目的與背景:由外傷、腫瘤、拔牙后牙槽骨吸收等原因?qū)е碌难啦酃侨睋p將直接影響患者心身健康,也成為口腔各�？漆t(yī)生急需解決的問題。近幾年出現(xiàn)的骨組織工程技術(shù)有可能解決這一難題,那么如何研制出可血管化、成骨效率高、對機(jī)體毒副作用小的組織工程骨自然成了目前研究的熱點(diǎn)及焦點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞(HPMSCs)作為種子細(xì)胞,Bio-oss骨粉作為支架材料共同培養(yǎng)欲構(gòu)建組織工程骨。近年對骨組織工程種子細(xì)胞的研究多集中在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,國內(nèi)外對人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞的研究較少。它是通過體外對胎盤的分離提取出的具有干細(xì)胞特點(diǎn)的一類間充質(zhì)細(xì)胞,具有供應(yīng)充足,取材方便,不受倫理學(xué)約束的優(yōu)點(diǎn)。Bio-oss小牛無機(jī)骨粉顆粒是一種已經(jīng)應(yīng)用于臨床治療的生物材料,經(jīng)過眾多學(xué)者研究證明它具有較好的孔隙率及生物相容性。因此,本實(shí)驗(yàn)將人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞與Bio-oss結(jié)合,觀察人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞(HPMSCs)與Bio-oss骨粉結(jié)合后的增殖分化情況,探討以人胎盤源干細(xì)胞(HPMSCs)作為種子細(xì)胞,Bio-oss骨粉作為支架材料聯(lián)合構(gòu)建組織工程化生物衍生骨的可能性。實(shí)驗(yàn)方法:無菌條件下采用原代細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù)獲得人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞,在CO2常溫孵育箱中進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)。分別采用以下方法進(jìn)行檢測:(1)第三代細(xì)胞采用MTT方法連續(xù)8天進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測,觀察細(xì)胞形態(tài)及生長特點(diǎn)。(2)在成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)下進(jìn)行成骨細(xì)胞誘導(dǎo),21天后進(jìn)行茜素紅染色觀察,并將細(xì)胞分為成骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)組和基礎(chǔ)培養(yǎng)對照組組,在誘導(dǎo)第3天、7天、14天三個(gè)時(shí)間點(diǎn)對兩組細(xì)胞進(jìn)行堿性磷酸酶(ALP)檢測,比較實(shí)驗(yàn)組和對照組的成骨分化情況。(3)成脂誘導(dǎo)液下進(jìn)行成脂肪細(xì)胞誘導(dǎo),21天后紅油O染色觀察。(4)將第三代細(xì)胞分為實(shí)驗(yàn)組與對照組,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞與Biooss骨粉復(fù)合培養(yǎng),對照組細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng),在培養(yǎng)第2、4、6、8天采用MTT方法檢測兩組細(xì)胞增殖情況,采用BCA方法檢測蛋白含量,ALP檢測細(xì)胞堿性磷酸酶含量。結(jié)果:1.連續(xù)8天MTT結(jié)果顯示:隨著細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間的增加,OD值逐漸變大,表明細(xì)胞逐漸增多。2.成骨誘導(dǎo)后可見紅色鈣結(jié)節(jié),且ALP檢測結(jié)果顯示誘導(dǎo)組細(xì)胞堿性磷酸酶含量高于非誘導(dǎo)組。成脂誘導(dǎo)后可見明顯脂滴。3.MTT、ALP及BCA結(jié)果顯示:細(xì)胞與骨粉結(jié)合后實(shí)驗(yàn)組與對照組檢測值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞與Bio-oss骨粉結(jié)合后細(xì)胞增殖分化等生物特性與單獨(dú)細(xì)胞培養(yǎng)組無顯著性差異。因此,以人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞作為種子細(xì)胞與Bio-oss骨粉結(jié)合構(gòu)成組織工程骨是可行的。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：R783.1
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
中英文詞對照表
第1章 引言
第2章 實(shí)驗(yàn)研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 設(shè)備與儀器
        2.1.2 試劑與材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 MTT法繪制細(xì)胞生長曲線
        2.2.3 細(xì)胞誘導(dǎo)分化
        2.2.4 人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞（HPMSCs）與Bio-oss骨粉復(fù)合培養(yǎng)
        2.2.5 MTT法檢測復(fù)合培養(yǎng)后兩組細(xì)胞增殖情況
        2.2.6 BCA法檢測復(fù)合培養(yǎng)后兩組細(xì)胞內(nèi)蛋白含量
        2.2.7 ALP法檢測復(fù)合培養(yǎng)后兩組細(xì)胞堿性磷酸酶含量
        2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 HPMSCs形態(tài)學(xué)觀察
    3.2 細(xì)胞生長曲線
    3.3 成骨誘導(dǎo)后定性定量分析
        3.3.1 誘導(dǎo)后茜素紅染色
        3.3.2 誘導(dǎo)后細(xì)胞內(nèi)ALP定量檢測
    3.4 成脂誘導(dǎo)后紅油O染色
    3.5 Bio-oss骨粉與HPMSCs復(fù)合培養(yǎng)后兩組細(xì)胞比較
        3.5.1 Bio-oss骨粉與HPMSCs復(fù)合培養(yǎng)后細(xì)胞的增殖情況檢測
        3.5.2 Bio-oss骨粉與HPMSCs復(fù)合培養(yǎng)后細(xì)胞內(nèi)總蛋白含量檢測
        3.5.3 Bio-oss骨粉與HPMSCs復(fù)合培養(yǎng)后細(xì)胞內(nèi)ALP含量檢測
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 本刊編輯部;;我國首家間充質(zhì)干細(xì)胞庫在天津落成[J];中國藥業(yè);2006年07期

2 張鑫;趙桂秋;;間充質(zhì)干細(xì)胞在眼科領(lǐng)域的研究與應(yīng)用[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年06期

3 史春夢;;間充質(zhì)干細(xì)胞表述中需要注意的幾個(gè)問題[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年14期

4 瞿海龍;邊劍飛;張冰;王穎;周英蓮;;間充質(zhì)干細(xì)胞臨床應(yīng)用的前景與困惑[J];醫(yī)學(xué)研究與教育;2011年05期

5 郭子寬;;間充質(zhì)干細(xì)胞及其臨床應(yīng)用中的幾個(gè)問題[J];中國組織工程研究;2012年01期

6 李炳堯;武曉云;吳巖;;間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與培養(yǎng):從實(shí)驗(yàn)室到臨床[J];中國組織工程研究;2013年14期

7 吳實(shí);鄧列華;;皮膚間充質(zhì)干細(xì)胞在促進(jìn)皮膚愈合中的作用[J];實(shí)用皮膚病學(xué)雜志;2013年03期

8 吳清法,王立生,吳祖澤;間充質(zhì)干細(xì)胞的來源及臨床應(yīng)用[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2002年03期

9 黃定強(qiáng);間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(耳鼻咽喉科學(xué)分冊);2003年03期

10 付文玉,路艷蒙,喬東訪,樸英杰;運(yùn)用組織工程學(xué)原理構(gòu)建間充質(zhì)干細(xì)胞的三維培養(yǎng)體系[J];濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王皓;五指山小型豬OCT-4、SOX-2基因在骨髓間充質(zhì)與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞中的過表達(dá)研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

2 孔德曉;間充質(zhì)干細(xì)胞及胰島素分泌細(xì)胞治療糖尿病的臨床及應(yīng)用基礎(chǔ)研究[D];山東大學(xué);2015年

3 董苑;SDF-1復(fù)合PDPBB的構(gòu)建及對間充質(zhì)干細(xì)胞趨化影響的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

4 王磊;誘導(dǎo)胎盤來源間充質(zhì)干細(xì)胞向成牙骨質(zhì)細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

5 房賀;連接黏附分子A在促進(jìn)MSC修復(fù)CC14肝損傷中的作用及其機(jī)制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 陳潔;間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對急性肺損傷小鼠的影響及相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

7 許婷;轉(zhuǎn)化生長因子β1在蟑螂過敏原誘導(dǎo)的哮喘中對間充質(zhì)干細(xì)胞募集遷移的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

8 周雅麗;攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞對胃癌化療效果的影響及其機(jī)制研究[D];蘭州大學(xué);2015年

9 沈舒寧;CKIP-1負(fù)調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 姚惟琦;脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性腎損傷[D];武漢大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李超;小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中AC基因亞型的表達(dá)及AC3對其纖毛長度的影響[D];河北大學(xué);2015年

2 林濤;殼聚糖水凝膠復(fù)合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 彭龍英;心肌營養(yǎng)素1促進(jìn)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)分化存活及PI3K/Akt信號通路機(jī)制研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

4 喬曉慧;酸性環(huán)境對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的影響[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

5 張紅霞;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、鑒定及其對人肺癌細(xì)胞惡性表型的影響[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

6 顧立超;BTK抑制劑對間充質(zhì)干細(xì)胞miR-21的調(diào)節(jié)作用[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

7 王文杰;鴨胚間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其移植修復(fù)肝損傷研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

8 張猛;血管內(nèi)皮前體細(xì)胞對間充質(zhì)干細(xì)胞分化潛能的影響[D];石河子大學(xué);2015年

9 馬麗媛;利用MyoD基因誘導(dǎo)綿羊臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成肌細(xì)胞的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

10 宋維文;MicroRNA-133誘導(dǎo)綿羊間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成肌細(xì)胞的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

本文編號：2869741