本文關鍵詞： α7煙堿型乙酰膽堿受體 RIC-3 炎癥反應 非去極化肌肉松弛藥　出處：《上海交通大學》2015年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：已知機體存在膽堿能抗炎通路(CAP),即迷走神經(jīng)釋放乙酰膽堿與免疫細胞膜上的α7乙酰膽堿受體(α7-nAChR)結合,可抑制炎癥因子的釋放,減輕炎癥反應。已有證據(jù)表明,非去極化肌肉松弛藥能與α7-nAChR結合并抑制其功能。因此我們推測非去極化肌肉松弛藥可與免疫細胞膜上的α7-nAChR結合,加重炎癥反應。目的從以下方面證實非去極化肌肉松弛藥可加重炎癥反應,并探討其機制：探討不同濃度尼古丁對表達在HEK293細胞上的α7煙堿型乙酰膽堿受體的刺激作用,觀察不同濃度的非去極化肌肉松弛藥對表達在HEK293細胞上的α7煙堿型乙酰膽堿受體的阻斷作用。觀察非去極化肌肉松弛藥逆轉尼古丁抑制LPS刺激體外培養(yǎng)人巨噬細胞分泌TNF-α的作用。研究非去極化肌肉松弛藥升高內(nèi)毒素血癥大鼠全身、肝臟和脾臟組織TNF-α含量。方法構建α7煙堿型乙酰膽堿受體和RIC-3質粒,通過RT-PCR、western blot和免疫熒光技術獲得HEK293細胞表達α7煙堿型乙酰膽堿受體的表達結果。采用鈣成像技術觀察不同濃度尼古丁對構建表達在HEK293細胞上的α7煙堿型乙酰膽堿受體的刺激強度。采用α7煙堿型乙酰膽堿受體和RIC-3共轉染HEK293細胞以獲得在HEK293細胞上表達的功能性α7煙堿型乙酰膽堿受體,采用鈣成像技術研究非去極化肌肉松弛藥對α7煙堿型乙酰膽堿受體的抑制作用。體外培育人巨噬細胞,觀察甲基牛扁亭堿(MLA)和不同類型非去極化肌肉松弛藥對尼古丁抑制脂多糖(LPS)誘導刺激巨噬細胞分泌腫瘤壞死因子α (TNF-α)和白介素10(IL-10)的作用。采用ELISA方法來檢測細胞培養(yǎng)液中TNF-α和IL-10水平。構建內(nèi)毒素血癥的大鼠模型,觀察不同類型非去極化肌肉松弛藥對大鼠血清、肝臟和脾臟中TNF-α水平的影響。采用ELISA法檢測大鼠全身、肝臟和脾臟TNF-α含量。結果免疫熒光顯示HEK293細胞上可以表達α7-nAChR, RT-PCR和western blot分別從mRNA和蛋白水平證實RIC-3和α7-nAChR共轉染HEK293細胞。鈣成像證明單純α7-nAChR轉染HEK293細胞并不能表達功能性α7-nAChR通過鈣成像表明RIC-3可以促進HEK293細胞上功能性α7-nAChR的表達。通過鈣成像觀察到非去極化肌肉松弛藥濃度范圍在lnM-100nM,仍可以完全阻斷30μM尼古丁對表達在HEK293細胞上的功能性α7-nAChR激動作用。免疫熒光顯示人巨噬細胞上天然表達α7-nAChR。ELISA法檢測證實采用α7-nAChR拮抗劑甲基牛扁亭堿(MLA)、非去極化肌肉松弛藥均可以逆轉1μM尼古丁對LPS刺激人巨噬細胞的TNF-α分泌的抑制作用(P0.05),但IL-10水平并未受到影響(P0.05)。在大鼠內(nèi)毒素血癥的動物模型上,采用不同類型非去極化肌肉松弛藥持續(xù)靜脈輸注的大鼠血清、肝臟和脾臟組織中TNF-α含量較生理鹽水對照組明顯升高,有統(tǒng)計學差異(P0.05)。結論RIC-3能促進在HEK293細胞上表達功能性α7煙堿型乙酰膽堿受體,功能性α7煙堿型乙酰膽堿受體可表達在HEK293細胞上。非去極化肌肉松弛藥能抑制尼古丁對表達在HEK293細胞上的功能性α7-nAChR的激動作用。非去極化肌肉松弛藥能逆轉尼古丁對LPS刺激人巨噬細胞的TNF-α分泌的抑制作用。但IL-10水平并未受到影響。靜脈持續(xù)輸注非去極化肌肉松弛藥能加重內(nèi)毒素血癥大鼠炎癥反應。綜上所述,非去極化肌肉松弛藥通過阻斷α7煙堿型乙酰膽堿受體加重機體炎癥反應。
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【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R614

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