本文關(guān)鍵詞：GDF-5聯(lián)合淫羊藿素誘導(dǎo)BMSCs向類軟骨細(xì)胞分化及機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:研究生長(zhǎng)分化因子5(growth differentiation factor-5,GDF-5)聯(lián)合淫羊藿素(Icaritin,ICT)誘導(dǎo)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向類軟骨細(xì)胞分化,并進(jìn)一步研究Wnt/β-catenin信號(hào)通路在其中的作用。方法:(1)全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)SD大鼠BMSCs,倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),CCK-8法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。(2)取培養(yǎng)至第3代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的BMSCs進(jìn)行實(shí)驗(yàn),根據(jù)誘導(dǎo)條件不同分為6組:BMSCs組、BMSCs+ICT組、BMSCs+GDF-5組、BMSCs+GDF-5+ICT組、BMSCs+GDF-5+ICT+SB216763組、BMSCs+GDF-5+ICT+XAV-939組,連續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)14d后倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。(3)誘導(dǎo)培養(yǎng)14d后,Alcian Blue染色檢測(cè)細(xì)胞的蛋白聚糖改變。(4)誘導(dǎo)培養(yǎng)14d后,采用RT-PCR檢測(cè)成軟骨分化標(biāo)記基因Aggrecan、COL2、Sox9的表達(dá)情況,Western Blot檢測(cè)COL2蛋白表達(dá)水平。(5)誘導(dǎo)培養(yǎng)14d后,RT-PCR檢測(cè)Wnt/β-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵組件Dvl1、GSK-3β、β-catenin m RNA表達(dá)水平,采用Western Blot檢測(cè)β-catenin蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:(1)大鼠BMSCs傳至P3代,細(xì)胞形態(tài)基本均一,長(zhǎng)梭形或扁平狀,呈典型密集旋渦狀、魚群樣排列貼壁生長(zhǎng)。(2)BMSCs組連續(xù)培養(yǎng)14d后,細(xì)胞排列緊密,并沒有明顯的細(xì)胞藍(lán)染。BMSCs+ICT組,BMSCs+GDF-5組,BMSCs+GDF-5+ICT組,BMSCs+GDF-5+ICT+SB216763組細(xì)胞逐漸縮小,由長(zhǎng)梭形逐漸向類圓形轉(zhuǎn)變,并且蛋白聚糖藍(lán)染逐漸加深。但GDF-5+ICT+XAV-939組相對(duì)GDF-5+ICT組,細(xì)胞形態(tài)改變較少,且染色相對(duì)較淺。(3)軟骨細(xì)胞標(biāo)志檢測(cè)結(jié)果:RT-PCR及Western Blot檢測(cè)結(jié)果分析表明,與BMSCs組相比,BMSCs+GDF-5組和BMSCs+ICT+GDF-5組軟骨標(biāo)記基因Aggrecan、Col2、Sox9表達(dá)量及Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)量均明顯增加(P0.05)。與BMSCs+GDF-5組比較,BMSCs+Icaritin+GDF-5聯(lián)合組Aggrecan、Col2、Sox9基因表達(dá)量及Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)量也增加(P0.05)。(4)Wnt/β-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵組件檢測(cè)結(jié)果:與BMSCs相比,BMSCs+GDF-5組和BMSCs+ICT+GDF-5組Dvl1基因、β-catenin基因及蛋白表達(dá)明顯增加,相應(yīng)的GSK-3βm RNA表達(dá)量下降(P0.05);與BMSCs+GDF-5組相比,BMSCs+GDF-5+ICT組Dvl1、β-catenin m RNA表達(dá)水平及β-catenin蛋白水平均增加,相應(yīng)的GSK-3βm RNA表達(dá)量下降(P0.05);與BMSCs+ICT+GDF-5組相比,BMSCs+ICT+GDF-5+SB216763組Aggrecan、Sox9和β-catenin m RNA表達(dá)量明顯增加,GSK-3βm RNA表達(dá)量下降,Ⅱ型膠原蛋白及β-catenin蛋白表達(dá)也增加(P0.05),相反BMSCs+ICT+GDF-5+XAV-939組Aggrecan、Col2、Sox9和β-catenin m RNA表達(dá)量明顯減少,Ⅱ型膠原蛋白及β-catenin蛋白表達(dá)也減少(P0.05),GSK-3βm RNA表達(dá)量增加(P0.05)。結(jié)論:(1)GDF-5聯(lián)合淫羊藿素能夠誘導(dǎo)大鼠BMSCs成軟骨分化,其中ICT起促進(jìn)作用。(2)Wnt/β-catenin信號(hào)通路在GDF-5聯(lián)合淫羊藿素誘導(dǎo)大鼠BMSCs成軟骨分化過(guò)程中發(fā)揮正向調(diào)控作用。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R684

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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本文編號(hào)：1297501