畢,切取坐骨神經(jīng)斷裂縫合處神經(jīng)段,縱行剖開,其中1/2做標本固定、包埋,制作切片,光鏡觀察神經(jīng)軸突再生情況;并做免疫組化染色,觀察S-100蛋白表達情況,記錄施旺細胞活性。4.3另外1/2神經(jīng)段做Western Blot記錄VEGF、IGF-1表達結果。4.4手術分離腓腸肌,切取約0.1g肌肉組織進行ACh E含量檢測。5.SPSS 24.0統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。6.實驗標準參考國際或國內權威機構的相關文書。結果:1.靜脈全血中血小板平均濃度為304.87×109/L,PRP中平均血小板濃度為1336.42×109/L,PRP中血小板計數(shù)為全血中的4.38倍。2.術后12周坐骨神經(jīng)動作電位(CNAP)在T-PRP組恢復優(yōu)于NS組和S-PRP組,且有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.在術后12周神經(jīng)縫合處的細胞因子VEGF和IGF-1在各組均為陽性,統(tǒng)計結果顯示VEGF和IGF-1積分光密度值在T-PRP組明顯高于其他三組,且有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.術后12周,假手術組及T-PRP組坐骨神經(jīng)斷裂側腓腸肌中ACh E含量明顯高于NS組和S-PRP組,有非常顯著性差異(P0.01);NS組與S-PRP組無顯著性差異(P0.05);T-PRP組明顯高于NS組,組間具有顯著性差異(P0.01)。5.術后12周坐骨神經(jīng)組織中,假手術組、NS組和S-PRP組神經(jīng)組織內S-100蛋白含量明顯低于T-PRP組,有非常顯著性差異(P0.01);NS組與S-PRP組無顯著性差異(P0.05)。結論:1.在兔坐骨神經(jīng)斷裂局部時間點多次應用PRP可增加坐骨神經(jīng)局部微環(huán)境參數(shù)VEGF、IGF-1的含量,以及促進施旺細胞的分裂增殖。2.多頻次神經(jīng)斷裂區(qū)注射PRP,能促進膽堿能神經(jīng)遞質ACh的合成和釋放,可增強周圍神經(jīng)損傷后運動終板的修復,有利于周圍神經(jīng)的再生修復及功能恢復。
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【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R651.3

【參考文獻】

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本文編號：1616258