目的與背景:由外傷、腫瘤、拔牙后牙槽骨吸收等原因?qū)е碌难啦酃侨睋p將直接影響患者心身健康,也成為口腔各�？漆t(yī)生急需解決的問(wèn)題。近幾年出現(xiàn)的骨組織工程技術(shù)有可能解決這一難題,那么如何研制出可血管化、成骨效率高、對(duì)機(jī)體毒副作用小的組織工程骨自然成了目前研究的熱點(diǎn)及焦點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞(HPMSCs)作為種子細(xì)胞,Bio-oss骨粉作為支架材料共同培養(yǎng)欲構(gòu)建組織工程骨。近年對(duì)骨組織工程種子細(xì)胞的研究多集中在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,國(guó)內(nèi)外對(duì)人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞的研究較少。它是通過(guò)體外對(duì)胎盤的分離提取出的具有干細(xì)胞特點(diǎn)的一類間充質(zhì)細(xì)胞,具有供應(yīng)充足,取材方便,不受倫理學(xué)約束的優(yōu)點(diǎn)。Bio-oss小牛無(wú)機(jī)骨粉顆粒是一種已經(jīng)應(yīng)用于臨床治療的生物材料,經(jīng)過(guò)眾多學(xué)者研究證明它具有較好的孔隙率及生物相容性。因此,本實(shí)驗(yàn)將人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞與Bio-oss結(jié)合,觀察人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞(HPMSCs)與Bio-oss骨粉結(jié)合后的增殖分化情況,探討以人胎盤源干細(xì)胞(HPMSCs)作為種子細(xì)胞,Bio-oss骨粉作為支架材料聯(lián)合構(gòu)建組織工程化生物衍生骨的可能性。實(shí)驗(yàn)方法:無(wú)菌條件下采用原代細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù)獲得人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞,在CO2常溫孵育箱中進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)。分別采用以下方法進(jìn)行檢測(cè):(1)第三代細(xì)胞采用MTT方法連續(xù)8天進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè),觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)特點(diǎn)。(2)在成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)下進(jìn)行成骨細(xì)胞誘導(dǎo),21天后進(jìn)行茜素紅染色觀察,并將細(xì)胞分為成骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)組和基礎(chǔ)培養(yǎng)對(duì)照組組,在誘導(dǎo)第3天、7天、14天三個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)兩組細(xì)胞進(jìn)行堿性磷酸酶(ALP)檢測(cè),比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的成骨分化情況。(3)成脂誘導(dǎo)液下進(jìn)行成脂肪細(xì)胞誘導(dǎo),21天后紅油O染色觀察。(4)將第三代細(xì)胞分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞與Biooss骨粉復(fù)合培養(yǎng),對(duì)照組細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng),在培養(yǎng)第2、4、6、8天采用MTT方法檢測(cè)兩組細(xì)胞增殖情況,采用BCA方法檢測(cè)蛋白含量,ALP檢測(cè)細(xì)胞堿性磷酸酶含量。結(jié)果:1.連續(xù)8天MTT結(jié)果顯示:隨著細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間的增加,OD值逐漸變大,表明細(xì)胞逐漸增多。2.成骨誘導(dǎo)后可見(jiàn)紅色鈣結(jié)節(jié),且ALP檢測(cè)結(jié)果顯示誘導(dǎo)組細(xì)胞堿性磷酸酶含量高于非誘導(dǎo)組。成脂誘導(dǎo)后可見(jiàn)明顯脂滴。3.MTT、ALP及BCA結(jié)果顯示:細(xì)胞與骨粉結(jié)合后實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組檢測(cè)值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞與Bio-oss骨粉結(jié)合后細(xì)胞增殖分化等生物特性與單獨(dú)細(xì)胞培養(yǎng)組無(wú)顯著性差異。因此,以人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞作為種子細(xì)胞與Bio-oss骨粉結(jié)合構(gòu)成組織工程骨是可行的。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：R783.1
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
中英文詞對(duì)照表
第1章 引言
第2章 實(shí)驗(yàn)研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 設(shè)備與儀器
        2.1.2 試劑與材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
        2.2.3 細(xì)胞誘導(dǎo)分化
        2.2.4 人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞（HPMSCs）與Bio-oss骨粉復(fù)合培養(yǎng)
        2.2.5 MTT法檢測(cè)復(fù)合培養(yǎng)后兩組細(xì)胞增殖情況
        2.2.6 BCA法檢測(cè)復(fù)合培養(yǎng)后兩組細(xì)胞內(nèi)蛋白含量
        2.2.7 ALP法檢測(cè)復(fù)合培養(yǎng)后兩組細(xì)胞堿性磷酸酶含量
        2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 HPMSCs形態(tài)學(xué)觀察
    3.2 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
    3.3 成骨誘導(dǎo)后定性定量分析
        3.3.1 誘導(dǎo)后茜素紅染色
        3.3.2 誘導(dǎo)后細(xì)胞內(nèi)ALP定量檢測(cè)
    3.4 成脂誘導(dǎo)后紅油O染色
    3.5 Bio-oss骨粉與HPMSCs復(fù)合培養(yǎng)后兩組細(xì)胞比較
        3.5.1 Bio-oss骨粉與HPMSCs復(fù)合培養(yǎng)后細(xì)胞的增殖情況檢測(cè)
        3.5.2 Bio-oss骨粉與HPMSCs復(fù)合培養(yǎng)后細(xì)胞內(nèi)總蛋白含量檢測(cè)
        3.5.3 Bio-oss骨粉與HPMSCs復(fù)合培養(yǎng)后細(xì)胞內(nèi)ALP含量檢測(cè)
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝

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本文編號(hào)：2869741