發(fā)布時(shí)間：2020-06-25 06:11

【摘要】：目的:碳納米管可用于藥物(核酸)遞送載體、引導(dǎo)組織再生支架、醫(yī)療器械改性和涂層等生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。值得注意的是,碳納米管在制備或后續(xù)處理過(guò)程中有可能吸附環(huán)境中的內(nèi)毒素,造成內(nèi)毒素污染,不僅關(guān)系到消費(fèi)者的生命安全,而且會(huì)影響或干擾碳納米管的生物醫(yī)學(xué)效應(yīng)。我國(guó)對(duì)臨床使用的醫(yī)療器械中的內(nèi)毒素含量有十分嚴(yán)格的規(guī)定,要求其水平必須低于一定限度。鱟試劑法是中國(guó)藥典、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織(ISO)以及世界衛(wèi)生組織明確規(guī)定的內(nèi)毒素檢查方法,能否應(yīng)用鱟試劑法檢測(cè)碳納米管的內(nèi)毒素水平尚未有文獻(xiàn)報(bào)道。已知碳納米管對(duì)多種蛋白分子都有強(qiáng)烈的吸附作用,但是與鱟試劑中蛋白分子的相互作用尚不清楚。本研究制備了無(wú)內(nèi)毒素的碳納米管分散液,系統(tǒng)研究了碳納米管對(duì)鱟試劑檢測(cè)法的影響以及與鱟蛋白分子相互作用機(jī)制。方法:根據(jù)ISO 29701:2010(E)規(guī)定的方法,將經(jīng)過(guò)高壓滅菌處理的氧化多壁碳納米管(O-MWCNT)粉末在250℃下加熱45 min,以去除O-MWCNT的外源性內(nèi)毒素。在超凈臺(tái)中,利用超聲分散儀將無(wú)內(nèi)毒素的O-MWNCT分散到無(wú)熱原水中,得到無(wú)熱原的O-MWNCT分散液(Os-MWCNT)。利用紫外-可見(jiàn)-近紅外光譜儀(UV-Vis-NIR)對(duì)Os-MWCNT分散液在200-800 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的消光光譜進(jìn)行檢測(cè);采用動(dòng)態(tài)光散射儀(DLS)檢測(cè)Os-MWCNT分散液的水合粒徑及電勢(shì)值。用凝膠法及終點(diǎn)顯色法鱟試劑對(duì)不同濃度Os-MWCNT分散液內(nèi)毒素含量進(jìn)行檢測(cè)。用牛血清蛋白封閉Os-MWCNT的表面后,利用終點(diǎn)顯色法鱟試劑分析封閉表面后對(duì)Os-MWCNT與鱟試劑相互作用的影響。利用SDS凝膠電泳分析Os-MWCNT與鱟蛋白分子的相互作用。此外,應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室前期建立的基于UV-Vis-NIR(紫外-可見(jiàn)-近紅外)消光光譜的碳納米管水溶液表征和計(jì)量方法,對(duì)企業(yè)生產(chǎn)的不同多壁碳納米管的分散液進(jìn)行消光光譜檢測(cè),利用Origin軟件對(duì)特征峰進(jìn)行分峰擬合處理,分析各批次產(chǎn)品的光譜特征。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,無(wú)內(nèi)毒素的Os-MWCNT分散液可激活鱟試劑,導(dǎo)致凝膠形成和顯色基質(zhì)釋放,與內(nèi)毒素引起的鱟試劑陽(yáng)性反應(yīng)相同;且這種陽(yáng)性反應(yīng)具有碳納米管濃度依賴性。另一方面,當(dāng)使用鱟試劑檢測(cè)水溶液中已知濃度的內(nèi)毒素時(shí),Os-MWCNT分散液也會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響,使檢出結(jié)果高于實(shí)際內(nèi)毒素濃度。碳納米管對(duì)鱟試劑的激活作用與其表面對(duì)鱟試劑蛋白酶原的吸附作用密切相關(guān),可能通過(guò)引起蛋白酶原的構(gòu)象變化而觸發(fā)鱟試劑的級(jí)聯(lián)活化過(guò)程;當(dāng)Os-MWCNT分散液濃度高于0.01μg/mL時(shí),可引起明顯的凝固蛋白原向凝固蛋白的轉(zhuǎn)化。采用血清蛋白吸附封閉碳納米管表面,可顯著抑制其誘導(dǎo)的鱟蛋白酶級(jí)聯(lián)活化作用。此外,多壁碳納米管在200-300nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)有特征峰,隨著碳納米管濃度的增加,特征峰的強(qiáng)度也相應(yīng)增加。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,不同生產(chǎn)工藝和參數(shù)的碳納米管產(chǎn)品,其分散液具有不同的紫外-可見(jiàn)特征峰。利用Origin分峰軟件可以將特征峰分為3個(gè)擬合峰,各峰位與碳納米管的長(zhǎng)度和氧化程度具有相關(guān)性。結(jié)論:無(wú)內(nèi)毒素的Os-MWCNT通過(guò)表面吸附作用激活鱟試劑蛋白酶原的級(jí)聯(lián)活化反應(yīng),誘導(dǎo)凝膠法及終點(diǎn)顯色法鱟試劑發(fā)生假陽(yáng)性反應(yīng);且反應(yīng)強(qiáng)度與Os-MWCNT的濃度正相關(guān)。多壁碳納米管的UV-Vis-NIR消光光譜具有紫外-可見(jiàn)特征峰,所包含的擬合峰峰位與碳納米管的長(zhǎng)度和氧化程度有關(guān)聯(lián),并且一定程度上可以對(duì)不同碳納米管產(chǎn)品進(jìn)行區(qū)分。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R318
【圖文】：

（０－ＭＷＣＮＴ）粉末進(jìn)行處理，以去除外源性內(nèi)毒素。在超凈臺(tái)中，將加熱處理后逡逑０－ＭＷＣＮＴ粉末利用超聲處理，使其分散到無(wú)熱原水中，離心后取上部穩(wěn)定分散溶逡逑液，得到不含外源性內(nèi)毒素的Ｏｓ－ＭＷＣＮＴ分散液（圖３－１）。逡逑＾一＇＾超聲、離心邐ｆ邋￣－Ｎ逡逑Ｏ邋ＭＷｒＮＴ邋２５０邋＃Ｃ邋＇邋４５邋ｍ［ｎ邐取上部穩(wěn)定分散溶液逡逑．粉末邐ＩＢ逡逑無(wú)熱原水邐Ｏｓ－ＭＷＣＮＴ逡逑分散液逡逑圖３－１邋Ｏｓ－ＭＷＣＮＴ分散液制備流程圖逡逑利用紫外－可見(jiàn)－近紅外（ＵＶ－Ｖｉｓ－ＮＩＲ）光譜儀對(duì)Ｏｓ－ＭＷＣＮＴ分散液在２００－８００逡逑ｎｍ波長(zhǎng)范圍內(nèi)的消光光譜進(jìn)行檢測(cè)。如圖３－２所示，Ｏｓ－ＭＷＣＮＴ在２００－３００邋ｎｍ波逡逑長(zhǎng)范圍內(nèi)有特征峰；隨著Ｏｓ－ＭＷＣＮＴ濃度的增加，分散液特征峰的強(qiáng)度也相應(yīng)增逡逑加。逡逑２４逡逑

（０－ＭＷＣＮＴ）粉末進(jìn)行處理，以去除外源性內(nèi)毒素。在超凈臺(tái)中，將加熱處理后逡逑０－ＭＷＣＮＴ粉末利用超聲處理，使其分散到無(wú)熱原水中，離心后取上部穩(wěn)定分散溶逡逑液，得到不含外源性內(nèi)毒素的Ｏｓ－ＭＷＣＮＴ分散液（圖３－１）。逡逑＾一＇＾超聲、離心邐ｆ邋￣－Ｎ逡逑Ｏ邋ＭＷｒＮＴ邋２５０邋＃Ｃ邋＇邋４５邋ｍ［ｎ邐取上部穩(wěn)定分散溶液逡逑．粉末邐ＩＢ逡逑無(wú)熱原水邐Ｏｓ－ＭＷＣＮＴ逡逑分散液逡逑圖３－１邋Ｏｓ－ＭＷＣＮＴ分散液制備流程圖逡逑利用紫外－可見(jiàn)－近紅外（ＵＶ－Ｖｉｓ－ＮＩＲ）光譜儀對(duì)Ｏｓ－ＭＷＣＮＴ分散液在２００－８００逡逑ｎｍ波長(zhǎng)范圍內(nèi)的消光光譜進(jìn)行檢測(cè)。如圖３－２所示，Ｏｓ－ＭＷＣＮＴ在２００－３００邋ｎｍ波逡逑長(zhǎng)范圍內(nèi)有特征峰；隨著Ｏｓ－ＭＷＣＮＴ濃度的增加，分散液特征峰的強(qiáng)度也相應(yīng)增逡逑加。逡逑２４逡逑

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 許文福;聞建;;東方鱟試劑中試生產(chǎn)工藝的研制、靈敏度測(cè)定和應(yīng)用[J];中草藥;1981年06期

2 許文福;;福建省鱟試劑鑒定會(huì)在廈門召開(kāi)[J];中草藥;1980年06期

3 劉端華;許文福;;東方鱟試劑質(zhì)量和中試工藝的研究鑒定會(huì)在福州召開(kāi)[J];中草藥;1983年01期

4 劉端華;林嘉富;鄭麗莉;王立克;柯春生;;東方鱟人工飼養(yǎng)抽血制備鱟試劑的實(shí)驗(yàn)考察[J];中草藥;1983年07期

5 丁友玲;林秀明;賈海冰;劉瑞華;翁水旺;;影響東方鱟試劑質(zhì)量因素[J];中草藥;1985年01期

6 沈燕;馬珠鳳;周靜芳;;鱟試劑法檢測(cè)參麥針中熱源的可行性探討[J];中草藥;1993年03期

7 楊卓;;建立鱟試劑法檢測(cè)雙黃連粉針劑中細(xì)菌內(nèi)毒素的方法[J];科技與企業(yè);2013年10期

8 林竹;;勇于創(chuàng)新的巾幗英雄——記中國(guó)新型鱟試劑創(chuàng)始人丁友玲[J];民營(yíng)科技;2007年08期

9 肖連玉;韓鳳華;孫中志;;鱟試劑用于微生物限度的快速檢驗(yàn)[J];中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2007年09期

10 深泉;丁友玲與鱟試劑[J];前進(jìn)論壇;2004年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 馬春華;殷馨;王麗娥;姜玉紅;崔寧;李玲;;鱟試劑法檢測(cè)注射用奧美拉唑鈉中細(xì)菌內(nèi)毒素[A];2006年全國(guó)生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

2 田莉;何毅;;用鱟試劑檢測(cè)血液保存液中的熱原[A];中國(guó)輸血協(xié)會(huì)第三屆輸血大會(huì)論文專輯[C];2004年

3 游伯翔;;鱟試劑方法檢測(cè)硫酸卷曲霉素中細(xì)菌內(nèi)毒素[A];2004年中國(guó)西部藥學(xué)論壇論文匯編（上冊(cè)）[C];2004年

4 張虞婷;丁蘇蘇;李倚云;;細(xì)菌內(nèi)毒素的研究進(jìn)展及其檢查法的應(yīng)用[A];2014年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十四屆中國(guó)藥師周論文集[C];2014年

5 趙慶麗;廖學(xué)均;;動(dòng)態(tài)濁度法定量檢測(cè)愛(ài)欣森注射液中細(xì)菌內(nèi)毒素[A];'2004天津市第十六屆色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2004年

6 周素文;;細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法常見(jiàn)問(wèn)題與探討[A];湖北省藥學(xué)會(huì)第十一屆會(huì)員代表大會(huì)暨2007年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

7 張曉蓮;張婷婷;姜素云;;硫酸鏈霉素細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法[A];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

8 張震;;鱟試劑用于化妝品中細(xì)菌限度的快速檢查[A];第六屆中國(guó)臨床微生物學(xué)大會(huì)暨微生物學(xué)與免疫學(xué)論壇論文匯編[C];2015年

9 盧文斌;池秀珍;;動(dòng)態(tài)濁度法測(cè)定利巴韋林注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素含量[A];2010年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國(guó)藥師周論文集[C];2010年

10 夏曙輝;徐金華;王銀娟;錢琳娜;;20AA復(fù)方氨基酸注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的實(shí)驗(yàn)研究[A];2008年中國(guó)藥學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)暨第八屆中國(guó)藥師周論文集[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 李守申 山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司;淺析細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)中鱟試劑差異對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2015年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 李京華;親和膜分離器的設(shè)計(jì)、藥品中內(nèi)毒素的去除和鱟試劑靈敏度的測(cè)定方法研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（大連化學(xué)物理研究所）;2003年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前7條

1 聶欣;多壁碳納米管激活鱟試劑反應(yīng)及其消光光譜的應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2018年

2 張莎莎;香菇多糖脂質(zhì)體藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布研究[D];華中科技大學(xué);2010年

3 呂名蕊;磷脂酰膽堿富集及熱原去除的研究[D];江南大學(xué);2010年

4 姜彥雨;山羊產(chǎn)后子宮感染的內(nèi)毒素濃度變化及脂多糖治療的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

5 岳麗娜;細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)中問(wèn)題的研究[D];大連理工大學(xué);2005年

6 竇永青;中藥黃芩有效成分黃芩苷降解細(xì)菌內(nèi)毒素的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

7 劉紅俠;頭孢替唑鈉熱原檢測(cè)方法可行性研究[D];西北大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2728973