本文關(guān)鍵詞： 創(chuàng)傷性腦損傷 認知功能 COG1410 Aβ 炎性反應(yīng)　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：創(chuàng)傷性腦損傷(Traumatic brain injury,TBI)會導(dǎo)致神經(jīng)退行性疾病,同時會表現(xiàn)與阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)相似的認知功能損害。有確鑿的證據(jù)表明,TBI是AD發(fā)病的重要危險因素,同時β淀粉樣蛋白(β-Amyloid,Aβ)產(chǎn)生和降解失平衡在形成AD的過程中扮演著重要角色。在分析觀察TBI后早期死亡的病人與遠期幸存的病人,都會發(fā)現(xiàn)Aβ這種物質(zhì)廣泛沉積,TBI發(fā)生后會誘導(dǎo)上調(diào)此物質(zhì)。通過研究TBI大鼠Aβ含量的表達,我們發(fā)現(xiàn)Aβ在顱腦創(chuàng)傷后12-24小時能達到高峰。同時這種Aβ在創(chuàng)傷中會產(chǎn)生非常強的損傷級聯(lián)反應(yīng),但是多臨床前研究發(fā)現(xiàn)Aβ量減少后,認知功能都會得到很好的恢復(fù),因此,增強Aβ清除的方法和策略可能會使TBI的治療受益匪淺。COG1410,是一種源于apo E(Apolipoprotein E,Apo E)受體結(jié)合區(qū)域的小段肽,其自身具有非常強大的抗炎能力,并且能夠提高TBI后病人的感覺功能和軀體運動功能,改善認知功能障礙。為了能夠進一步探索COG1410對于TBI后認知功能障礙的的恢復(fù)情況,本研究評估,TBI后給予COG1410觀察其與Aβ代謝與表達的關(guān)系,結(jié)果顯示當(dāng)TBI后給予COG1410,Aβ清除程度得到了極大的增強,同時TBI自身產(chǎn)生及繼發(fā)生成的Aβ所誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥因子IL-1β與TNF-α的表達也能被COG1410很好的抑制。通過這項研究我們可以推測TBI所誘導(dǎo)的Aβ聚集能夠被COG1410很好的清除。目的:本實驗通過應(yīng)用COG1410減少TBI所誘導(dǎo)的Aβ聚集,同時COG1410能抑制大鼠海馬區(qū)TBI所誘導(dǎo)的的炎癥因子IL-1β與TNF-α的表達。最終為TBI早期認知功能的提升,提供一個新的臨床治療策略和方法。方法:本研究采用SD大鼠160只并自由分成4組:sham組①Sham組(n=40),②TBI組(n=40)③COG1410(n=40)④COG1410+甘氨酸抑制劑組(n=40)。并且每組都被分成4個時間點,分別為TBI后6小時,12小時,24小時,48小時。我們所建立的TBI模型采用的Marmarou法。我們觀察TBI后海馬區(qū)形態(tài)學(xué)變化通過HE染色。通過共聚焦顯微鏡熒光的方法觀察Aβ的定位情況。通過Western-blot法檢測Aβ,IL-β和TNF-α蛋白的表達。Morris水迷宮在TBI后7-11天來檢測認知和記憶能力。實驗采用Gel-Doc軟件分析系統(tǒng)來分析實驗結(jié)果。采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差方法來分析實驗數(shù)據(jù),統(tǒng)計分析所使用軟件是SPSS18.0。兩兩比采用q檢驗,組與組之間的比較使用單因素方差分析,P0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1通過鏡下觀察HE染色:海馬區(qū)細胞,Sham組,排列整齊,結(jié)構(gòu)完整,沒有明顯的病理改變。TBI組,海馬區(qū)腦組織不同程度的疏松水腫。細胞及周圍微血管間隙在創(chuàng)傷后明顯增寬。海馬區(qū)神經(jīng)元無論從架構(gòu)上還是數(shù)量上都遭受嚴(yán)重的破壞,核固縮并且核仁丟失。COG1410組,海馬區(qū)組織水腫明顯減輕,細胞及周圍微血管間隙變小。神經(jīng)元結(jié)構(gòu)保持完整,數(shù)量也有明顯的增多。而Th組觀察情況與TBI組類似。2檢測認知學(xué)習(xí)和記憶功能:TBI組與Sham組相比較,其在所有的時間點穿越平臺次數(shù)及平均逃避潛伏期都明顯的升高(P0.05)。COG1410組與TBI相比時,COG1410組有明顯的運動和認知學(xué)習(xí)能力的提升,平均逃避潛伏期在8-10天時候相比TBI組有明顯的縮短(P0.05)。而Th組與COG1410組比較的時候發(fā)現(xiàn),其逃避潛伏期仍然比COG1410組延長很多,并且具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3 TNF-α使用Western blot檢測結(jié)果:Sham組表達TNF-α不明顯,并且在所有時間點上面沒有明顯改變,而相對比Sham組,TBI組從傷后6小時TNF-α就開始表達(P0.05),在12小時達到了一個峰值(P0.05),并且這種高表達一直持續(xù)到48小時還沒有衰減(P0.05)。當(dāng)COG1410組與TBI組比較時候,TNF-α表達量明顯低于TBI組,并且這種降低在各個時間點都有很好的表現(xiàn)(P0.05)4 IL-1β使用Western blot檢測結(jié)果:IL-1β在sham組各個時間點都表達量非常低,并且各個時間點沒有明顯的變化。但是與TBI組比較時明顯發(fā)現(xiàn)TBI組IL-1β從6小時開始就有個明顯的提升(P0.05),并且在12小時達到了一個高峰(P0.05)。當(dāng)COG1410組與TBI組比較時候發(fā)現(xiàn),IL-1β的表達明顯低于TBI組(P0.05),并且這種低聚集實驗全部時間點未有改變。5免疫熒光發(fā)雙標(biāo)海馬區(qū)Aβ與Neu N共聚定位情況,神經(jīng)元應(yīng)用FITC標(biāo)記神經(jīng)元標(biāo)志物Neu N的綠色熒光,Aβ應(yīng)用TRITC標(biāo)記的紅色熒光,其在TBI后12小時共聚達到高峰。6 Aβ使用Western blot檢測結(jié)果,在Sham組,我們不能發(fā)現(xiàn)有Aβ出現(xiàn)在各個時間。相比較于Sham組Aβ的變化,TBI組Aβ從傷后6小時開始出現(xiàn),并且這種出現(xiàn)聚集持續(xù)升高直到12小時到達一個最高峰(P0.05)。并且這種Aβ的聚集自己本身未曾有削減的趨勢。并且在傷后24小時與Sham組相比其依然保持較高的含量(P0.05)。當(dāng)觀察COG1410組的改變時候發(fā)現(xiàn)相比于TBI組,Aβ的表達從6-24h都是低含量的狀態(tài)(P0.05)而反觀Th組,即使有COG1410存在,但是疊加上甘氨酸這種抑制劑后,Aβ的表達不再下降,并且在所有時間點都比COG1410組高含量存在(P0.05)。結(jié)論:我們根據(jù)TBI后會誘發(fā)Aβ表達增多,來給予COG1410治療,這種治療能夠在TBI早期12-24小時Aβ生成高峰期內(nèi),對Aβ的聚集起到一個很好的代謝抑制作用。同時它強大的抗炎作用亦能減少TBI自身產(chǎn)生及繼發(fā)生成的Aβ所誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥因子IL-1β與TNF-α的表達。當(dāng)這些生物性狀改變時會伴隨著認知功能極大的改善和提升,同時也極大減輕了對大腦的損傷。以上實驗結(jié)果表明COG1410是創(chuàng)傷性腦損傷中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)功能障礙模型的保護劑。
[Abstract]:Conclusion : A 尾 - amyloid protein ( COG1410 ) is an important risk factor in the pathogenesis of AD . The results showed that the expression of IL - 1尾 in the hippocampus was significantly lower than that in group COG1410 ( P0.05 ) . Conclusion : Our results suggest that COG1410 is a protective agent for traumatic brain injury central nervous system ( CNS ) dysfunction model .

【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R651.15

【參考文獻】

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本文編號：1504953