本文關(guān)鍵詞： β-catenin 脊髓源性神經(jīng)干細(xì)胞 增殖 分化　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的從CD1胎鼠脊髓中提取神經(jīng)干細(xì)胞(Neural stem cells,NSCs)并對細(xì)胞進(jìn)行鑒定,探討β-catenin基因?qū)顾柙葱陨窠?jīng)干細(xì)胞的作用,為進(jìn)一步體內(nèi)試驗提供理論基礎(chǔ)。方法將E14的CD1孕鼠麻醉后取出胎鼠,無菌條件下分離胎鼠脊髓組織,單細(xì)胞克隆技術(shù)及干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)對分離的細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng),細(xì)胞免疫熒光技術(shù)對細(xì)胞進(jìn)行鑒定;實驗分為三組:Blank組(無外加條件培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞),GFP組(感染Ad-GFP腺病毒的神經(jīng)干細(xì)胞),β-catenin組(感染Ad-β-catenin腺病毒的神經(jīng)干細(xì)胞),感染病毒時間均為5d。光學(xué)顯微鏡觀察三組細(xì)胞的形態(tài)學(xué),熒光顯微鏡觀察病毒的感染效率,流式細(xì)胞技術(shù)對感染效率進(jìn)行驗證,Western blot檢測三組細(xì)胞β-catenin蛋白的表達(dá)情況;CCK8檢測和結(jié)晶紫染色法檢測三組細(xì)胞的數(shù)量,臺盼藍(lán)染色法檢測β-catenin作用于NSCs后細(xì)胞的存活率;RT-PCR檢測三組細(xì)胞的神經(jīng)元特異烯醇化酶(NSE)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的m RNA表達(dá),免疫熒光檢測神經(jīng)細(xì)胞核(Neu N)、GFAP的表達(dá)及定位;Western blot檢測Neu N、GFAP的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果胎鼠脊髓組織中分離出的細(xì)胞具有極強(qiáng)的克隆能力,可以形成細(xì)胞團(tuán),機(jī)械分離后細(xì)胞貼壁,呈不規(guī)則球形,免疫熒光結(jié)果提示早期分離的大部分細(xì)胞Nestin抗原呈陽性;感染Ad-β-catenin腺病毒5d后,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化,其突觸增長,細(xì)胞變小,突觸之間連接增多,細(xì)胞折光性增強(qiáng);熒光顯微鏡觀察及流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)果顯示感染病毒3d時細(xì)胞的病毒感染率在50%左右,5d時感染率在80%左右,Western blot結(jié)果證實感染5d時β-catenin組的β-catenin蛋白表達(dá)明顯高于其他兩組(P0.05);CCK8及結(jié)晶紫染色結(jié)果示β-catenin組的細(xì)胞數(shù)量明顯高于Blank組及GFP組(P0.05),臺盼藍(lán)染色檢測發(fā)現(xiàn)β-catenin組的細(xì)胞存活率也明顯高于其他兩組(P0.05);PCR結(jié)果顯性神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志物NSE的m RNA在β-catenin組顯著高于Blank組及GFP組,而膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP的m RNA表達(dá)均低于其他兩組(P0.05);免疫熒光結(jié)果顯示β-catenin組Neu N蛋白的表達(dá)顯著高于其余兩組(P0.05),主要定位于細(xì)胞核中,GFAP的表達(dá)相對較低(P0.05);Western blot結(jié)果顯示β-catenin組的Neu N蛋白表達(dá)顯著高于Blank組及GFP組,而GFAP蛋白表達(dá)低于其他兩組(P0.05)。結(jié)論胎鼠脊髓組織中分離獲得的細(xì)胞可克隆成神經(jīng)球,是具有自我復(fù)制及多向分化能力的脊髓源性NSCs;腺病毒可作為載體將β-catenin轉(zhuǎn)入NSCs中,感染效率高;β-catenin可促進(jìn)脊髓源性NSCs的增殖,并且提高細(xì)胞的存活率,使其向神經(jīng)元分化。
[Abstract]:Objective To study the effect of 尾 - catenin on the expression of 尾 - catenin in rat spinal cord . The expression of 尾 - catenin was detected by Western blot . The results showed that the expression of 尾 - catenin was significantly higher than that in the other two groups ( P0.05 ) . The results showed that the expression of Neu N protein in rat spinal cord tissue was significantly higher than that in the other two groups ( P0.05 ) . The results showed that the expression of Neu N protein was significantly higher than that in the other two groups ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R651.2

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10 李媛,吳人亮,王曦,陳文書;Effects of Retinoic Acid on the β-catenin/TCF Pathway in Cultured Porcine Tracheobronchial Epithelial Cells[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)英德文版);2004年05期

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